中藥熱奄包對兔膝骨關節炎關節滑液CRP、IL-1、TNF-α的影響

吳紅 王嵐 朱業崇

(1.貴陽中醫學院第二附屬醫院，貴州 貴陽 550003；2.貴陽中醫學院，貴州 貴陽 550001)

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中藥熱奄包對兔膝骨關節炎關節滑液CRP、IL-1、TNF-α的影響

吳紅1王嵐1朱業崇2

(1.貴陽中醫學院第二附屬醫院，貴州 貴陽 550003；2.貴陽中醫學院，貴州 貴陽 550001)

中藥熱奄包； 兔； 膝； 骨關節炎； C-反應蛋白; 白細胞介素-1; 腫瘤壞死因子-α

膝骨關節炎(KOA) ，又稱增生性膝關節炎、退行性骨關節炎等，是一種以膝關節關節軟骨的變性、破壞及骨質增生為病理特點的慢性關節病，膝關節腫脹疼痛、功能障礙甚至畸形為主要臨床表現,現已成為嚴重影響中老年人生活質量的疾病之一[1]。因此,研究該病的治療意義重大。已有研究[2]表明，KOA關節液中炎性介質對滑膜炎癥的發展和軟骨基質的破壞具有重要作用，而隨著KOA病情的變化,關節液中的炎性介質的含量亦發生改變[3]。本研究旨在觀察中藥熱奄包對兔膝骨關節骨液C-反應蛋白(CRF)、白細胞介素-1(IL-1)、腫瘤壞死因子(TNF-α)的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 實驗動物：新西蘭大白兔60只，雌雄各30只，體質量(2.0±0.4) kg，一次性購置于貴陽市動物實驗中心。動物分組：60只新西蘭大白兔采用單純隨機方法分為對照組、治療組、空白組,每組各20只。每天常規飼養,室溫15～25 ℃，空氣流通，定時喂食、自由飲水。實驗藥品：中藥熱奄包(附方：紅花15 g、防風15 g、花椒10 g、艾葉20 g、伸筋草15 g、草烏20 g、桂枝10 g、川芎13 g、大血藤12 g、澤蘭10 g、木瓜10 g、牛膝15 g、透骨草10 g、當歸10 g、蘇木10 g):貴陽中醫二附院骨一科提供。木瓜蛋白酶:上海依赫生物科技有限公司生產，國藥準字H20060802；；鹽酸氨基葡萄糖片：江蘇正大清江制藥有限公司生產，國藥準字H21060840；利多卡因、酒精、生理鹽水:購于貴陽中醫二附院藥房。

1.2 主要試劑及儀器 CRP、IL-1、TNF-α試劑盒: 由貴陽市化學試劑批發公司一次性購入；電子天平(ME2355型，SARTORIUS公司)，系列可調節移液器及吸頭、KDC-40低速離心機、快速混勻器、一次性無菌注射器、兔固定臺、冰箱等,由貴陽中醫學院實驗中心提供。

1.3 方法 造模方法：適應性喂養7 d后,按照兔膝關節腔內注射木瓜蛋白酶造成骨關節病變模型的方法對所有動物進行造模。方法為:正常飼養1周后, 將所有兔子的右后肢膝前區剪毛、消毒后，將0.5%利多卡因注射到動物右后肢膝前區周圍進行局部麻醉，待麻醉生效后,屈曲膝關節45°以髕骨下極髕腱外緣為進針點，向髁間窩方向進針，抵達股骨髁后后撤2 mm，向膝關節腔內注入1.6%木瓜蛋白酶溶液1 mL，分別于造模實驗的第1，4，7天注射，共3次，每次劑量均為1 mL。術中注意盡量不刺激關節軟骨及滑膜。于第3次注射完畢后，對60只大白兔右膝關節照射X線片，以確定獲得穩定的退行性膝骨關節炎模型。給藥方法：確定造模成功后，治療組造模膝關節外敷中藥熱奄包(中藥熱奄包按照上述配方要求取量，置清水中浸泡12 h，煎煮20 min，將毛巾置于藥液中浸漬待用),用浸漬藥液的毛巾包裹造模關節表面,每日早晚各1次，30 min/次；對照組予以鹽酸氨基葡萄糖片灌服，每日早晚各1次，1片/次；空白組造模后不給于任何特殊處理，僅常規飼養。

1.4 觀測指標 經4周治療后，所有兔子均在耳緣靜脈處注射空氣30 mL,快速處死后固定于解剖架上,造模膝關節快速消毒；切開造模膝關節，用生理鹽水沖洗關節，收集沖洗液，用免疫組化方法檢測各組沖洗液中CRP、IL-1、TNF-α的水平,將關節混合液置6 000 r/min離心8 min,吸出上清液約0.5mL,裝入試管中,置-20 ℃低溫冰箱保存待測。關節液的CRP、IL-1、TNF-α含量按試劑盒內說明書進行測定。

2 結 果

造模后的兔子均有精神欠佳,食量減少,部分出現跛行,未做特殊處理。造模3 d后精神、食量逐漸恢復。三組各數據均滿足正態分布，且具有方差齊性，兔膝骨關節炎時，關節滑液中CRP、IL-1、TNF-α水平較高，可間接說明造模成功；通過不同方法治療后，治療組、對照組與空白組比較差異有統計學意義(P<0.05)，說明兩種治療方法均能降低兔膝骨關節炎關節液中CRP、IL-1、TNF-α含量，即能抑制關節液中的炎性因子；治療組和對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)，可間接說明中藥熱奄包治療兔膝骨關節炎具有明確的治療作用。見表1。

表1 三組兔膝關節液中CRP、IL-1、TNF-α含量的比較

3 討 論

KOA發病機理目前尚未清楚,一般都認為其與衰老、創傷、炎癥、肥胖、代謝障礙、免疫異常和遺傳等多因素的變化有關[4-5]。KOA臨床發病率較高,目前對其治療主要集中在藥物鎮痛、軟骨修復及后期外科手術干預上,其治療目前尚無特效的方法,只能治療癥狀和延緩疾病的進程。因此,對本病的治療已被醫療界所重視。已有研究[6-7]表明，隨著KOA病情的加重,關節液中CRP、IL-1、TNF-α含量明顯增加,顯示出二者存在明顯的相關性。實驗中通過測定兔膝骨關節炎關節液中CRP、IL-1、TNF-α的含量來探討中藥熱奄包對膝骨關節炎的治療機制,同時利用關節液中CRP、IL-1、TNF-α含量的變化反映病情嚴重程度亦具有一定的研究價值，可作為下一步研究的重點。

目前中醫藥在治療KOA上方法多種多樣,如內服中藥、中藥外敷、針灸、針刀等。課題中選用的中藥熱奄包屬于中醫外治法中的中藥外敷，因此具有中醫外治法的毒副作用小、可長期使用等獨特的優勢而被廣泛應用并取得較好的臨床療效。武鈺等[8]通過中藥熱敷的方法治療退行性膝骨關節炎,以外治之法、治內之病，取得滿意的臨床療效。譚銳泉等[9]用中藥熨燙外治法治療膝骨關節炎60例，總有效率達到93.3%，其總有效率明顯高于對照組的西藥治療且毒副作用小。

KOA屬于中醫的“痹癥”范疇，中醫認為“痹癥”是由于“風寒濕三氣雜致、合而為痹”，所以中醫在治療時主要是在于祛風除濕、溫經散寒、活血化瘀、疏通經絡止痛，研究中的中藥熱奄包由紅花、防風、花椒、艾葉、伸筋草、草烏、桂枝、川芎、大血藤、澤蘭、木瓜、牛膝、透骨草、當歸、蘇木組成。方中紅花、花椒、大血藤、澤蘭活血祛瘀消腫；木瓜、伸筋草舒經活絡；防風、草烏、川芎、透骨草、花椒祛風散寒除濕止痛；桂枝、艾葉、大血藤溫經通脈；牛膝、當歸滋補肝腎；全方共奏祛風除濕、溫經散寒、活血化瘀、疏通經絡止痛之效。現代藥理學研究[10]表明，紅花、花椒、大血藤、澤蘭能夠明顯的抑制血小板活性和血栓形成，；防風、川芎、草烏、透骨草、花椒中含有鎮痛作用的揮發油成分和生物堿成分；木瓜、伸筋草有較強的抗菌作用；桂枝、艾葉、大血藤能加快機體血液循環的速度，從而起到活血化瘀的療效；牛膝、當歸可保護腎臟的功能，同時具有消炎鎮痛的作用。外敷祛風除濕、溫經散寒、活血化瘀、疏通經絡止痛之中藥熱奄包,可能通過調節關節液中的變異的細胞因子、消滅多余的氧自由基而抑制炎癥介質,進一步改善關節腔內微循環和代謝,減低骨內及關節內壓力,促進關節積液吸收,保護關節軟骨的退變過程,同時有利于關節軟骨的修復,從而對KOA起到一定的治療作用。

[1] 胥少汀,葛寶豐,徐印坎.實用骨科學[M].4版.北京:人民軍醫出版社,2014：1201-1202.

[2] 張延輝，高春陽，李少華.骨性關節炎患者退變軟骨及滑膜組織中細胞因子的表達[J].中國組織工程研究，2013，17(37):6671-6675.

[3] 管興發,董金波,王維山,等.骨關節炎患者血清及關節液中TNF-A與MMP-3含量及臨床意義[J].青島醫藥衛生,2013,40(1):9-12.

[4] 申延清，劉風霞，曹紅，等.膝骨關節炎患者的臨床表現及相關影響因素[J].中國組織工程研究與臨床康復,2011,15(9)：1643-1646.

[5] 王偉，王坤正，黨小謙，等.中老年膝骨關節炎發病的相關因素[J].中國臨床康復,2006,10(44):15-18.

[6] 陳根強,許慧娟,汪志明,等.骨性關節炎患者中血清與關節液的炎性因子水平變化及意義[J].武漢大學學報,2014,35(1)：110-113.

[7] Largo R, Alvarez-Soria MA, Diez-Ortego I, et al. Glucosamine inhibits IL-1beta-induced NFKappa B acti-vation in human osteoarthritic chondrocytes[J] .Osteoarthritis Cartilage, 2003, 11 (4) : 290-298.

[8] 武鈺,朱偉,張戰行,等.中藥濕熱敷法治療膝關節骨性關節炎[J].內蒙古中醫藥,2013,8(3)：41.

[9] 譚銳泉,彭力平.中藥熨燙外治法治療膝骨性關節炎伴滑膜炎60例[J].中國醫藥指南, 2013,11(20),287-288.

[10] 侯家玉，方泰惠.中藥藥理學[M].2版.北京:中國中醫藥出版社，200：121.

貴州省中管局課題(編號：QZYY-2014-035 )

R-332；R274.9

B

1000-744X(2016)11-1144-02

2016-06-20)