EB病毒IgM及DNA檢測在兒童EB病毒感染相關疾病診斷中的應用價值

王紅建 封偉

(衡水市第二人民醫院檢驗科，河北 衡水 053000)

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EB病毒IgM及DNA檢測在兒童EB病毒感染相關疾病診斷中的應用價值

王紅建 封偉

(衡水市第二人民醫院檢驗科，河北 衡水 053000)

目的 研究EB病毒IgM及DNA檢測在兒童EB病毒感染相關疾病診斷中的應用價值。方法 選取80例EBV感染患兒作為觀察組，100例健康兒童作為對照組，所有兒童均檢測EBV-IgM及DNA。比較兩組兒童上述指標的陽性率，并分析EBV-IgM及DNA檢測在兒童EB病毒感染相關疾病中的診斷價值。結果 觀察組EBV-IgM陽性率31.25%，EBV-DNA陽性率36.25%；對照組EBV-IgM陽性率11.00%，EBV-DNA陽性率15.00%，差異具有統計學意義(P<0.05)。EBV-IgM靈敏度31.25%，特異度89.00%，約登指數0.1925；EBV-DNA靈敏度36.25%，特異度85.00%，約登指數0.2125。結論 EB病毒IgM及DNA檢測在兒童EBV感染相關疾病診斷中具有應用價值。

EBV感染； 兒童； EB病毒IgM； EB病毒DNA

EB病毒(EBV)屬于皰疹病毒科，是小兒常見的感染病毒，90%以上的3～5歲兒童曾感染過EBV[1]。該病毒首先在口咽部上皮細胞內增殖，繼而進入呼吸道引起呼吸道感染，并可長期潛伏在組織中并在機體免疫力降低時引起復發感染，感染可累及多系統及器官，患兒臨床表現復雜，容易造成誤診或漏診，給臨床治療工作帶來困難[2]。目前，臨床上多采用EBV抗體定性測定和EBV-DNA定量測定檢測EBV感染，本次研究旨在分析EB病毒IgM及EBV-DNA檢測在兒童EB病毒感染相關疾病中的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年12月至2015年10月期間我院收治的80例患兒作為觀察組，其中男43例，女37例，年齡6個月至14歲，平均(4.1±2.9)歲。80例患兒中，上呼吸道感染者29例，傳染性單核細胞增多癥21例，支氣管炎及肺炎17例，病毒性心肌炎13例。所有患兒均符合以下標準：(1)患兒均因不明原因發熱、咽炎、皮疹、心律失常、肝脾腫大等疑似EB病毒感染的臨床表現；(2)排除其他病原體感染的患兒，如肝炎病毒、人巨細胞病毒、肺炎支原體或肺炎衣原體的感染；(3)所有患兒監護人均自愿參與本次研究，符合醫學倫理學原則。選取同一時期來我院進行疫苗接種的健康兒100例作為對照組，其中男58例，女42例，年齡6個月至13歲，平均(3.8±3.0)歲。兩組的性別、年齡差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 標本采集 所有患兒在未用藥之前于清晨于清晨經抽取空腹血5 mL，置于抗凝管中，標記后保存于-80 ℃冰箱中，批量送檢。

1.3 觀察指標及檢測方法 (1)EB病毒(EBV)的IgM檢查采用酶聯免疫吸附法(ELISA)，試劑盒由上海基兔實業有限公司提供，操作嚴格按照說明書進行。樣本的吸光度值：標準品的吸光度值≥1.1為陽性。(2)EBV-DNA檢查采用熒光定量PCR，引物由上海生工生物工程股份有限公司合成，ABI Prism7300熒光定量PCR儀購自上海迪普生物技術有限公司。將咽拭子或全血標本按照說明書進行處理和DNA提取并加入26 μL的DNA檢測體系中，將反應管放入樣品槽中進行擴增及檢測：循環包括50 ℃預反應2 min，94 ℃預變性5 min，每個循環包括94 ℃ 10 s，60 ℃ 40 s，共進行50個循環。標本熒光強度曲線達到閾值時所需循環數(Ct值)≤39為陽性。比較EBV-IgM及EBV-DNA檢測在不同疾病患兒中的檢出結果。

2 結 果

2.1 不同疾病EBV-IgM及DNA的檢測值 不同疾病患兒的EBV-IgM及EBV-DNA的檢測值的差異具有統計學意義(P<0.05)。見表1

表1 不同疾病EBV-IgM及DNA的檢測值

注：與對照組相比，*P<0.05。

2.2 不同疾病EBV-IgM及DNA的陽性率 不同疾病患兒的EBV-IgM及EBV-DNA陽性率的差異無統計學意義(P>0.05)。患兒的EBV-IgM及DNA檢出率均明顯高于對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同疾病EBV-IgM及DNA的陽性率[n(%)]

注：與對照組相比，*P<0.05。

2.3 EBV-IgM及DNA的診斷價值 EBV-IgM診斷EB感染的靈敏度為32.25%，特異度為89.00%，約登指數0.192 5。EBV-DNA診斷EB病毒感染的靈敏度為36.25%，特異度為85.00，約登指數為0.212 5。

3 討 論

EBV病毒通過空氣-飛沫途徑在人群中傳播，感染者以兒童多見，患者癥狀較為多樣，預后多良好，但免疫力低下者可出現嚴重并發癥[3]。

目前，臨床上最常用的EBV檢測方法是血清學抗體檢測，具有簡便、快捷的優點，其中EBV-IgM是EB病毒感染的患兒在感染后早期即可表現為陽性，一般持續4～8周，是急性感染的可靠指標[4]。熒光定量PCR檢測EBV-DNA是近些年來發展的技術，可以定量反應體內的EBV-DNA水平，并準確反應EB病毒感染和病毒的復制情況。EBV-DNA的載量與器官損害程度及疾病種類、疾病的嚴重程度及病死率呈正相關，臨床上可以根據EB-DNA拷貝數大小來判斷病情嚴重程度，從而進行更好的用藥量的控制，達到理想的治療效果；且其擴增及產物檢測一步完成，整個檢測過程處于全密封環境中，避免產物污染等因素造成的檢測偏差[5-6]。

本次研究分別采取ELISA和熒光定量PCR的方法檢測患兒的EBV-IgM及EBV-DNA水平，結果表明，EBV-IgM表達量及EBV-DNA的Ct值在上呼吸道感染、傳染性單核細胞增多癥、支氣管肺炎及病毒性心肌炎的患兒間存在顯著差異；患兒上述指標的陽性率明顯高于對照組，不同疾病患兒的EBV-IgM及EBV-DNA陽性率無顯著差異，其中上呼吸道感染及支氣管炎肺炎患兒上述指標的陽性率高于傳染性單核細胞增多癥，而病毒性心肌炎患兒EBV-IgM及EBV-DNA陽性率較低。針對不同疾病的患兒，EBV-IgM及EBV-DNA檢測的陽性率無明顯差異，二者靈敏度相近，EBV-DNA檢測略優于EBV-IgM檢測，但EBV-IgM特異度高于EBV-DNA。

對上述指標的診斷價值進行分析： IgM是EBV急性感染的早期指標，但持續時間較短，導致患兒窗口期出現和診斷結果假陰性，且小兒免疫系統尚未完善，病毒不能刺激機體產生相應的能夠達到檢測下限的病毒抗體[7]。不同疾病EBV-DNA的陽性率均明顯高于IgM，其原因可能是部分EBV為條件感染，不能引起足夠強度的免疫反應，而DNA檢測可以檢出這部分感染的患兒[8]。

本次研究結果提示EB病毒IgM及DNA檢測在兒童EBV感染相關疾病診斷中具有應用價值，早期進行上述指標檢測可以減少小兒EBV相關疾病的漏診、誤診，尤其是EBV-DNA在部分疾病的診斷中更為敏感。

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