加熱對肺癌細胞SPC-A-1分泌細胞因子的影響

趙 暉 王 寶 王啟文 趙 鑫

(吉林省腫瘤醫院，吉林 長春 130012)

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加熱對肺癌細胞SPC-A-1分泌細胞因子的影響

趙 暉 王 寶 王啟文 趙 鑫

(吉林省腫瘤醫院，吉林 長春 130012)

目的 探討加熱對肺癌細胞SPC-A-1分泌細胞因子的影響。方法 培養人肺腺癌細胞SPC-A-1至對數生長期，放入恒溫水浴箱加熱，42℃，2 h；復溫0、12、24、48、72 h，取復溫不同時間的SPC-A-1細胞培養上清進行腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-2、干擾素(IFN)-γ、血管內皮生長因子(VEGF)等細胞因子檢測，并與未加熱的SPC-A-1細胞培養上清液進行比較。結果 42℃加熱2 h后復溫不同時間的培養上清液中 IL-2、IFN-γ、TNFα均比未加熱的SPC-A-1有不同程度的提高，VEGF分泌量逐漸下降。結論 42℃加熱2 h可以促進IL-2、IFN-γ、TNFα等抗腫瘤細胞因子分泌的增加，降低VEGF等的分泌。

熱療；肺腺癌細胞；細胞因子

熱療是近年來發展起來的無創傷的腫瘤治療方法。由于在加熱過程中會使血液循環加速、血管擴張，可以使全身及局部血氧量增加，pH值改變，分泌某些促進免疫反應的細胞因子和蛋白，因而可以改善腫瘤的微環境，達到治療腫瘤的目的。本實驗擬探討熱療對腫瘤細胞SPC-A-1分泌細胞因子變化的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 IMDM培養基，GIBCO公司；胎牛血清，北京元亨；人肺癌細胞SPC-A-1，中國科學院上海生命科學院；白細胞介素(IL)-2，干擾素(IFN)-γ，腫瘤壞死因子(TNF)-α，血管內皮生長因子(VEGF)檢測試劑盒：上海朗頓公司。恒溫水浴箱，低溫高速離心機，酶標儀。

1.2 方法 用含10%胎牛血清的IMDM培養基培養SPC-A-1至對數生長期，換成無血清培養基。將無血清培養基培養的SPC-A-1放入恒溫水浴箱進行加熱，42℃、2 h，然后放回到37℃、5%CO2培養箱繼續培養，分別取復溫0、2、24、48、72 h的培養細胞上清保存待用。按照試劑盒說明將TNF-α(480 ng/L)、IL-2(1 200 ng/L)、IFN-γ(1 200 ng/L)、VEGF(3 200 ng/L)等實驗標準品倍比稀釋成5個濃度，并設一個空白對照，加入到已包被好的培養板中，每個濃度設3復孔。將上述保存的上清加入到已包被好的培養板內進行TNF-α、IL-2、IFN-γ、VEGF檢測，同時設未加熱的培養上清作為對照，每個樣品設3復孔。實驗結果測定：用酶標儀以空白孔調零，450 nm波長測各孔OD值。使用ELISAcalc軟件進行分析。

1.3 統計學方法 采用SPSS11.0軟件行單因素方差分析。

2 結 果

加熱后2、24、48、72 h的TNF-α、IL-2、IFN-γ濃度均比未加熱高;而加熱后VEGF 除了2 h略有升高外，其余24、48、72 h的VEGF濃度均比未加熱降低。見表1。

時間TNF-α(ng/L)IL-2(ng/L)IFN-γ(pg/ml)VEGF(ng/L)0h73.13±25.69207.56±40.68234.68±25.91803.74±157.162h124.39±40.94269.79±38.05259.71±25.85932.98±164.2324h86.79±38.06268.81±38.40266.11±25.87654.20±157.6248h97.90±27.25279.51±37.95253.09±26.02612.07±173.4272h83.57±36.99280.01±38.15250.59±35.43657.51±156.01

3 討 論

熱療是近年來發展起來的治療腫瘤的新方法。腫瘤熱療是利用物理方法將腫瘤組織加熱到能殺滅腫瘤細胞的溫度并維持一定時間，從而達到治療腫瘤的目的。由于它對人體無副作用并且療效確切，為腫瘤的治療提供了一種新的方法。

TNF-α是由單核-巨噬細胞分泌的一種小分子蛋白，可以與腫瘤細胞質膜特異性受體結合，導致溶酶體破裂，釋放出溶酶體酶而促使細胞自溶。已有研究證實TNF-α對多種腫瘤具有細胞毒和抑制生長作用，但對正常組織細胞沒有影響〔1〕。IL-2是一種具有多重生物學功能的細胞生長因子，可以促進T細胞生長、增殖及分化〔2〕，調節NK細胞并保持它的自然殺傷力〔3〕，誘導細胞毒性T細胞的增殖和產生，促進B淋巴細胞的增殖，與其他細胞因子協同作用等〔4〕。目前IL-2已被廣泛應用于腫瘤的治療。IFN-γ是由活化的T細胞及NK細胞產生的一種多功能細胞因子，除了具有抗病毒活性外，還能抑制腫瘤細胞增殖和參與調節免疫應答〔5〕，因而在腫瘤治療中也起著重要作用。

VEGF為血管內皮細胞特異性肝素結合生長因子，在體內外均可誘導新生血管形成。近年來的研究顯示，血管生成在腫瘤的發生與發展中發揮著重要作用，腫瘤的生長和轉移依賴于血管的形成，而VEGF為腫瘤血管生成最有效的促進因子。腫瘤發生后，VEGF表達顯著增加，而增加的VEGF又反過來促進腫瘤的生長和轉移。

本實驗結果表明，加熱對抗腫瘤細胞因子如IL-2、IFN-γ、TNFα等的分泌有提升作用，而對促進腫瘤生長的VEGF隨著時間的延長，分泌量逐漸下降。 本實驗證明了熱療可以提高機體的免疫功能、改變腫瘤微環境，從而治療腫瘤。

1 Rani K，Isabella F，Theresa R，etal.Expression of cell cycle protein in male breast carcinoma〔J〕.World Surg Oncol，2010；8(1)：1-11.

2 Lan RY，Selmi C，Gershwin ME.The regulation，inflammatory，and T cell programming roles of interleukin-2(IL-2)〔J〕.Autoimmun，2008；31(1)：7-12.

3 Gruenbacher G，Gander H，Nussbaumer O，etal.IL-2 costimulation enables statin-mediated activation of human NK cells，preferentially through a mechanism involving CD56+ dendritic cells〔J〕.Cancer Res，2010；70(23)：9611-20.

4 Yang H，Cheng EY，Sharma VK，etal.Dendritic cells with TGF-β1 and IL-2 differentiate na?ve CD4+ T cell into alloantigen-specific and allograft protective Foxp3+ regulatory T cells〔J〕.Transplantation，2012；93(6)：580-8.

5 朱穎慧，朱蘭才，劉然義，等.干擾素-γ治療腫瘤的研究進展〔J〕.腫瘤學雜志，2008；14(1)：4-9.

〔2016-09-05修回〕

(編輯 曲 莉)

趙 鑫(1969-)，男，主任醫師，主要從事肺癌的診治與基礎研究。

趙 暉(1980-)，男，碩士，主治醫師，主要從事非小細胞肺癌診治研究。

R734.2

A

1005-9202(2016)23-5831-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.23.025