MCP-1與VEGF在膀胱癌組織中的表達(dá)及作用機(jī)制

盧炳新 孫二琳 王麗寧

(天津市南開醫(yī)院泌尿外科，天津 300100)

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MCP-1與VEGF在膀胱癌組織中的表達(dá)及作用機(jī)制

盧炳新 孫二琳1王麗寧1

(天津市南開醫(yī)院泌尿外科，天津 300100)

目的 研究單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP)-1與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在膀胱癌組織中的表達(dá)及作用機(jī)制。方法 選擇接受手術(shù)治療的35例膀胱癌患者保存完好的癌組織石蠟標(biāo)本為觀察組，另選同期35例在醫(yī)院接受前列腺增生電切手術(shù)時(shí)同時(shí)切取的少量膀胱黏膜標(biāo)本為對(duì)照組，通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)兩組MCP-1與VEGF的陽(yáng)性表達(dá)情況，另通過雙抗體夾心(ELISA)法檢測(cè)兩組組織中MCP-1與VEGF表達(dá)，分析MCP-1、VEGF與膀胱癌臨床病理分級(jí)的關(guān)系及兩指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果 MCP-1與VEGF在膀胱癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別是91.43%、85.71%，均明顯高于在正常膀胱組織中的(11.43%、20.00%，P<0.05)；MCP-1與VEGF在膀胱癌組織中的表達(dá)水平均分別高于在正常膀胱組織(P<0.05)；MCP-1及VEGF陽(yáng)性表達(dá)與臨床分級(jí)及病理分級(jí)有關(guān)(P<0.05)。Pearson相關(guān)性分析可知，膀胱癌組織中MCP-1的表達(dá)與VEGF呈正相關(guān)，同時(shí)MCP-1及VEGF陽(yáng)性表達(dá)與臨床分期及病理分級(jí)均呈正相關(guān)。結(jié)論 MCP-1及VEGF在膀胱癌組織中高表達(dá)且與患者臨床及病理分級(jí)密切相關(guān)，同時(shí)二者呈正相關(guān)聯(lián)系并共同參與膀胱癌病情進(jìn)展。

MCP-1；VEGF；膀胱癌

膀胱癌屬于泌尿系統(tǒng)中多發(fā)的惡性腫瘤之一。國(guó)外有報(bào)道指出，癌癥的形成及發(fā)展與慢性炎癥具有較為明顯的聯(lián)系，“炎癥、癌癥”系統(tǒng)已經(jīng)成為腫瘤臨床的研究熱點(diǎn)之一〔1〕。單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)均是與炎癥反應(yīng)聯(lián)系緊密的重要因子，其中MCP-1對(duì)于炎癥反應(yīng)過程中的單核細(xì)胞趨化及激活具有十分重要的作用，而VEGF也已證實(shí)與腫瘤血管的形成聯(lián)系緊密〔2〕。但臨床相關(guān)報(bào)道較少研究MCP-1及VEGF與膀胱癌病理特征之間的關(guān)系〔3〕。本次研究探討MCP-1及VEGF在膀胱癌組織中的表達(dá)及作用機(jī)制。

1 資料和方法

1.1 臨床資料 選擇2015年5月至2016年4月在本院接受手術(shù)治療的膀胱癌患者保存完好的癌組織石蠟標(biāo)本35例為觀察組，男30例，女5例，年齡46～72歲，平均(53.48±2.17)歲；腫瘤臨床分期：Tis～T1期3例，T2期11例，T3～T4期21例；病理分級(jí)：Ⅰ級(jí)4例，Ⅱ級(jí)10例，Ⅲ級(jí)21例。另選35例同期在醫(yī)院接受前列腺增生電切手術(shù)時(shí)同時(shí)切取少量膀胱黏膜標(biāo)本為對(duì)照組，均為男性，年齡44～70歲，平均(52.97±2.54)歲。兩組的性別以及年齡無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。本次研究由醫(yī)院倫理委員會(huì)經(jīng)會(huì)議審核通過后實(shí)施。

1.2 研究方法 通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)兩組組織中MCP-1與VEGF的陽(yáng)性表達(dá)情況。免疫組化試劑：兔抗MCP-1多克隆抗體(美國(guó)，Santa Cruz公司)和VEGF鼠抗人多克隆抗體(美國(guó)，Zymed公司)，SP免疫組化檢測(cè)試劑盒及DAB顯色劑購(gòu)于武漢博士德生物工程公司。嚴(yán)格根據(jù)SP試劑盒操作步驟進(jìn)行處理，抗體通過0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)給予稀釋，濃度1∶100，將PBS替代一抗用于陰性對(duì)照。利用枸緣酸鹽的緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)，DAB顯色并用蘇木精復(fù)染，最后利用中性樹膠封片，利用光鏡觀察。另通過雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)各組標(biāo)本中組織勻漿液的MCP-1與VEGF表達(dá)水平，相關(guān)試劑盒產(chǎn)自美國(guó)的Genzyme公司，嚴(yán)格根據(jù)說明書描述的步驟進(jìn)行操作。

1.3 陽(yáng)性判定〔4,5〕SP法染色后，在細(xì)胞核或質(zhì)中發(fā)現(xiàn)清晰的棕黃色顆粒為陽(yáng)性。對(duì)5個(gè)隨意400倍視野內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞占據(jù)的比率平均數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，其中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為10%～25%計(jì)為(+)，26%～50%計(jì)為()，≥51%記為()。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)的比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)。MCP-1與VEGF的相關(guān)性利用Pearson法進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2 結(jié) 果

2.1 MCP-1與VEGF在不同膀胱組織中的陽(yáng)性表達(dá)率對(duì)比 MCP-1與VEGF在膀胱癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別是91.43%及85.71%，均明顯高于其在正常膀胱組織中的陽(yáng)性表達(dá)率11.43%及20.00%(P<0.05)。MCP-1與VEGF的表達(dá)均以細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顏色顆粒為陽(yáng)性，顆粒顏色越深表示陽(yáng)性程度越高。見圖1，圖2。

圖1 MCP-1的陽(yáng)性表達(dá)(DAB，×200)

圖2 VEGF的陽(yáng)性表達(dá)(DAB，×200)

2.2 MCP-1與VEGF在不同膀胱組織中的表達(dá)水平對(duì)比 MCP-1與VEGF在膀胱癌組織中的表達(dá)水平〔(169.84±15.32)pg/ml、(1 158.84±325.76)ng/L〕均分別明顯高于在正常膀胱組織中的表達(dá)水平〔(117.62±12.68)pg/ml，(846.78±214.43)ng/L,P<0.05〕。

2.3 MCP-1及VEGF的陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 臨床分期為T3～T4期患者的MCP-1及VEGF陽(yáng)性率〔19例(59.38%)、20例(66.67%)〕均明顯高于Tis～T1期〔3例(9.38%)、2例(6.67%)〕、T2期〔10例(31.25%)、8例(26.67%)〕，T2期的MCP-1及VEGF陽(yáng)性率均明顯高于Tis～T1期(P<0.05)。病理分級(jí)為Ⅲ級(jí)的MCP-1〔21例(65.63%)〕及VEGF陽(yáng)性率〔18例(60.00%)〕均明顯高于Ⅰ級(jí)〔2例(6.25%)、3例(10.00%)〕和Ⅱ級(jí)〔9例(28.13%)、9例(30.00%)〕，Ⅱ級(jí)的MCP-1及VEGF陽(yáng)性率均明顯高于Ⅰ級(jí)(P<0.05)。

2.4 相關(guān)性分析 膀胱癌組織中MCP-1的表達(dá)與VEGF呈正相關(guān)(r=0.759，P=0.000)，MCP-1及VEGF陽(yáng)性表達(dá)與臨床分期及病理分級(jí)均呈正相關(guān)(r=0.659，0.708，0.684，0.697；均P=0.000)。

3 討 論

在臨床上，膀胱癌屬于泌尿系統(tǒng)中一類比較常見的惡性腫瘤，其具有較高的發(fā)病率，對(duì)患者的身體健康具有較大威脅。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，炎癥過程是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生與發(fā)展的重要因素，多數(shù)實(shí)體瘤中均含有較多的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，而這之中的炎癥細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞所分泌出的炎癥介質(zhì)則發(fā)揮了促腫瘤的作用〔6，7〕。較多腫瘤細(xì)胞可自主地分泌和表達(dá)相應(yīng)的趨化因子與受體，發(fā)揮雙面作用，既能夠抑制血管形成并趨化機(jī)體內(nèi)的免疫活性細(xì)胞較強(qiáng)地抵抗腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移，但其又可以促使腫瘤細(xì)胞自身及血管的生長(zhǎng)，從而間接地加速腫瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移。MCP-1即是這類趨化因子，而VEGF是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，以往相關(guān)研究報(bào)道較少涉及二者在膀胱癌組織中的表達(dá)情況〔8～10〕。因此，分析膀胱癌患者組織中MCP-1及VEGF表達(dá)情況及作用機(jī)制，有利于更加全面地掌握膀胱癌的病情進(jìn)展。

本文研究結(jié)果顯示，MCP-1與VEGF在膀胱癌組織中的表達(dá)水平均分別明顯高于在正常膀胱組織中的表達(dá)水平，這符合國(guó)外Aldebasi等〔11，12〕的報(bào)道結(jié)果，提示膀胱癌發(fā)病與MCP-1及VEGF的表達(dá)異常存在緊密聯(lián)系，分析原因可能與MCP-1和VEGF的相關(guān)作用機(jī)制有關(guān)，膀胱癌在形成前期的慢性炎癥環(huán)境條件下，MCP-1的分泌間接激活了膀胱組織中的巨噬細(xì)胞及其他單核細(xì)胞向炎癥區(qū)域不斷聚集，同時(shí)使被活化的有關(guān)巨噬細(xì)胞釋放出細(xì)胞毒性物質(zhì)、干擾素以及白細(xì)胞介素等，進(jìn)而共同參與到炎癥反應(yīng)過程中〔13，14〕。同時(shí)，MCP-1還通過一系列生化作用促進(jìn)了新生血管的產(chǎn)生，參與到組織的重塑與再生過程中，而VEGF則是通過趨化炎癥組織當(dāng)中的各類免疫細(xì)胞，加速組織內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞以及上皮細(xì)胞增生，促使組織細(xì)胞由輕度增生發(fā)展為非典型增生，進(jìn)而發(fā)生細(xì)胞突變，最終導(dǎo)致癌性增生〔15〕。此外，本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)，膀胱癌組織中MCP-1的表達(dá)與VEGF呈正相關(guān)。這提示MCP-1與VEGF在膀胱癌的發(fā)病過程當(dāng)中可能存在一定的協(xié)同調(diào)節(jié)作用，符合國(guó)外Shinke等〔16〕的報(bào)道。可能是因?yàn)镸CP-1能夠促使局部組織細(xì)胞不斷表達(dá)VEGF，進(jìn)而誘導(dǎo)血管生成。Yang等〔17〕也證實(shí)，MCP-1在極低的濃度水平時(shí)即可趨化機(jī)體的血管內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)而致使體內(nèi)血管的形成。在慢性炎癥相關(guān)腫瘤組織中的部分單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞因受到腫瘤細(xì)胞分泌出的部分細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響，逐漸引起MCP-1表達(dá)能力變強(qiáng)，進(jìn)而通過調(diào)節(jié)作用使 VEGF的表達(dá)水平也隨之上升，最終促進(jìn)腫瘤組織生長(zhǎng)。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，MCP-1及VEGF陽(yáng)性表達(dá)與臨床分期及病理分級(jí)均呈正相關(guān)，符合Ito等〔18〕的報(bào)道結(jié)果，提示MCP-1及VEGF陽(yáng)性表達(dá)與膀胱癌患者的臨床特征之間也具有緊密聯(lián)系，同時(shí)MCP-1及VEGF可呈現(xiàn)同向表達(dá)。筆者認(rèn)為原因可能在于MCP-1及VEGF在膀胱癌患者的發(fā)病進(jìn)程中存在一定的協(xié)同調(diào)控作用，而這也是膀胱癌患者發(fā)病的一種重要的作用機(jī)制。有報(bào)道證實(shí)〔19〕，腫瘤細(xì)胞中MCP-1的表達(dá)能力上升后，其VEGF表達(dá)也隨之上調(diào)，進(jìn)而加速了腫瘤生長(zhǎng)。因此，在臨床治療過程中，嘗試調(diào)節(jié)MCP-1及VEGF的表達(dá)水平可能有助于抑制膀胱癌病情的進(jìn)展。

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〔2016-06-16修回〕

(編輯 郭 菁)

天津市衛(wèi)生局科技基金(2014KZ104)

1 天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科

盧炳新(1971-)，男，博士，主任醫(yī)師，從事泌尿外科腫瘤方面的研究。

R737.14

A

1005-9202(2016)23-5891-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.23.052