不同炮制方法對延胡索中延胡索乙素含量的影響

肖輝

（湖南中醫藥大學第一附屬醫院藥學部，湖南 長沙 410007）

不同炮制方法對延胡索中延胡索乙素含量的影響

肖輝

（湖南中醫藥大學第一附屬醫院藥學部，湖南 長沙 410007）

目的 比較醋煮、醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法對延胡索有效成分含量的影響，為優化延胡索炮制方法提供參考。方法 采用醋煮、醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法對延胡索生品進行炮制，通過高效液相色譜法測定延胡索乙素含量。結果 延胡索乙素含量在0．10～1．35 g范圍內與峰面積線性關系良好，平均回收率為84．05%，RSD為1．94%（n＝6）；醋烘、醋炙、酒炙延胡索炮制品含量有所上升，差異有統計學意義（t＝3．265～6．342，P＜0．05）。結論 高效液相色譜法檢測延胡索乙素具有線性關系良好、精密度穩定、可重復檢測的優點，醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法能增加延胡索有效成分含量。

延胡索；延胡索乙素；炮制；高效液相色譜法

延胡索（Corydalis Rhizoma）為多年生罌粟科草本植物，具有活血、理氣、止痛的功效，廣泛應用于跌打損傷、胸悶痹痛、血瘀痛經等癥。其主要有效成分為生物堿，包括延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索丙素，大多以結合態的生物堿鹽形式存在[1]。延胡索多以炮制后入藥，醋煮、醋烘、醋炙、酒炙均為2010年版《中國藥典(一部)》收載的炮制延胡索飲片經典方法[2]。國內學者有關這幾種炮制方法的文獻報道不多[3－4]。故筆者采用高效液相色譜（HPLC）法，以延胡索主要有效成分延胡索乙素含量為參考指標，探討醋煮、醋烘、醋炙、酒炙炮制方法對延胡索有效成分含量的影響，旨在為優化延胡索炮制工藝提供參考，現報道如下。

1 儀器與試藥

烘箱購自湖北黃石醫療器械廠（HDG78－1型）；色譜系統為美國康諾（CoMetro）高效液相色譜儀（高壓梯度系統、能用于編程紫外檢測器、數字全系統控制工作站等）；超聲波清洗器購自昆山市超聲儀器有限公司；電子天平選用美國梅特勒天平公司（ME203E型）。延胡索產地浙江東陽，購自浙江凱潤制藥有限公司（批號為140305）；參照品由中國食品藥品生物制品檢定所提供（批號為141210）；色譜醇為甲醇；陳醋購于北京陳醋廠，黃酒購自浙江紹興黃酒集團；試驗用水為自制雙蒸水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：美國安杰倫公司 Agilent TC－C18柱（250 mm×4．5 mm，55μm）；流動相：乙腈－0．1%磷酸溶液（28∶72）；流速：1m L／min；色譜柱溫：35℃；波長：280 nm。根據延胡索乙素峰計算出理論板數大于3 000，且延胡索乙素峰色譜與相鄰組分色譜峰分離度大于1．5。提示本次系統試驗設備條件無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 延胡索乙素對照品高效液相色譜圖

2．2 溶液制備

樣品制備：參照曹柳等[5]的文獻資料，采用醋煮、醋烘、醋炙、酒炙等方法對延胡索進行炮制。醋煮延胡索，取適量延胡索，加20%陳醋，加適量水沒過藥面，武火煮沸，文火煎煮，至醋液被完全吸收，干燥留置備用；醋烘延胡索，取適量延胡索，加20%陳醋完全浸潤藥物4 h，取出置入烘箱內，于120℃溫度下烘烤 45 min；醋炙延胡索，取適量延胡索，加20%陳醋完全浸潤4 h，文火炒干備用；酒炙延胡索，取適量延胡索，加黃酒完全浸潤4 h，文火炒干備用。

對照品溶液制備：稱取延胡乙索對照品2．25mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至10 mL，取2mL，置另一10m L容量瓶中，加甲醇定容至10m L，配制延胡乙索質量濃度為0．045 g／L的混合對照品溶液。

供試品溶液制備：稱取醋煮、醋烘、醋炙、酒炙炮制延胡索及生品延胡索各0．5 g，分別置三角瓶中，加水25m L，超聲提取25min，取上清液。稱重補足減失質量，重復上述步驟1次，共提取2次，合并2次濾液，過0．45μm濾膜，取濾液即得供試品溶液。用2%氫氧化鈉溶液制備硅膠G薄層板，將供試品溶液點于硅膠薄層板上，展開劑使用甲苯－丙酮，展距7 cm。取出薄層板，晾干后置于密閉碘缸約5min，取出揮盡薄層板上吸附碘，置365 nm紫外光燈下檢視，得不同炮制方法延胡索色譜圖，見圖2。

圖2 不同炮制方法延胡索薄層色譜圖

2．3 方法學考察

線性關系考察：分別吸取延胡索乙素對照品溶液0．1，0．2，0．3，0．4，0．6，0．8，1．0 m L，置10 m L容量瓶中，加甲醇溶液定容至 10 m L，得 2．0，4．0，6．0，8．0，12．0，16．0，20．0mg／L系列對照品溶液。吸取上述溶液分別進樣10μL，以峰面積（Y）為縱坐標、進樣量為橫坐標（X）進行線性回歸，得回歸方程 Y＝2．385×10－8X－0．002 4，r＝0．999 8(n＝7)。結果表明，延胡索乙素含量在0．10～1．35μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液，在相同色譜條件下連續進樣6次，分別測定延胡索乙素峰面積，代入回歸方程。結果延胡索乙素峰面積的 RSD為0．54%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一批樣品，精密稱定，按2．2項下供試品溶液制備方法，制備6份供試品溶液，測定延胡索乙素峰面積，計算延胡索乙素含量。結果延胡索乙素含量的 RSD為0．23%（n＝6），表明該方法重復性良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，1，2，4，8，12，24 h時進樣。結果延胡索乙素峰面積的 RSD為1．28%（n＝7），表明供試品溶液在24 h內穩定。

加樣回收試驗：稱取6份已知含量樣品各0．20 g，分別加入適宜延胡索乙素對照品溶液，按2．2項下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，各進樣20μL，測定，計算回收率。結果見表1。

表1 延胡索乙素加樣回收試驗結果(n＝6)

2．4 樣品含量測定

分別取醋煮、醋烘、醋炙、酒炙延胡索炮制品與延胡索生品供試品溶液各20μL，在相同的色譜條件下測定延胡索乙素峰面積，并計算延胡索乙素含量。結果表明，與延胡索生品比較，除醋煮炮制法含量有所降低外，醋烘、醋炙、酒炙延胡索炮制品延胡索乙素含量有所上升，見表2。

表2 不同炮制方法延胡索乙素含量測定結果（s）

表2 不同炮制方法延胡索乙素含量測定結果（s）

注：與延胡索生品比較，t＝3．265～6．342，aP＜0．05。

樣品延胡索生品醋煮延胡索醋烘延胡索醋炙延胡索酒炙延胡索含量（mg／g）0．040 1±0．000 3 0．039 8±0．000 4 0．048 6±0．000 5a0．049 8±0．000 7a0．048 5±0．000 6a與延胡索增減率（%）－0．748 1±0．003 2 21．197 0±3．123 0 24．189 5±3．456 2 20．947 6±2．456 2

3 討論

炮制延胡索為臨床常用中藥，有活血、行氣、止痛的功效[3]。延胡索主要化學成分為異喹啉型生物堿，以結合態與游離態兩種形式存在，游離態生物堿難溶于水，醋酒炮制能使生物堿與醋、酒結合，提高煎出率，從而增加療效。同時在延胡索總生物堿中，延胡索乙素鎮痛效力最強，故關于延胡索炮制的研究多集中于延胡索乙素的研究。

延胡索乙素測定方法有紫外法和薄層法等。徐皓等[6]研究顯示，HPLC法專屬性最好，靈敏度最高，且簡便易行。馬月光等[7]則通過對不同pH條件下延胡索乙素保留時間進行研究，結果pH為6．24時保留時間最長，pH在6．09時分離度最好。本研究中參照上述文獻進行試驗，結果表明，擬訂的HPLC法線性關系試驗、精密度試驗、重復性試驗均表現出良好的相關性、穩定性與可重復性，與李榮等[8]的報道基本一致。

在不同炮制方法對延胡索有效成分影響的研究中，徐捷[9]報道，醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法均可提高延胡索乙素的有效成分，但其研究中缺少對不同炮制品溶液劑量的介紹，且無比較研究，結論稍顯牽強。本研究中嚴格設計了劑量，且在隨后的比較研究中，發現與延胡索生品比較，除醋煮炮制法延胡索乙素含量有所降低外，醋烘、醋炙、酒炙延胡索炮制品延胡索乙素含量有所上升。醋煮延胡索有效成分下降的原因可能與延胡索中生物堿游離態含量有關，醋煮時間過長，可能還會破壞生物堿結構，從而使延胡索角質化[10]。這與馬月光等[7]的文獻報道相左，提示醋煮能否增加延胡索有效成分有待進一步研究。

本研究結果表明，HPLC法在檢測延胡索乙素峰面積與含量時，具有精密度高、可重復檢測的優點，醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法能增加延胡索有效成分含量。

[1]鄭 弘，許紅瑋．延胡索不同炮制方法的薄層色譜鑒別對比研究[J]．中醫學報，2013，28（5）：695－696．

[2]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2010：130－131．

[3]劉傳統，祁 紅．HPLC法測定益氣養陰合劑中厚樸酚和厚樸酚和延胡索乙素的含量[J]．云南中醫中藥雜志，2015，36（1）：59－61．

[4]楊 帆．改良高效液相色譜法測定元胡止痛滴丸和膠囊中延胡索乙素含量[J]．中國藥業，2014，23（13）：24－25．

[5]曹 柳，竇志英，王 萍，等．不同炮制方法對延胡索中有效成分含量的影響[J]．中國中醫藥信息雜志，2009，16（6）：42－44．

[6]徐 皓，昝麗霞，趙 樺．微量元素對延胡索有效成分含量的影響[J]．中國實驗方劑學雜志，2012，18（5）：90－92．

[7]馬月光，岳顯可，曹 崗，等．不同產地延胡索飲片炮制前后有效成分含量的測定[J]．中藥材，2013，36（11）：1 754－1 758．

[8]李 榮，蔡青青，牛彥兵，等．生、熟延胡索飲片藥理作用的對比研究[J]．中國實驗方劑學雜志，2014，20（19）：133－137．

[9]徐 捷．不同炮制方法對延胡索有效成分影響研究[J]．河北醫藥，2013，35（3）：454－455．

[10]魯春梅，張春森，姜立勇．延胡索化學成分及藥理作用研究進展[J]．中國現代藥物應用，2011，5（15）：126－127．

In fluence of Different Processing M ethods on Tetrahyd ropalm atine in Corydalis Rhizom a

Xiao Hui
（Department of Medicine，The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，Hunan，China 410007）

Ob jective To compare the influence of vinegar boiling，vinegar baking，vinegar stir－frying，wine stir－frying on the active ingredients of corydalis rhizoma．M ethods Corydalis rhizoma was processed by vinegar boiling，vinegar baking，vinegar stir－frying；wine stir－frying；HPLC method was used to determine the content of tetrahydropalmatine．Resu lts The content of tetrahydropalmatine showed good linear relationship wasa the peak area in the range of 0．10－1．35μg；the average recovery rate was 84．05%，RSD was 1．94%(n＝6)；the main content of tetrahydropalmatine improved after vinegar boiling，vinegar baking，vinegar stir－frying，and wine stir－frying，and there were statistically difference in the 4 methods（t＝3．265－6．342，P＜0．05）．Conclusion HPLC method for detection of tetrahydropalmatine has a good linear relationship，stable precision，repeatable testing；the processing methods of vinegar baking，vinegar stir－frying and wine stir－frying can increase the effective composition content in corydalis rhizoma．

corydalis rhizoma；tetrahydropalmatine；processing；HPLC

R283；R284．1；R282．71

A

1006－4931(2016)04－0029－03

肖輝（1973－），女，湖南漣源人，主管中藥師，研究方向為中藥學，（電子信箱）582638192＠qq．com。

2015－04－09；

2015－09－30)