何魯牽牛的組培快繁研究

呂永平， 王 燕， 牟豪杰， 汪一婷， 李海營 (浙江省農業科學院病毒學與生物技術研究所，浙江杭州 310021)

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何魯牽牛的組培快繁研究

呂永平， 王 燕， 牟豪杰， 汪一婷， 李海營 (浙江省農業科學院病毒學與生物技術研究所，浙江杭州 310021)

[目的]建立何魯牽牛的組培快繁體系，為其規模化生產提供理論依據。[方法]以何魯牽牛莖段為外植體，研究何魯牽牛不定芽增殖和生根的最適培養基。[結果]何魯牽牛在WPM+ 0.3 mg/L 6-BA +0.01 mg/L NAA+0.1 g/L活性炭的啟動培養基上成功誘導腋芽抽出，將腋芽轉接到WPM+ 0.3 mg/L 6-BA +0.1 g/L活性炭培養基上進行不定芽的增殖，增殖率達4.30；在WPM +0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA+0.1 g/L活性炭培養基上生根率較高，可達90%。[結論]該研究建立了何魯牽牛的組培快繁體系，有利于何魯牽牛種質資源保護和工廠化生產。

何魯牽牛；組培快繁；增殖；生根

何魯牽牛(Ipomoeaholubii)為旋花科番薯屬植物，原產于博茨瓦納和納米比亞等地[1]。何魯牽牛葉片細長如柳葉，深粉色喇叭形花，且具有大型的球狀塊根，其表面石化呈黃褐色，觀賞價值很高，是一種珍貴的多肉植物。在自然條件下，何魯牽牛生長緩慢，繁殖率低，數量較少[1]。此外，為了保護野生何魯牽牛植物免遭掠奪性采集甚至滅絕的威脅，國際多肉植物研究組織(The International Organization for Succulent Plant Study)已將多種多肉植物列入《瀕危野生動植物種國際貿易公約》(CITES公約)附錄內，極大地限制了珍稀多肉植物的引種、推廣和應用。利用組織培養技術進行何魯牽牛的快速繁殖可在短期內獲得大量與母株遺傳背景一致的優質種苗，對于滿足國內外對何魯牽牛的市場需求、保護珍稀何魯牽牛野生資源具有重要意義。目前鮮見何魯牽牛組織培養的研究。筆者以何魯牽牛莖段為外植體，對其組培快繁技術進行了研究。

1 材料與方法

1.1 材料何魯牽牛植株由浙江省農業科學院組培中心溫室提供，取其當年生枝條的莖段作為外植體。

1.2 方法

1.2.1外植體消毒。以何魯牽牛莖段為外植體，先用飽和洗衣粉溶液浸泡30 min，再用自來水沖洗干凈，然后用70%乙醇溶液和有效氯飽和度為1%的次氯酸鈉溶液分別浸泡40 s和7 min，期間搖晃幾次，最后用無菌水沖洗3～5遍，每遍1 min。

1.2.2腋芽誘導。將消毒后的外植體在超凈工作臺中接種至啟動培養基上進行腋芽的誘導。啟動培養基：WPM+ 0.3 mg/L 6-BA + 0.01 mg/L NAA+0.2 g/L活性炭，30 g/L蔗糖，7 g/L瓊脂，pH 5.8。

1.2.3不定芽增殖。待腋芽抽出且具有3～5片子葉時將其切下轉至增殖培養基上培養，增殖培養基： WPM+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂，添加不同濃度的6-BA(0.1、0.3、0.5 mg/L)及活性炭(0、0.1、0.2 g/L)，pH 5.8(表1)。每瓶接種4個，每組5瓶，35 d后觀察不定芽的增殖情況并統計增殖率。培養條件：溫度(23±2) ℃，光強強度60 μmol/(m2·s)，光照時間為12 h/d。

1.2.4生根及移栽。將不定芽叢分割成單株后轉接至生根培養基上培養，生根培養基：WPM +30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂+0.1 g/L活性炭，添加不同濃度的NAA和IBA，pH 5.8(表2)。每瓶接種4個，每組5瓶，35 d后觀察不定根的誘導情況并統計生根率。培養條件：溫度(23±2) ℃，光照強度30～60 μmol/(m2·s)，光照時間8～10 h/d。將生根植株從培養基中取出并清洗后移栽至基質中栽培，先在幼苗上覆蓋薄膜并遮陰，煉苗2～4 d后逐漸揭開薄膜使幼苗適應外界環境[2]。

2 結果與分析

2.1 不同培養基對不定芽增殖的影響消毒后的莖段培養28～34 d后有腋芽抽出，培養42～49 d后具有3～4片葉片。待腋芽伸長后將其切下轉接至添加不同濃度6-BA 和活性炭的WPM培養基上進行增殖培養(圖1)。培養35 d后，何魯牽牛的增殖情況見表1。由表1可知，在不添加活性炭培養基A上增殖時，不定芽增殖率為2.35，植株生長狀態不佳，葉片呈黃綠色；而在活性炭濃度為0.1 mg/L、6-BA濃度為0.3 mg/L的培養基B上，植株生長健壯，葉片為綠色，增殖率為4.30；隨著培養基 C中6-BA濃度的升高，何魯牽牛的增殖率達6.45，但不定芽較為細弱。由此可知，培養基B是適合何魯牽牛不定芽增殖的最佳培養基。

注：A.腋芽抽出；B.腋芽伸長；C.不定芽增殖；D.不定芽生根。

表1 不同培養基對何魯牽牛不定芽增殖的影響

2.2 不同植物生長調節劑對不定芽生根的影響將在培養基B中增殖的不定芽叢分割成單株后轉接至3種生根培養基上培養，35 d后何魯牽牛不定根的誘導情況見表2。由表2可知，何魯牽牛不定芽苗在IBA為0.2 mg/L 的培養基D中生根率為70%，而在NAA為0.2 mg/L的培養基E中生根率為55%，但兩者不定芽平均生根條數差異不顯著。不定芽在同時添加0.1 mg/L IBA和NAA的培養基F中生根率為90%，平均根數為4.15條，2個指標均高于培養基D和E。

表2 不同植物生長調節劑對何魯牽牛生根培養的影響

3 結論與討論

前人對于番薯屬植物的組織培養研究主要集中在甘薯類作物上[3-5]，對于何魯牽牛的組培快繁鮮見報道。對于觀賞植物的種苗快繁而言，確保種苗與母株遺傳背景的一致性極為重要。該研究通過以芽繁芽的方式建立了何魯牽牛的快繁體系。結果顯示，WPM+0.3 mg/L 6-BA+0.1 g/L活性炭是適合何魯牽牛的增殖培養基，不定芽增殖率可達4.30，且生長健壯。活性炭的添加有利于何魯牽牛的正常生長，推測活性炭可能吸附了何魯牽牛分泌的某些有毒害作用的植物次生代謝產物。

何魯牽牛增殖不定芽在WPM+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA+0.1 g/L活性炭培養基上生根效果最好。生長素組合使用的誘根效果優于單一種類生長素培養，相似的現象在可可茶、非洲菊、月季等的生根誘導中也有報道[6-9]。將生根植株從培養瓶中取出并清洗后移栽至基質中，先在幼苗上覆蓋薄膜并遮陰，煉苗2～4 d后逐漸揭開薄膜使幼苗適應外界環境，移栽成活率可達90%。該研究建立了何魯牽牛的組培快繁體系，有利于何魯牽牛的種質資源保護和工廠化生產。

[1] MATIS J.Ipomoea holubii[J].British cactus & succulent society,1988,6(4):108.

[2] 牟豪杰,徐剛,汪一婷,等.多漿植物組培苗移栽技術初探[J].浙江農業科學,2005(6):450-451.

[3] 董新玉，謝鳳琦，張金蓮，等.甘薯組培苗簡易生產技術[J].云南農業科技,2015(2):32.

[4] 張寶紅,豐嶸.甘薯組織培養高效植株再生體系的建立[J].西北農業學報,1992,1(4):51-56.

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Study on Tissue Culture and Rapid Propagation ofIpomoeaholubii

LU Yong-ping,WANG Yan,MOU Hao-jie et al (Zhejiang Academy of Agricultural Sciences,Institute of Virology and Biotechnology Hangzhou，Zhejiang 310021)

[Objective] To establish tissue rapid propagation system ofIpomoeaholubii,and to provide theoretical foundation for its large-scale production.[Method] Taking the stem ofIpomoeaholubiias explants,we researched the optimal culture medium for adventitious buds proliferation and rooting ofI.holubii.[Result] Axillary buds were induced on WPM+ 0.3 mg/L 6-BA + 0.01 mg/L NAA + 0.1 g/L active carbon (AC).The shoots ofI.holubiiwere cultured on WPM + 0.3 mg/L 6-BA + 1 g/L AC for multiplication,and the multiplication ratio was 4.30.WPM +0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA+0.1 g/L AC was the optimal medium for rooting,and the rooting rate was 90%.[Conclusion] This research establishes the tissue culture and rapid propagation system ofI.holubii,which is helpful to the germplasm protection and industrial production ofI.holubii.

Ipomoeaholubii; Rapid propagation; Multiplication; Rooting

國際先進農業科技術計劃(948)項目(2011-G31)；浙江省農業科學院青年人才培養項目(2015R21R08E08)。

呂永平(1977- )，男，浙江杭州人，助理研究員，從事植物組培產業化研究。

2016-08-31

S 604

A

0517-6611(2016)30-0110-02