蒙藥白蒿三味湯散劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

金 軍，蓮 花，那生桑

(1．內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥研究院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；

2．內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

蒙藥白蒿三味湯散劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

金 軍1，蓮 花2，那生桑1

(1．內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥研究院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；

2．內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

目的 建立白蒿三味湯散劑中綠原酸和鹽酸麻黃堿的鑒別及含量測定方法。方法 采用薄層色譜（TLC）法對制劑中的麻黃及小白蒿進(jìn)行鑒別。以高效液相色譜（HPLC）法測定制劑中鹽酸麻黃堿的含量，色譜柱為Eclipse XDB-C18柱(250 mm×4．6 mm，5 m)，流動(dòng)相為乙腈-0．025 mol／L磷酸溶液（10∶90），流速為1．0 mL／min，檢測波長為210 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10 L。結(jié)果薄層鑒別色譜特征斑點(diǎn)明顯。鹽酸麻黃堿的線性范圍為0．13～0．56 g，線性關(guān)系良好（r＝0．999 8），平均加樣回收率為98．38%，RSD為1．41% (n＝5)。結(jié)論 TLC法鑒別該制劑中小白蒿和麻黃及用高效液相色譜儀測定鹽酸麻黃堿的方法簡便準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，可作為白蒿三味湯散劑的質(zhì)量控制方法。

白蒿三味湯散劑；高效液相色譜法；鹽酸麻黃堿；綠原酸；薄層色譜鑒別

白蒿三味湯散劑是內(nèi)蒙古阿拉善盟特戈熙甲狀腺病蒙醫(yī)?？漆t(yī)院多年臨床經(jīng)驗(yàn)方，由小白蒿、麻黃、酒糟3味藥材組方，具有發(fā)汗排毒、去肝火、消腫的功效，主治各種熱性疾病、亞健康癥。小白蒿，蒙名艾給，系菊科蒿屬植物，具有止血、消腫、消“奇哈”、治伏癰疽等功效[1]，主治各種出血、關(guān)節(jié)腫脹、腎熱、月經(jīng)不調(diào)、瘡癰等[2]，主要化學(xué)成分有黃酮類、香豆素生物堿類，綠原酸為其主要活性成分[3-4]。麻黃具有消腫、發(fā)汗、止咳、平喘的功效，主治肝熱、外傷出血、內(nèi)傷、關(guān)節(jié)疼痛等[5-7]，化學(xué)成分有生物堿、黃酮、鞣質(zhì)等[8]，鹽酸麻黃堿為其有效成分。筆者以鹽酸麻黃堿為指標(biāo)進(jìn)行含量測定，控制成品的質(zhì)量，分離效果好，專屬性強(qiáng)，簡便準(zhǔn)確，可用于本制劑的質(zhì)量控制?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

LC-20AT型高效液相色譜儀；SPD-20AV型檢測器；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器；JA5003A型電子天平(上海菁海儀器有限公司)；硅膠薄層G板(青島海浪硅膠干燥劑有限公司，批號20131221)。

1．2 試藥

鹽酸麻黃堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為171241-200506）；水為超純水，乙腈為色譜純，磷酸、氨水等其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 薄層色譜（TLC）鑒別

2．1．1 麻黃

稱取鹽酸麻黃堿對照品，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，得對照品溶液。取單藥粉末1 g和制劑3 g，加濃氨試液數(shù)滴，再加三氯甲烷10 mL，加熱回流1 h，過濾，濾液揮干，殘?jiān)蛹状? mL震搖，濾過，取濾液作為藥材溶液和供試品溶液。另按處方比例稱取除麻黃外的其他蒙藥，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液[9]。

照2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB薄層色譜法，吸取上述4種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（20∶5∶0．5）為展開劑，展開，取出，噴茚三酮試液，置105℃烘干箱中，直至斑點(diǎn)顯色清晰[10]。藥材溶液和供試品溶液色譜中，與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上顯相同的紅色斑點(diǎn)，陰性對照品溶液色譜中則無此斑點(diǎn),見圖1A。

2．1．2 小白蒿

稱取綠原酸對照品，精密稱定，加甲醇制備質(zhì)量濃度為1 g／L的溶液，得對照品溶液。取小白蒿藥材1 g、制劑2 g研細(xì)，置錐形瓶中，加50%甲醇50 mL，加塞稱重，過夜；超聲處理40 min，補(bǔ)充甲醇的損失量，搖勻，濾過，濾液蒸干；殘?jiān)?0%甲醇2 mL溶解，作為藥材溶液和供試品溶液[11]。另按處方比例稱取去除小白蒿的其他蒙藥，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

照2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB薄層色譜法吸取上述4種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以醋酸丁酯-甲酸-水（7∶2．5∶2．5）的上層溶液作展開劑，展開取出，晾干。置紫外燈下（365 nm）檢視。藥材溶液和供試品溶液色譜中，與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)[12]，陰性對照品溶液色譜則無此斑點(diǎn)，見圖1B。

2．2 鹽酸麻黃堿含量測定

2．2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0．025 mol／L磷酸溶液（10∶90）；流速：1．0 mL／min；檢測波長：210 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。鹽酸麻黃堿峰計(jì)算不低于3 000。分別取鹽酸麻黃堿對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，見圖2。鹽酸麻黃堿的保留時(shí)間約為6．7 min，陰性對照品在鹽酸麻黃堿位置處無峰，即其他成分對其測定無干擾。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算不低于3 000。

圖1 薄層色譜圖

圖2 高效液相色譜圖

2．2．2 溶液制備

精密稱取105℃干燥至恒重的鹽酸麻黃堿對照品7．26 mg，置50 mL容量瓶中，加流動(dòng)相并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0．145 2 g／L的對照品溶液。

精密稱取復(fù)方制劑1．0 g，置100 mL具塞錐形瓶中，加30 mL水和2 mL濃氨水，超聲30 min（功率100 W，頻率50 kHz）濾過，置分液漏斗中，加乙醚萃取5次，每次25 mL，合并乙醚萃取液，然后將乙醚萃取液揮干，殘?jiān)眉状技s5 mL溶解移置25 mL容量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液[13]。

按處方比例及工藝，制備缺鹽酸麻黃堿的陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備不含鹽酸麻黃堿的陰性對照品溶液。

2．2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取鹽酸麻黃堿對照品溶液3 mL，置10 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。分別精密量取溶液3，5，7，10，13 μL，注入液相色譜儀。按上述色譜條件測定，以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X，μg)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程 Y＝2 262 046 X-174 389。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿進(jìn)樣量在0．13～0．56 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取上述同一質(zhì)量濃度的鹽酸麻黃堿對照品溶液，同法測定5次，每次10 μL，測定鹽酸麻黃堿峰面積。結(jié)果的 RSD為1．54%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取樣品（批號為150706），依法制備供試品溶液，取10 μL，于0，2，4，6，8 h時(shí)進(jìn)樣，依法測定，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為1．51%（n＝5），表明供試品溶液中鹽酸麻黃堿含量在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號為150706），依法制備成5份供試品溶液并測定鹽酸麻黃堿的含量。結(jié)果的 RSD為1．8%（n＝5），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已知含量的同一樣品5份，每份0．28 g，各加2．50 mg的鹽酸麻黃堿對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）

2．2．4 樣品含量測定

取樣品3批，按擬訂的含量測定方法進(jìn)行測定。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(mg／g)

3 討論

白蒿三味湯散劑以煎湯外用，可使皮膚發(fā)汗，促使皮膚毛囊排毒，美容。蒙醫(yī)將其與其他相關(guān)藥劑合用于腸道-皮膚組合排毒療法，效果良好。組成本品處方的3味藥中，小白蒿和麻黃可通過TLC法建立清晰的鑒別法；方中酒糟屬于輔料，蒙醫(yī)認(rèn)為其作用為促使發(fā)汗，本試驗(yàn)未做鑒別。

本試驗(yàn)中流動(dòng)相曾采用0．02 mol／L磷酸二氫鉀(含0．2%三乙胺，磷酸調(diào) pH至 2．7)-乙腈(5∶100)[14]、0．01 mol／L磷酸二氫鉀（磷酸調(diào) pH至 2．5）-甲醇（4∶96）[15]、乙腈-0．025 mol／L磷酸溶液（10∶90）[13]，其中以乙腈-0．025 mol／L磷酸溶液（10∶90）系統(tǒng)的色譜峰對稱性好，簡便，無需調(diào)整pH。供試品測量組分分離度較好，無雜峰干擾。曾用Diamonsil ODS-C18色譜柱，有雜峰干擾，Eclipse XDB-C18色譜柱分離度較好，無雜峰干擾。

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Quality Standard of Mongolian Medicine Baihao-3 Decoction Powder

Jin Jun1,Lian Hua2,Nashengsang1
(1．Institute of Mongolian Medicine Research,Inner Mongolia Medical University,Huhehaote,Neimenggu,China 010110;
2．College of Mongolian Medicine,Inner Mongolia Medical University,Huhehaote,Neimenggu,China 010110)

Objective To establish the method for the TLC identification and content determination of chlorogenic acid and ephedrine hydrochloride in Baihao-3 Decoction Powder．Methods Chlorogenic acid and ephedrine hydrochloride in Baihao-3 Decoction Powder was identified by TLC,and the content of ephedrine hydrochloride was detected by HPLC．The separation was carried out on a Eclipse XDB-C18column,(250 mm×4．6 mm,5 m)．The mobile phase consisting of acetonitrile 0．025 mol／L phosphoric acid(10∶90)and a UV detctor at 210 nm,the flow rate was 1．0 mL／min,the column temperature was 30℃,the injection volume was 10 L．Results Chlorogenic acid and ephedrine hydrochloride could be detected by TLC,the calibration curve showed good linearity over the range of 0．13-0．56 μg(r＝0．999 8)．The average recovery was 98．38% with RSD＝1．41%(n＝5)．Conclusion This method is simple, rapid,efficient,sensitive,accurate and with good repeatability and recovery,it can be used as a quality control method for the preparation of Baihao-3 Decoction Powder．

Baihao-3 Decoction Powder;HPLC;ephedrine hydrochloride;chlorogenic acid;TLC identification

R284．1；R286

A

1006－4931(2016)11－0007－03

金軍(1993-)，男，達(dá)斡爾族，在讀碩士研究生，研究方向?yàn)槊伤帉W(xué)，（電子信箱）842692574＠qq．com；那生桑（1956-），男，蒙古族，博士研究生導(dǎo)師，教授，主要研究方向?yàn)槊伤幣谥埔?guī)范化及蒙藥現(xiàn)代化，（電話）0471-6653163（電子信箱）nasang56＠sina．com。

2016－01－10；

2016－02－14)