洪澤地區女性MTHFR和MTRR基因多態性分布研究

摘要：目的 調查洪澤縣女性亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）C677T、A1298C及甲硫氨酸合成酶還原酶（MTHFR）A66G基因多態性的分布特征。方法 以洪澤地區120例漢族女性為研究對象，采集口腔黏膜上皮細胞，提取基因組DNA，采用Taqman-MGB技術，進行MTHFR和MTRR基因多態性檢測。統計分析本地區基因多態性的分布特征，并與已報道地區進行比較。結果 洪澤地區漢族女性的（MTHFR）C677T純合突變基因型頻率為17.5%，高于德陽、昆明、惠州，低于烏魯木齊、煙臺，差異有統計學意義（P<0.05）。（MTHFR）A1298C純合突變基因型頻率為6.7%。（MTRR）A66GG純合突變基因型頻率為3.3%。結論 洪澤地區漢族女性MTHFR和MTRR基因多態性分布具有地域特異性，通過檢測MTHFR基因多態性來指導葉酸個體化增補是進一步降低當地出生缺陷的重要方法。

關鍵詞：亞甲基四氫葉酸還原酶；甲硫氨酸合成酶還原酶；基因多態性

孕齡婦女作為一個特殊的群體，體內葉酸營養素的水平對于新生兒的健康生長發育和孕婦的身體健康都有極其重要的影響。葉酸攝入不足或者不能被人體有效利用是導致出生缺陷的主要原因[1]。5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）和甲硫氨酸合成酶還原酶（MTRR）是葉酸轉運和代謝的關鍵酶[2]。MTHFR基因C677T位點、A1298C位點與MTRR基因A66G位點的多態性會影響MTHFR與MTRR的酶活性降低，造成葉酸代謝異常，使DNA低甲基化導致唐氏綜合癥[3]；葉酸代謝障礙與神經管缺陷、唇腭裂、先天性心臟病等出生缺陷相關，以及復發性流產[4]、妊娠期高血壓等孕期疾病密切相關[5]。研究通過檢測洪澤孕齡女性體內葉酸代謝關建酶MTHFR和MTRR編碼基因的3個多態性位點，預測受檢者的葉酸代謝能力，從而指導孕婦在孕前及孕期適量補充葉酸，預防出生缺陷的發生。同時，通過對本地區樣本基因檢測的結果統計分析，了解洪澤區婦女葉酸代謝相關基因的分布特點與群體遺傳學特征，為該地區預防出生缺陷制定針對性的干預措施提供科學依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取洪澤縣自2013年9月～2015年12月到本院進行孕前與孕期檢查的女性，根據知情同意原則，經受檢者本人同意后，采集其口腔粘膜細胞進行后續研究。對所有口腔粘膜細胞進行基因組DNA抽提，排除抽提不符合要求者，共獲得有效樣本120例。樣本提供者平均年齡（26.3±4.4）歲。

1.2方法 由洪澤保健院采集受檢者的口腔黏膜上皮細胞，利用硅膠吸附方法抽提樣本的基因組DNA。由合作方上海靶向分子醫學研究所，采用熒光定量PCR技術，分別檢測分析葉酸代謝相關的3個DNA單核苷酸多態性位點（MTHFR）C677T、A1298C和（MTRR）A66G。

1.3統計學處理 采用SPSS 17.0軟件進行統計學分析，基因頻率采用基因計數法計算，對基因型及等位基因頻率進行χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1（MTHFR）C677T、A1298C、和（MTRR）A66G位點基因的多態性將樣本（MTHFR）C677T、A1298C和（MTRR）A66G位點的檢測數據分別進行Hardy-Weinberg遺傳平衡，均符合Hardy-Weinberg平衡，證明樣本具有本區域群體代表性。（MTHFR）C677T位點CC、CT、TT基因型的頻率分別為38.3%、44.2%、12.5%，（MTHFR）1298位點AA、AC、CC基因型的頻率分別為55%、38.3%和6.7%。（MTRR）A66G位點AA、AG、GG基因型的頻率分別為59.2%、37.5%、3.3%。

2.2（MTHFR）C677T位點洪澤地區女性MTHFR基因C677T位點的基因型分布頻率與其他五個省市的分布存在統計學差異（P<0.05），高于德陽、昆明、惠州，低于烏魯木齊、煙臺，差異有統計學意義（P<0.05）。分布特征存在明顯的地域差異，TT純合突變基因型的分布頻率北方高于南方。

2.3 MTHFR基因A1298C位點MTHFR基因A1298C位點的基因型分布與、昆明、惠州、烏魯木齊、煙臺的分布存在統計學差異（P<0.05）。

2.4 MTRR基因A66G位點洪澤婦女MTRR基因A66G位點的基因型分布與德陽、昆明、惠州、烏魯木齊、煙臺的存在統計學差異（P<0.05）。

3 討論

對洪澤地區孕齡女性進行了樣本分子流行病學調查，分析該地區孕齡女性與出生缺陷密切相關的MTHFR基因C677T位點、A1298C位點，及MTRR基因A66G位點的區域分布信息，并與已報道其他地區（烏魯木齊、煙臺、德陽、昆明、惠州）的基因頻率分布數據進行比較。洪澤MTHFR基因與MTRR基因的多態性位點分布頻率與其他地區有差異，TT基因具有北高南低的趨勢，差異與我國神經管畸形發病率北高南低的情況相一致，其病因學研究表明相關因素中遺傳因素所占的比例不容忽視。MTHFR、MTRR是葉酸代謝過程中的關鍵酶，從而影響人體內葉酸營養水平和血漿同型半胱氨酸水平的狀況，導致出生缺陷（神經管畸形、唇腭裂、先天性心臟病等）的發生率增加。已有的相關報道表明，MTHFR、MTRR基因多態性分布特征會由于研究對象、研究方法、種族和地區的不同而有所差異。了解各地人群不同的基因多態性等人群遺傳特征與分布特征，有利于各地因地制宜地指定具有針對性的衛生政策，更合理地指導孕齡女性增補葉酸，從一級預防的水平減少出生缺陷，降低孕期疾病的發生。為我國下一步完善相關的公衛政策提供有力的依據。

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編輯/安樺