細胞采集器聯合液基制片在尿液脫落細胞學中的應用

摘要：目的 對尿液標本作細胞采集器聯合液基制片，以提高尿液細胞學診斷陽性率。方法 采用一次性細胞采集器聯合液基法對60例有活檢對照尿液標本制片并與離心沉淀法、單用細胞采集器法對照。結果 60例中離心沉淀法檢出陽性數27例（陽性檢出率45.00%），細胞采集器法檢出陽性數38例（陽性檢出率63.33%），細胞采集器聯合液基制片法檢出陽性數52例（陽性檢出率86.67%）。后兩組結果經統計學比較具有差異（P<0.05）。結論 細胞采集器聯合液基制片能在濃縮尿液中的有效細胞成分后，去除紅細胞干擾并固定腫瘤細胞形態，對提高尿液脫落細胞學診斷的陽性率有較大應用價值。

關鍵詞：細胞采集器；液基；尿；細胞學診斷

中圖分類號：R730.21 文獻標識碼：A

尿路上皮性腫瘤為泌尿生殖系最常見的腫瘤，由于膀胱鏡和輸尿管鏡檢查的觀察范圍有限并為有創的檢查，可能會遺漏位于難以窺視部位的腫瘤；影像學檢查包括超聲、X光、CT和MRI，雖能顯示整個尿路的情況但不能明確病灶性質；腫瘤細胞代謝旺盛，即使在發病早期仍可有較多的癌細胞從病灶表面脫落，尿脫落細胞學檢查是篩查泌尿系統腫瘤的一項重要方法，且不受腫瘤部位的限制，作者對60例尿液標本作細胞采集器聯合液基制片以提高尿液細胞學腫瘤的陽性檢出率，現報告如下：

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2012～2014年我院門診和住院患者尿液標本60例，其中男43例，女17例；年齡40～82歲，平均年齡64.15歲；所有病例均有不同程度血尿和（或）尿頻、尿痛的癥狀；經手術及膀胱鏡組織病理學證實為惡性腫瘤（膀胱：尿路上皮癌29例、低分化癌1例；腎：腎細胞癌4例、尿路上皮癌15例；輸尿管：尿路上皮癌11例）。

1.2儀器與試劑 北京志恒達科技公司生產的一次性病變細胞采集器，液基制片試劑（廈門邁威）。

1.3方法

1.3.1囑患者收集清晨新鮮尿液500ml以上，2h內送檢；將每次尿液標本分為3份，1份按傳統離心沉淀法制片，1份用細胞采集器法制片，1份用細胞采集器聯合液基制片。

1.3.2離心沉淀法：將20ml標本置于離心管中，離心10min（3000r/min），棄上清液，用吸管吸取尿沉渣均勻涂片，潮干后置于95%乙醇固定15min，HE染色，閱片。

1.3.3細胞采集器法：將采集器的入液管插入200ml尿液，排除管置于大于標本量的空容器中進行抽吸與排液，反復多次抽吸排液至全部尿液排空可將直徑>8μm的細胞滯留于濾膜上，而流體及大部分紅細胞則被濾過，此時再順時針打開濃縮器取出濾過膜涂片，95%乙醇固定15min，HE染色，閱片。

1.3.4聯合方法：方法與步驟置1.3.3相同，取出濾過膜放入液基保存液中，行液基制片，HE染色，閱片。

2 結果

2.1 60例尿液脫落細胞學結果 傳統離心法檢出陽性數27例，陽性檢出率45.00%；細胞采集器制片法檢出陽性數38例，陽性檢出率63.33%；聯合方法檢出陽性數52例，陽性檢出率86.67%；細胞采集器聯合液基制片陽性檢出率高于單用細胞采集器法，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2不同方法檢出腫瘤細胞的形態 ①離心沉淀法：細胞少而分散，背景不干凈有大量紅細胞干擾（見圖1）。②細胞采集器法：細胞較多且集中，有輕度退變，背景較干凈有少許紅細胞（見圖2）。③聯合方法：細胞多并且分布均勻，背景干凈除腫瘤細胞外還可見到尿液中的桿菌（見圖3）。

圖1 傳統離心法 HE×10 圖2 細胞采集器法 HE×10

圖3 聯合方法 HE×10

3 討論

膀胱癌是泌尿系統最常見的惡性腫瘤，位居世界腫瘤第7位，發病率占癌癥總數的3.2%，男性患者多于女性（男：女約為3.5：1），在60歲以上老年人中高發[1]，近年來有增加趨勢，且早期診斷比較困難，膀胱鏡檢查為有創的侵入性操作，可能會引起尿路感染及血尿，并且在腎臟及上段輸尿管腫瘤中意義不大。作者通過尿脫落細胞檢查對60例不同部位的泌尿系統腫瘤的診斷認為：若正確留取足量的標本，及時規范收集細胞，不僅在膀胱腫瘤還是泌尿系統的其它部位腫瘤中都可顯著提高尿脫落細胞學診斷的陽性率。

從三種不同制片方法比較來看：傳統離心沉淀法取量少，特別在血尿的沉淀物涂片中有效細胞成分不僅少且背景中有大量紅細胞干擾，容易漏診。細胞采集器法現開展較成熟[2]，可將送檢的尿液全部濾過，收集送檢尿液中的所有細胞成分，濾過大量的紅細胞，彌補了離心沉降法中標本浪費、細胞量流失及紅細胞干擾的不足，但仍有不足之處：①若血尿標本中紅細胞成分較多時亦可大量停留在濾過膜上影響診斷；②濾過膜較薄，很難將濾過膜上的細胞全部涂在玻片上；③在涂片的過程中涂片未干立即固定容易掉片，待涂片干燥后固定又易導致細胞退變影響診斷。細胞采集器聯合液基制片法在尿液細胞學中體現出優越性，它建立在細胞采集器法基礎上將送檢尿液中所有有效細胞成分收集在濾過膜上，再通過液基制片的方法將濾過膜上的紅細胞去除，使有效細胞成分保存并使細胞在液體中固定避免空氣干燥造成的細胞退變[3]，并且液基制片使細胞在涂片中分布集中、均勻、無重疊、遮擋，縮小了閱片的范圍，節省了閱片時間，減少漏診，提高工作效率。

提高尿液脫離細胞學檢查的陽性檢出率，除了制片方法的選擇外還應注意以下幾點：①因為無痛性血尿是膀胱癌的主要征兆，應囑患者盡可能的在血尿期留取標本，留取量約多越好并及時送檢，如不能及時送檢應放至于4℃冰箱中防止尿液中細胞退變；②注意尿液標本的留取方式，因導尿可損傷尿路上皮導致尿液標本中出現正常的成團脫落的上皮細胞，故對于導尿標本中的細胞應該認真鑒別；③制片過程中使用免疫組化防脫載玻片可以有效的使細胞黏附于玻片上，避免細胞在染色過程中的流失。

綜上所述，正確留取足量的尿液標本，應用細胞采集器聯合液基制片的方法可以最大限度的保留有效細胞成分并且去除紅細胞等干擾因素，不僅在膀胱腫瘤還是泌尿系統的其它部位腫瘤中都可顯著提高尿脫落細胞學診斷的陽性率。

參考文獻：

[1]Parkin D M.The global burden of urinary bladder cancer[J].Scand J U rol N ephrol Suppl，2008，42（218）：12-20.

[2]吳家寧，杜蕓，王珩.膜式細胞采集器在脫落細胞免疫組化染色中的

臨床應用[J].臨床與實驗病理學雜志，2014，30（6）：694-696.

[3]馬中中，診斷細胞病理學[M].鄭州：河南科學技術出版社，2005：10-13.

[4]王力，趙穩興，李學鋒，等.冰醋酸在宮頸液基細胞學制片中的應用研究[J].解放軍醫藥雜志，2011，23（05）.

[5]李新敏，古雅麗，李文才.液基細胞學染色質量控制對宮頸病變診斷的影響[J].診斷病理學雜志，2013，20（10）.

[6]王力，趙穩興，趙璽龍，等.膜式和沉降式宮頸液基細胞學制片方法的比較研究[J].解放軍醫藥雜志，2011，23（04）.編輯/倪冰冰