寧鄉(xiāng)豬肉質(zhì)性狀相關(guān)基因SLC13A5多態(tài)性研究

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

摘 要：為探究寧鄉(xiāng)豬肉質(zhì)性狀相關(guān)基因SLC13A5多態(tài)性，利用PCR—RFLP技術(shù)檢測(cè)SLC13A5基因。結(jié)果表明，第251 bp處有一個(gè)T/C的堿基突變，導(dǎo)致PCR—RFLP—Bsu36 I多態(tài)性。在寧鄉(xiāng)豬中，CC基因型頻率為0.830 8，C基因頻率為0.876 9；在大白豬中，TT基因型頻率為0.484 8，T基因頻率為0.706 9。本研究為對(duì)寧鄉(xiāng)豬肉質(zhì)性狀相關(guān)基因SLC13A5的進(jìn)一步研究打下了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：寧鄉(xiāng)豬；SLC13A5基因；肉質(zhì)性狀

中圖分類(lèi)號(hào)：S813.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2017）04-0053-02

寧鄉(xiāng)豬是湖南寧鄉(xiāng)的地方豬種，也是我國(guó)四大名豬（榮昌豬、太湖豬、金華豬、寧鄉(xiāng)豬）之一。相對(duì)于其他豬種，它有著矮短圓肥、結(jié)構(gòu)疏松、清秀細(xì)致、背腰平直、腹大下垂拖地、臀部斜尻、四肢粗短、前肢挺直、后肢彎曲等特點(diǎn)[1]。另外，寧鄉(xiāng)豬因早熟易肥、蓄脂力強(qiáng)、肉質(zhì)細(xì)嫩、肉味鮮美[2]、肌肉中夾有較多脂肪、仔豬烤制皮不開(kāi)裂等特點(diǎn)而享譽(yù)中外[3]。

有研究發(fā)現(xiàn)SLC13A5基因能夠?qū)π∈蟮母杉?xì)胞ATP/ADP比值進(jìn)行調(diào)節(jié)，通過(guò)依次調(diào)節(jié)肝臟AMP激活蛋白激酶（AMPK）信號(hào)通道、誘導(dǎo)過(guò)氧化酶體增殖物激活受體γ共激活因子-1α（PGC-1α）、調(diào)節(jié)乙酰輔酶A羧化酶-2（ACC-2）和固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（SREBP-1c）的含量，從而調(diào)節(jié)肝臟線粒體的生物合成作用，最終對(duì)脂質(zhì)氧化、能量消耗和肝臟脂質(zhì)的從頭合成進(jìn)行調(diào)節(jié)。

另外，有研究發(fā)現(xiàn)，豬的SLC13A5基因與肌內(nèi)脂肪含量有顯著的關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)對(duì)SLC13A5基因的多態(tài)性研究，是為了篩選可用于標(biāo)記寧鄉(xiāng)豬肉質(zhì)性狀的遺傳標(biāo)記。

1材料與方法

1.1 樣本采集

寧鄉(xiāng)豬耳樣總共65頭來(lái)源于寧鄉(xiāng)大龍畜牧科技有限公司，大白豬耳樣總共330頭來(lái)源于正虹科技股份有限公司。

1.2 基因組DNA提取

基因組DNA的提取按照常規(guī)酚-氯仿萃取的方法進(jìn)行[4]。

1.3 引物的合成

引物的合成以及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）擴(kuò)增檢測(cè)SLC13A5基因多態(tài)性的引物設(shè)計(jì)為：

正向引物：5'-CTCATTCCTGCGTCTTATTC-3'；

反向引物為5'-GCTGTGGGTGGTGTCATT-3'。

PCR條件：PCR反應(yīng)體系（總體積 20 μL）：10×Buffer 2 μL，2 mmol/L dNTPs 1.6μL，20 mmol/L MgCl2 1.6 μL，Taq DNA聚合酶（5 U/μL）0.4 μL，DNA模板（100 ng/μL）1 μL，上下游引物（10 pmol/μL）各0.4 μL，ddH2O 12.6 μL。

反應(yīng)程序：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸50 s，共35個(gè)循環(huán)；72℃后延伸8 min，最后 4 ℃保存。

1.4 PCR-RFLP檢測(cè)

在10 μL PCR產(chǎn)物（815 bp）中加入0.8 μL 10×內(nèi)切酶緩沖液、0.2 μL限制性內(nèi)切酶Bsu36 I和1 μL雙蒸水，總體積為12 μL，37 ℃消化4 h～10 h。用2 %瓊脂糖凝膠電泳酶切產(chǎn)物，并對(duì)基因分型。

2結(jié)果與分析

2.1 SLC13A5基因的擴(kuò)增產(chǎn)物的酶切

若SLC13A5基因的815 bp的擴(kuò)增產(chǎn)物被Bsu36 I酶切為251 bp和564 bp兩種長(zhǎng)度的片段，也就是有3條帶：815 bp、 564 bp、251 bp，則為T(mén)C基因型，若為2條帶：564 bp、251 bp，則為CC基因型，若為1條帶：815 bp，則為T(mén)T基因型。

2.2 基因和基因型頻率

PCR-RFLP-Bsu36 I 多態(tài)性在各品種中的分布情況如表1所示，由表1可知，在寧鄉(xiāng)豬和大白豬中，皆存在三種基因型。其中，在寧鄉(xiāng)豬中主要是CC基因型，C基因頻率為0.876 9：在大白豬中，CC基因型相對(duì)較少，C基因頻率為0.293 9。

SLC13A5基因251 bp處T→C變異位點(diǎn)的基因遺傳多態(tài)性如表2所示，由表2可知，從多態(tài)信息含量上看，大白豬具有遺傳多態(tài)性，并且具有較高的遺傳變異，而寧鄉(xiāng)豬低于0.25，結(jié)果表現(xiàn)為低度多態(tài)。

3 討論與結(jié)論

在寧鄉(xiāng)豬中，C基因?yàn)閮?yōu)勢(shì)等位基因，基因頻率為0.876 9，在大白豬中，T基因?yàn)閮?yōu)勢(shì)等位基因，基因頻率為0.706 1。大白豬具有遺傳多態(tài)性，并且具有較高的遺傳變異，而寧鄉(xiāng)豬為低度多態(tài)。

從本實(shí)驗(yàn)可以知道，在寧鄉(xiāng)豬中，存在SLC13A5基因的三種基因型：TT、TC、CC，其中，CC基因型頻率遠(yuǎn)高于其他兩種基因型頻率。再結(jié)合寧鄉(xiāng)豬的肉質(zhì)性狀數(shù)據(jù)，就可以分析各基因型頻率和肉質(zhì)性狀的相關(guān)關(guān)系，為SLC13A5基因在寧鄉(xiāng)豬的品種選育發(fā)揮作用打下基礎(chǔ)。□□

參考文獻(xiàn)：（4篇，略）

基金資助：寧鄉(xiāng)豬基礎(chǔ)研究（5026401-0315069）.

作者簡(jiǎn)介：蘇建（1990- ），男，漢族，湖南常德人，碩士在讀，研究方向?yàn)樨i分子遺傳育種；E-mail：724809624@qq.com。

通信作者：馬海明，博士，教授，研究方向動(dòng)物遺傳育種；E-mail：mahai ming2000@163.com。