配對盒基因2和CD44基因在子宮內膜癌中的表達及意義

王肅靜陸香鳳黃炳臣++陳慧峰李建湘蔣軍松

【摘要】目的探討配對盒基因2（PAX2）和CD44基因在子宮內膜癌組織中的表達及臨床意義。

方法采用免疫組化法（SP）檢測25例正常子宮內膜組織、51例子宮內膜癌組織中PAX2與CD44的表達情況，并結合臨床病理特征進行分析。

結果PAX2在子宮內膜癌陽性表達顯著少于正常子宮內膜組織（P<0.01），其表達缺失與子宮內膜腺癌肌層浸潤深度、病理組織學分級有關（P<0.05）；CD44在子宮內膜癌陽性表達率顯著高于正常子宮內膜（P<0.01），CD44在子宮內膜癌中的表達與臨床病理特征無顯著相關性（P>0.05）。

結論PAX2和CD44蛋白的異常表達與子宮內膜癌的發生相關，有望成為診斷子宮內膜組織早期癌變的有用指標。

【關鍵詞】子宮內膜癌；PAX2；CD44；免疫組化

中圖分類號：R737.33文獻標識碼：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2016.04.006

子宮內膜癌是女性生殖系統惡性腫瘤之一，近年來發病率逐年上升，其發生發展與遺傳、區域、環境等諸多因素相關。配對盒基因2（Paired box gene2，PAX2）是PAX基因家族的一員，編碼核轉錄因子，目前研究發現，PAX2基因與人類多種腫瘤的發生、發展及預后密切相關。CD44基因是腫瘤干細胞標志物，具有多種功能的活性黏附分子，促進腫瘤細胞的增殖、分化、轉移和凋亡。本研究應用免疫組織化學SP法檢測人正常子宮內膜和子宮內膜癌中PAX2和CD44表達情況，并分析其與臨床病理特征的相關性。

1資料與方法

1.1一般資料

收集河池市人民醫院病理科2014年1月～2015年12月經病理證實的手術切除的子宮內膜癌存檔蠟塊51例，年齡32～72歲，平均（5051±7.78）歲。根據國際婦產科聯合會（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）標準：Ⅰ期36例，Ⅱ期7例，Ⅲ期6例，Ⅳ期2例；病理組織學分級：G1、G2級39例，G3級12例；肌層浸潤<1/2者26例，≥1/2者25例；有淋巴結轉移8例，無淋巴結轉移43例。另選取同期因其他良性疾病手術的正常子宮內膜患者25例作為對照組，年齡26～71歲，平均（49.20±11.92）歲。

1.2病例入選和排除標準

入選標準：經病理科確診為子宮內膜癌患者。排除標準：術前接受激素治療或放化療的子宮內膜癌患者，合并高血壓、糖尿病、高血脂及其他器官惡性腫瘤者。

1.3研究方法

1.3.1所用試劑及檢測方法

即用型兔抗人PAX2多克隆抗體、即用型鼠抗人CD44單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒及DAB顯色劑均購自福州邁新試劑生物技術開發公司。采用鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶連結法（SP法）進行染色，所有組織均以4 μm切片進行染色，染色步驟嚴格按照試劑盒說明進行。用磷酸緩沖液（PBS）代替一抗作陰性對照，用已知陽性切片作陽性對照，PAX2陽性表達定位于細胞核，呈淡黃、棕黃、棕褐色。CD44陽性主要定位于細胞膜。

1.3.2結果評定標準

采用半定量計分方法，根據染色陽性細胞占腫瘤細胞總數百分比和染色強度相加計分。在顯微鏡高倍視野下，隨機選擇5個視野，每個視野計數100個腫瘤細胞，共計數500個細胞。根據陽性染色程度計分：無著色為0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；按陽性細胞所占腫瘤細胞百分比評分：無陽性細胞為0分，陽性細胞<25%為1分，陽性細胞26%～50%為2分，陽性細胞51%～75%為3分，陽性細胞>75%為4分。兩項評分相加<3為陰性，≥3為陽性。

1.3.3觀察項目

對比觀察PAX2與CD44在正常子宮內膜組和子宮內膜癌組中的陽性表達率，并分析子宮內膜癌組中PAX2與CD44的表達情況與臨床病理及二者的相關性。

1.4統計學方法

數據均采用SPSS 17.0軟件進行處理， 計數資料以百分率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，兩者之間相關性分析應用Spearman等級相關分析，檢驗水準：α=0.05。

2結果

2.1PAX2、CD44在正常子宮內膜組織和子宮內膜癌中的表達

PAX2在正常子宮內膜組織中陽性表達率為80%（20/25），陽性定位于內膜腺上皮細胞核，呈棕黃、棕褐色，同時亦表達于內膜間質細胞和平滑肌細胞的細胞核（圖1A）；PAX2在子宮內膜組中陽性表達率為43.1%（22/51），癌細胞核呈淡黃、黃色、棕黃、棕褐色表達（圖1B）；PAX2在子宮內膜癌表達顯著少于正常子宮內膜，差異有統計學意義（P<0.01）。CD44在正常子宮內膜組織中無陽性表達（0/25），在子宮內膜癌中陽性表達率為62.7%（32/51），陽性定位于細胞膜（圖1C），與正常子宮內膜差異有統計學意義（P<0.01）。見表1。

A：增生期正常子宮內膜，PAX2在子宮內膜腺上皮細胞核強陽性表達，SP法；B：高分化子宮內膜腺癌組織，PAX2在腫瘤性腺上皮細胞弱陽性表達，SP法；C：CD44在高分化子宮內膜癌組織腺體細胞表面陽性表達，SP法。

2.2PAX2和CD44的表達與子宮內膜癌臨床病理參數的關系

在51例子宮內膜癌組織中PAX2的陽性表達率為43.1%。PAX2的表達與腫瘤的病理組織學分級、肌層浸潤深度有關，差異有統計學意義（P<0.05），與淋巴結轉移、臨床分期、年齡無關（P>0.05）；CD44的陽性表達率為62.7%， CD44表達與臨床病理參數均無明顯相關性（P>0.05）。見表2。

2.3PAX2與CD44在子宮內膜癌中表達的相關性

在CD44陽性表達的子宮內膜癌組織中有13例PAX2陽性表達，而在CD44陰性的癌組織中，有9例PAX2陽性表達，CD44陽性而PAX2陰性的19例，CD44和PAX2均陰性10例。Spearman 等級相關分析，二者表達無相關性（r=0.066，P=0.646）。

3討論

PAX2基因位于染色體10q24，包含12個外顯子，PAX2編碼的轉錄因子含有一個DNA 結合域和一個反式激活域，與其他核蛋白相互作用，PAX2可通過WT1、CJun等信號途徑的調控影響細胞增殖、分化，其表達異常參與人類乳腺癌、甲狀腺癌、腎癌、膀胱癌、卵巢癌等腫瘤的發生發展[1～2]。Rabban 等[3]通過對宮頸內的腺體和中腎管殘留增殖的腺體研究發現，PAX2表達越強，診斷惡性的可能性就越小，提示其表達缺失與子宮頸癌的發生有關。而PAX2在子宮內膜癌中的表達結果不一，袁雪芹等[4]研究發現，PAX2在增殖期、子宮內膜增生癥和子宮內膜癌中的表達缺失率逐步增高，劉淑玉等[5]研究結果則相反，認為PAX2在子宮內膜癌中的表達顯著高于子宮內膜不典型增生和正常子宮內膜。本研究發現PAX2在子宮內膜癌組織中的表達明顯少于其在正常子宮內膜中的表達，與Allison[6]及張彤等人[7]的研究結果一致。進一步觀察發現，PAX2在正常子宮內膜功能層、基底層腺上皮細胞核及子宮內膜間質細胞核、平滑肌細胞核均呈陽性表達，推測PAX2在正常的子宮內膜組織陽性表達可能與子宮內膜具有不斷的增生修復有關。PAX2在子宮內膜癌中的表達缺失提示其參與子宮內膜癌的發生，其機制可能為子宮內膜是苗勒器官源性組織，PAX2在維持苗勒器官發育成熟過程至關重要，子宮內膜又具有周期性脫落、再生修復的特征，需要PAX2誘導調控，PAX2的表達缺失導致正常子宮內膜生長、分化的調控的異常而導致癌的發生。本研究還發現，PAX2在子宮內膜癌組織中的表達隨著浸潤肌層深度的加深而表達顯著減少，且在低分化癌組中的表達缺失顯著高于中高分化腺癌組，提示PAX2表達缺失可能參與子宮內膜癌的發生、分化、侵襲和轉移，檢測PAX2在子宮內膜癌中的表達，有可能成為子宮內膜癌預后判斷的潛在生物學指標。

腫瘤干細胞是腫瘤組織中具有自我更新和多向分化潛能的細胞，與腫瘤自我更新、演進、復發、耐藥等密切相關。CD44是一類重要的黏附分子，廣泛分布于細胞表面，許多正常細胞表面CD44處于相對靜止狀態，而許多腫瘤細胞表面CD44處于高度活化狀態，是人類多種實體瘤如胃癌、結直腸癌、肺癌、前列腺癌等多種腫瘤干細胞的標志物，能與其主要配體HA結合，介導細胞與細胞、細胞與細胞基質間的相互作用，參與腫瘤細胞生長、分化、遷移等過程[8～9]。研究發現，CD44在頭頸部鱗癌、肝母細胞瘤、卵巢癌、乳腺癌等腫瘤的異常表達促進腫瘤的浸潤、轉移[10～12]。本研究結果顯示，CD44在正常子宮內膜不表達，而子宮內膜癌則呈現異常表達，與Wojciechowski等人[13]研究結果相似。提示CD44可能參與子宮內膜癌的發生，由于子宮內膜癌尤其是高分化子宮內膜癌的早期診斷仍然是病理診斷的難點，CD44可能成為臨床判斷高分化子宮內膜癌的有用分子生物學指標。本研究并未發現CD44在子宮內膜癌中的表達與腫瘤分化、浸潤、轉移等臨床病理特征有顯著相關性，是否與本研究樣本量較小有關，有待進一步研究。本研究還發現，PAX2和CD44在子宮內膜癌中的表達無顯著相關性，提示二者在子宮內膜癌中可能通過不同途徑影響子宮內膜癌的發生發展。

綜上，聯合檢測子宮內膜癌中PAX2和CD44的表達，可作為臨床早期診斷子宮內膜癌的參考指標，并為臨床治療和預后判斷提供依據，其機制有待深入研究。

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（收稿日期：2016-06-08修回日期：2016-08-31）

（編輯：梁明佩）