銀杏二萜內酯對缺血/再灌注大鼠腦組織中神經遞質的影響

張 雯，宋俊科，何國榮，張 雪，周啟蒙，王振中，蕭 偉，肖智勇，周文霞，杜冠華

(1.中國醫學科學院北京協和醫學院藥物研究所，北京市藥物靶點研究與新藥篩選重點實驗室，北京 100050；2.中藥制藥過程新技術國家重點實驗室，江蘇康緣藥業股份有限公司，江蘇 連云港 222001；3.軍事醫學科學院毒物藥物研究所，抗毒藥物與毒理學國家重點實驗室，北京 100850)

◇論 著◇

銀杏二萜內酯對缺血/再灌注大鼠腦組織中神經遞質的影響

張 雯1，宋俊科1，何國榮1，張 雪1，周啟蒙1，王振中2，蕭 偉2，肖智勇3，周文霞3，杜冠華1

(1.中國醫學科學院北京協和醫學院藥物研究所，北京市藥物靶點研究與新藥篩選重點實驗室，北京 100050；2.中藥制藥過程新技術國家重點實驗室，江蘇康緣藥業股份有限公司，江蘇 連云港 222001；3.軍事醫學科學院毒物藥物研究所，抗毒藥物與毒理學國家重點實驗室，北京 100850)

目的 探討銀杏二萜內酯葡胺注射液對缺血/再灌注大鼠腦內氨基酸類和單胺類神經遞質的影響。方法 采用線栓法制備大鼠腦缺血/再灌注模型，缺血1.5 h，再灌注24 h，尾靜脈給予不同劑量銀杏二萜內酯葡胺注射液后，用高效液相色譜串聯電化學檢測器(HPLC-ECD)測定腦內氨基酸類和單胺類神經遞質含量。結果 銀杏二萜內酯葡胺注射液可以抑制缺血/再灌注導致的腦內天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸和γ-氨基丁酸的升高；降低缺血腦區皮層和海馬內去甲腎上腺素、二羥苯乙酸、5-羥色胺、5-羥吲哚乙酸的濃度，抑制皮層內腎上腺素的減少。結論 銀杏二萜內酯葡胺注射液可以通過調節腦內氨基酸類和單胺類神經遞質的水平，對大鼠腦缺血/再灌注引起的損傷發揮治療作用。

銀杏二萜內酯葡胺注射液；腦缺血/再灌注；氨基酸類遞質；單胺類遞質；HPLC-ECD；代謝組學

腦血管疾病是我國中老年人死亡的頭號殺手，在腦血管疾病中，急性缺血性疾病的發病率居于首位，嚴重威脅著人類健康。神經遞質包括氨基酸類神經遞質和單胺類神經遞質，是維持中樞神經功能的重要物質[1-2]。中樞神經遞質的含量和比例決定了中樞神經功能，在腦缺血過程中發揮重要作用。

氨基酸類神經遞質廣泛存在于大腦各個區域，興奮性氨基酸(EAA)和抑制性氨基酸(IAA)在腦內維持興奮-抑制平衡，對認知、運動等功能具有重要的調節作用。腦缺血狀態下，興奮與抑制性氨基酸類神經遞質的平衡被破壞[3-5]，影響中樞神經功能；單胺類神經遞質也發生明顯變化，并能夠通過促進自由基產生、促進EAA釋放和細胞內鈣超載等多種途徑，引發一系列病理生理效應，最終導致細胞凋亡或壞死，成為影響腦缺血/再灌注(CIR)損傷的重要因素[6-7]。因此，調節氨基酸類神經遞質的平衡和單胺類神經遞質的釋放是防治CIR的重要途徑。

銀杏葉的治療作用在我國古代醫書中早有記載，現代研究證明，銀杏提取物具有抑制血小板聚集、抗過敏、抗炎、抗休克，以及保護心腦血管、促進學習記憶、防治老年癡呆等作用。銀杏二萜內酯葡胺注射液(DGMI)主要成分為銀杏內酯A(35%)、銀杏內酯B(60%)、銀杏內酯C(2%)、銀杏內酯K(2%)等，輔料為葡甲胺、檸檬酸、氯化鈉，臨床用于腦梗死的治療[8]。DGMI對神經元保護作用[9]及其防治腦血管疾病的研究雖已有報道[10-12]，但確切機制以及該藥對CIR腦組織中神經遞質的影響尚需進一步研究。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 銀杏二萜內酯葡胺注射液(簡稱銀杏二萜內酯，縮寫為DGMI)，江蘇康緣藥業股份有限公司產品；金納多(EGb761)，購自臺灣濟生化學制藥廠股份有限公司；多巴胺(DA)、二羥苯乙酸(DOPAC)、5-羥色胺(5-HT)、5-羥吲哚乙酸(5-HIAA)、去甲腎上腺素(NE)、腎上腺素(E)、異丙腎上腺素(IP)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、甘氨酸(Gly)、牛磺酸(Tau)、γ-氨基丁酸(GABA)、絲氨酸(Ser)、辛烷磺酸鈉(OSA)均購自Sigma-Aldrich。

1.2 實驗儀器 HR-120電子天平，日本AND公司；BeckMan Allegra X-22R冷凍離心機，美國Beckman公司；HPLC-ECD 5300高效液相色譜庫侖電化學分析系統，美國ESA公司。

1.3 實驗動物 SPF級♂ SD大鼠，體質量240 g～260 g，購自北京維通利華動物技術有限公司，合格證號：SCXK(京)2014-0001。

1.4 動物模型建立 采用線栓法制備大腦中動脈閉塞/再灌注(MCAO/R)模型。380 mg·kg-110%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，仰臥位固定，頸正中線切口，鈍性分離，沿胸鎖乳突肌內緣分離肌肉和筋膜，分離右側頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)和頸內動脈(ICA)。用1號縫合線勒緊CCA近心端及ICA，結扎ECA遠心端，并于ECA下埋線用于固定線栓，ECA上剪出斜行切口，插入線栓，進入18 mm左右，固定線栓。缺血1.5 h后，拔出線栓，實現再灌注，同時尾靜脈注射給藥。銀杏二萜內酯葡胺注射液：低劑量(1 mg·kg-1)、中劑量(3 mg·kg-1)、高劑量(10 mg·kg-1)；陽性對照組金納多：5 mg·kg-1。逐層縫合傷口，大鼠歸籠飼養。

1.5 藥效學評價 再灌注24 h，處死動物前采用Bederson’s標準進行神經行為學評分。斷頭處死大鼠，迅速取出腦組織凍于-20℃冰箱20 min，然后進行冠狀切片，將腦切片置于0.5% TTC溶液中，于37℃避光孵育20 min，之后置于4%多聚甲醛溶液中固定。拍照，采用Image J圖像分析軟件計算腦組織梗死體積。另取大鼠斷頭處死后取腦，稱濕重，然后將腦組織置于100℃恒溫干燥箱中，烘干24 h至恒重，稱重即為干重，按下式計算水腫百分比：水腫百分比/%=(濕重-干重)/濕重×100%。

1.6 氨基酸類遞質含量檢測

1.6.1 溶液配制 0.1 mol·L-1四硼酸鈉(Na2B4O7·10H2O)溶液，調節pH至9.3；OPA/β-Me貯存液的配制：稱取鄰苯二甲醛(OPA)27 mg，溶于1 mL甲醇中，再加入5 μL β-巰基乙醇(β-Me)及9 mL 0.1 mol·L-1四硼酸鈉，貯于棕色瓶中。用時1 mL貯存液加3 mL 0.1 mol·L-1四硼酸鈉稀釋即可；標準品儲備液的配制：稱取各標準品適量，溶于1 mL雙蒸水：甲醇=1 ∶1(V∶V)溶液中貯存；內標液的配制：0.05 mol·L-1高氯酸，含Ser 40 μg·mL-1。

1.6.2 色譜條件 流動相：0.1 mol·L-1Na2HPO4水溶液含0.13 mmol·L-1EDTA.Na2和28%甲醇，用濃磷酸調pH至6.00，0.22 μm微孔濾膜抽濾脫氣；固定相：Column MD-150，3 μm填充不銹鋼柱。工作電壓400 mV，柱溫40℃，流速0.6 mL·min-1。

1.6.3 氨基酸類遞質標準曲線 分別配制Asp、Glu、Gln、Gly、Tau、GABA系列濃度標準品，以Ser為內標，在相應色譜條件下進行測定，分別以Asp、Glu、Gln、Gly、Tau、GABA峰面積與Ser的比值對Ser濃度作線性回歸，考察其線性情況。

1.6.4 動物取材 大鼠行為學檢測結束后，頸椎脫臼處死，迅速取全腦冰上分離皮層、海馬，存于液氮備用。

1.6.5 樣品的處理 取腦組織精確稱重，每100 mg加入200 μL的0.2 mol·L-1高氯酸，超聲粉碎60 s，4℃ 12 000 r·min-1離心30 min取上清液，即為樣品溶液。

1.6.6 衍生化反應 20 μL標準品溶液或樣品溶液加入20 μL內標液，混勻后取20 μL加入40 μL衍生化工作液(OPA/β-Me工作液)，冰上反應2 min，取30 μL進樣，用于檢測。

1.7 單胺類遞質含量檢測

1.7.1 溶液配制 稱取DA、DOPAC、5-HT、5-HIAA、NE、E6種待檢測遞質，溶解于0.05 mol·L-1的高氯酸中，得終濃度為0.2 g·L-1的標準儲備溶液；配制0.02 mol·L-1高氯酸(含IP 1.0 μmol·L-1, EDTA 0.5 mmol·L-1)作為勻漿液。

1.7.2 色譜條件 流動相：0.1 mol·L-1NaH2PO4水溶液含0.85 mmol·L-1OSA、0.5 mmol·L-1EDTA.Na2和11%甲醇，用濃磷酸調pH至3.25，0.22 μm微孔濾膜抽濾脫氣；固定相：Column MD-150，3 μm填充不銹鋼柱。工作電壓400 mV，柱溫35℃，流速0.6 mL·min-1，進樣量30 μL。

1.7.3 單胺類遞質的標準曲線 分別配制DA、DOPAC、5-HT、5-HIAA、NE、E濃度為2 500、1 000、500、250、100、50、25、10 ng·g-1的系列標準品，以IP為內標，在相應色譜條件下進行測定，分別以DA、DOPAC、5-HT、5-HIAA、NE、E峰面積與IP的比值對IP濃度作線性回歸，考察其線性情況。

1.7.4 動物取材 方法同“1.6.4”。

1.7.5 樣品的處理 取凍存組織，每100 mg加入200 μL預冷勻漿緩沖液，超聲40 s，4℃ 12 000 r·min-1離心30 min，取上清液30 μL進樣，進行檢測。

Fig 1 DGMI protects against MACO/R induced brain injury in rats

2 結果

2.1 DGMI對MCAO/R大鼠腦損傷的治療作用 大鼠腦缺血1.5 h，再灌注24 h，缺血側半球出現大面積梗死(梗死體積達28%)。DGMI中高劑量組和5 mg·kg-1EGb761均可減小腦梗死體積，與模型組相比，分別降低22%、32%和25%(Fig 1A 和Fig 1B)；DGMI可以劑量依賴的減輕MCAO/R引起的腦水腫，與模型組比較，3個劑量組的水腫程度分別降低9%、10%和12%，5 mg·kg-1EGb761可降低腦水腫11%(Fig 1C)；高劑量DGMI和5 mg·kg-1EGb761治療組能夠明顯降低MCAO/R引起的大鼠神經行為學缺損評分(Fig 1D)。

2.2 DGMI對MCAO/R大鼠腦組織內氨基酸類遞質含量的影響

2.2.1 氨基酸類遞質專屬性考察 如Fig 2所示，在實驗所采用的HPLC條件下，Asp、Glu、Gln、Gly、Tau、GABA與Ser保留時間分別為1.8、3.0、5.4、8.9、14.8、22.6和4.7 min，各組分間可以完全分離，并且腦組織中內源性物質對測定沒有干擾。

Fig 2 Chromatographic peak of Asp,Glu,Gln,Gly,Tau,GABA and Ser

2.2.2 HPLC法測定氨基酸類遞質的標準曲線 如Tab 1所示，Asp、Glu、Gln、Gly、Tau、GABA在25～1 000 μg·g-1范圍內擬合校正曲線(權重：1/X)相關系數(r2)大于0.99。

Tab 1 Calibration curve of Asp, Glu,Gln,Gly,Tau,GABA in rat brain

2.2.3 DGMI對MCAO/R大鼠腦組織內興奮性氨基酸類遞質的影響 如Fig 3所示，與正常對照組相比，模型組缺血側皮層和海馬興奮性氨基酸類遞質Asp、Glu、Gln的含量都明顯升高；與模型組相比，DGMI中、高劑量組可以明顯降低皮層和海馬中Glu的含量(Fig 3B)，高劑量組可以明顯降低皮層和海馬中Gln的含量(Fig 3C)，但對于Asp含量卻無明顯影響(Fig 3A)。2.2.4 DGMI對MCAO/R大鼠腦組織內抑制性氨基酸類遞質的影響 如Fig 4所示，與正常對照組相比，模型組缺血側皮層和海馬抑制性氨基酸GABA和皮層中的Gly含量有所上升，皮層和海馬內的Tau以及海馬中的Gly沒有明顯變化；與模型組相比，DGMI各劑量均可明顯降低皮層中Gly的含量，中、高劑量的DGMI可以降低GABA的含量，但對于其他氨基酸含量無明顯影響。

2.2.5 腦組織中氨基酸類神經遞質變化特征 對各組大鼠腦組織皮層和海馬中氨基酸類神經遞質進行PCA分析，依據兩個主成分采用SIMCA-P做出平面圖，直觀表現原始數據代表的樣本狀態[13-16]。PCA分析得到的圖譜如Fig 5所示，皮層(Fig 5A)和海馬(Fig 5B)中每一個樣本在PCA圖上的位置由氨基酸含量的定量數值決定。正常對照組、MCAO/R組以及DGMI治療組各自出現在PCA圖譜的相近位置，由此表示各組內樣本含有的氨基酸濃度相近，具有相似生理狀態。從圖中可以看出，MCAO/R組樣品點遠離正常對照組，說明MCAO/R引起了皮層和海馬中氨基酸含量變化。與MCAO/R組相比，DGMI治療組降低了與正常對照組樣品點的離散程度，樣品點不同程度向正常對照組聚集。

Fig 3 Effects of DGMI treatment on levels of Asp (A); Glu (B) and Gln (C) in cortex and hippocampus after 1.5 h of MCAO followed by 24 h reperfusion

Fig 4 Effects of DGMI treatment on levels of Gly (A); Tau (B) and GABA(C) in cortex and hippocampus after 1.5 h of MCAO followed by 24 h reperfusion

Fig 5 PCA for effects of DGMI on levels of amino acid neurotransmitters in cortex (A) and hippocampus (B) after 1.5 h of MCAO followed by 24 h reperfusion

2.3 DGMI對MACO/R大鼠腦組織單胺類遞質含量的影響

2.3.1 單胺類遞質專屬性考察 如Fig 6所示，在實驗所采用的HPLC條件下，NE、E、DOPAC、DA、5-HIAA、5-HT與IP保留時間分別為1.8、2.4、4.1、5.3、7.2、14.6、和8.9 min，各組分之間可以完全分離，并且腦組織中內源性物質對測定沒有干擾。

2.3.2 HPLC法測定單胺類遞質的標準曲線 如Tab 2所示，NE、E、DOPAC、DA、5-HIAA、5-HT在10～2 500 ng·g-1范圍內擬合校正曲線(權重：1/X)相關系數(r2)大于0.99。

2.3.3 DGMI對MCAO/R大鼠腦組織內多巴胺類遞質含量的影響 如Fig 7所示，結果表明，與正常對照組相比，模型組大鼠受損腦區皮層中DA水平有所降低；而海馬中DA水平略有升高。與模型組相比，DGMI治療后，能夠升高缺血側大腦皮層DA水平(Fig 7A)。腦缺血1.5 h再灌注24 h，缺血側皮層和海馬DOPAC含量均明顯升高，與模型組相比，DGMI各劑量組都能夠降低DOPAC含量(Fig 7B)。另外，對各組大鼠皮層、海馬中的DOPAC/DA的值進行了計算和比較。結果顯示，與正常對照組相比，模型組DOPAC/DA水平明顯升高；與模型組相比，DGMI高劑量治療組可以降低海馬中DOPAC/DA水平(Fig 7C)。

Tab 2 Calibration curve of NE,E,DOPAC, DA,5-HIAA,5-HT in rat brain

Fig 6 Chromatographic peak of NE,E,DOPAC,DA,5-HIAA,5-HT and IP

Fig 7 Effects of DGMI treatment on levels of DA (A); DOPAC (B) and DOPAC/DA (C) in cortex and hippocampus after 1.5 h of MCAO followed by 24 h reperfusion

Fig 8 Effects of DGMI treatment on levels of 5-HIAA (A); 5-HT (B) and 5-HIAA/5-HT (C) in cortex and hippocampus after 1.5 h of MCAO followed by 24 h reperfusion

2.3.4 DGMI對MCAO/R大鼠腦組織內5-HT類遞質含量的影響 如Fig 8所示，與正常對照組相比，模型組缺血側皮層和海馬5-HIAA含量均明顯升高；與模型組相比，DGMI高劑量組能夠降低5-HIAA含量(Fig 8A)。腦缺血1.5 h再灌注24 h，缺血側皮層和海馬5-HT含量均明顯升高，與模型組相比，DGMI中、高劑量組都能夠明顯降低5-HT含量(Fig 8B)。同時，對各組大鼠皮層、海馬中的5-HIAA/5-HT的值進行比較。結果顯示，與正常對照組相比，模型組海馬中5-HIAA/5-HT水平明顯升高；與模型組相比，DGMI治療組對5-HIAA/5-HT水平沒有明顯影響(Fig 8C)。

2.3.5 DGMI對MCAO/R大鼠腦組織去甲腎上腺素與腎上腺素含量影響 如Fig 9所示，與正常對照組相比，模型組缺血側皮層、海馬NE和E的含量均明顯升高，而與模型組相比，DGMI高劑量組，能夠降低NE含量。與模型組相比，DGMI治療組缺血側皮層和海馬中E的水平均沒有明顯變化。

2.3.6 腦組織中單胺類神經遞質PCA分析 對各組大鼠腦組織皮層和海馬中單胺類神經遞質進行PCA分析，由兩個主成分采用SIMCA-P做出平面圖。如Fig 10所示，正常對照組、MCAO/R組以及DGMI治療組各自出現在PCA圖譜的相近位置，由此表示各組內樣本含有的單胺類遞質濃度相近，具有相似生理狀態。MCAO/R組遠離正常對照組樣品點，說明MCAO/R引起皮層(Fig 10A)和海馬(Fig 10B)中單胺類神經遞質含量變化。DGMI治療組能夠不同程度降低樣品點離散程度，向正常對照組聚集。

3 討論

腦缺血/再灌注可以導致一系列繼發性病理、生理變化，其中腦內興奮與抑制性氨基酸遞質濃度失衡是造成腦組織損傷的重要因素之一[1]。興奮性氨基酸(EAA)是廣泛存在于哺乳動物中樞神經系統的正常興奮性神經遞質，參與突觸興奮傳遞、學習記憶形成[17]。由于缺血/缺氧，神經元去極化，釋放大量EAA。EAA毒性作用對腦組織的損傷主要表 現為：過多的EAA引起突觸后神經元去極化，大量K+外流，Na+內流，Cl-及H2O被動內流引起以神經元滲透性水腫為主的急性損傷，誘導細胞壞死和凋亡；通過刺激EAA受體，啟動Ca2+通道，Ca2+大量內流，激活一系列依賴于Ca2+的酶系統，造成遲發性神經元變性壞死[18-19]。

Fig 9 Effects of DGMI treatment on levels of NE (A); and E (B) in cortex and hippocampus after 1.5 h of MCAO followed by 24 h reperfusion

Fig 10 PCA for effects of DGMI on levels of monoamine neurotransmitters in cortex (A) and hippocampus (B) after 1.5 h of MCAO followed by 24 h reperfusion

作為中樞神經系統內的IAA，GABA是三羧酸循環中Glu在谷氨酸脫羧酶誘導生成的產物，GABA可通過突觸后膜超極化、減少離子內流、降低細胞代謝及氧消耗，使突觸后神經元處于保護性抑制狀態，抑制神經元興奮，減輕細胞損傷；并通過突觸前抑制減少Glu的釋放，減輕EAA毒性作用[20-21]。

MCAO/R損傷后，EAA局部濃度升高，Na+、Cl-和水大量流入細胞內，造成神經元的急性腫脹，產生興奮性毒性[22]。同時MCAO/R引起的能量缺乏，導致神經和膠質細胞攝取功能下降，造成細胞外EAA濃度升高；鈣離子超載，自由基及腺苷酸含量升高將進一步刺激Glu和Asp濃度升高，使細胞外堆積大量的EAA。同時為了達到機體內興奮—抑制平衡，IAA水平升高[23-24]。DGMI可以調節MCAO/R大鼠腦組織內EAA和IAA的水平，降低EAA含量以減少EAA對神經元產生的興奮性毒性，降低IAA水平以恢復腦組織中興奮—抑制平衡?？偟膩碚f，DGMI可以調節MCAO/R大鼠腦內EAA、IAA水平，使腦組織中異常升高的EAA和IAA趨向于恢復正常，抑制MCAO/R造成的神經元壞死，改善腦組織損傷。

1974年Wrutman等根據臨床和實驗資料提出缺血性腦損傷的單胺類遞質假說，認為單胺類遞質的過度釋放是腦缺血后腦血管痙攣、血流障礙的主要原因。同時單胺類遞質釋放增加又可加速組織脂質過氧化，促使線粒體氧化磷酸化分離，加重腦缺血，最后產生腦水腫，形成惡性循環[6]。但是目前對于單胺類遞質在MCAO/R損傷中的具體作用及其過程尚未有明確定論。

本實驗結果表明，MCAO/R損傷后DA大量釋放，直接發揮神經毒性作用、介導EAA和自由基的毒性作用，導致細胞脂質微環境破壞，微血管損傷，細胞內蛋白質、DNA、RNA、氨基酸及高糖分子氧化、交聯、變性，線粒體呼吸功能受到抑制，細胞內鈣超載、最終導致神經元損傷壞死、凋亡[25]。DOPAC是DA的代謝產物，其比值反映了DA的代謝率水平。MCAO/R會導致DA代謝加強。再灌注24 h，DOPAC含量明顯增加，海馬中DA水平略有升高而皮層中DA含量略有下降，并且DOPAC/DA明顯增加，說明，DA分解加強大于合成加強，此過程消耗大量能量，能量的過分需求使原本已經損傷的產能系統—線粒體的負荷進一步加重，導致神經元損傷加重或壞死[26]。

腦缺血時，腦組織中大量的E能夠引起血管強烈收縮，從而加重腦缺血損傷及血管源性腦水腫。E的釋放會加劇神經元代謝，并增加缺血組織血流與代謝需求的失衡[27]。

腦缺血后細胞外5-HT濃度迅速升高。缺血/缺氧后內皮屏障被破壞，5-HT則可進入平滑肌引起血管收縮。同時5-HT能夠加強EAA的神經毒性，使EAA引起的興奮性去極化幅度和時相加強，伴隨細胞內鈣離子的快速聚集。同時5-HT使花生四烯酸代謝加強，產生多種有毒產物，加重缺血/再灌注損傷[28]。5-HIAA是5-HT的代謝產物，其比值反映了5-HT的代謝率水平。MCAO/R會導致5-HT濃度迅速升高，代謝加強，5-HIAA含量明顯增加，并且5-HIAA/5-HT明顯升高。

DGMI治療組能夠抑制DA含量增加，并且抑制其代謝。同時可以抑制5-HT的產生，并且降低其代謝產物5-HIAA的含量。

以上實驗結果表明，DGMI可以改善由于能量衰竭、去極化導致遞質外流和重攝取障礙，抑制MCAO/R導致的腦內Asp、Glu、Gln、Gly、GABA升高；降低缺血腦區皮層和海馬內NE、DOPAC、5-HT、5-HIAA的表達，抑制皮層內E的降低，從而對MCAO/R大鼠發揮腦保護作用。

綜上所述，MCAO/R導致腦組織中神經遞質變化，DGMI可以有效調節其腦內濃度，減輕缺血引起的變化，這種作用可能是DGMI促進損傷組織修復的基礎，也可能是由于其他途徑促進神經細胞功能恢復影響了遞質的變化，其詳細機制有待進一步研究。可以確定的是，DGMI治療腦缺血損傷與神經遞質的變化有密切關系。

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Effects of diterpene ginkgolides meglumine injection on neurotransmitters in cerebral ischemia-reperfusion injury rats

ZHANG Wen1, SONG Jun-ke1, HE Guo-rong1, ZHANG Xue1,ZHOU Qi-meng1,WANG Zhen-zhong2, XIAO Wei2, XIAO Zhi-yong3, ZHOU Wen-xia3,DU Guan-hua1

(1.BeijingKeyLaboratoryofDrugTargetIdentificationandDrugScreening,InstituteofMateriaMedica,ChineseAcademyofMedicalSciencesPekingUnionMedicalCollege,Beijing100050,China; 2.StateKeyLaboratoryofNew-techforChineseMedicinePharmaceuticalProcess,JiangsuKanionPharmaceuticalCo.,Ltd.,LianyungangJiangsu222001,China；3.StateKeyLaboratoryofToxicologyandMedicalCountermeasures,InstituteofPharmacologyandToxicology,AcademyofMilitaryMedicalScience,Beijing100850,China)

Aim To investigate the effects of diterpene ginkgolides meglumine injection (DGMI) on amino acids and monoamine neurotransmitters in rats with cerebral ischemia/reperfusion injury. Methods Intraluminal suture was applied to establish middle cerebral artery occlusion (MCAO/R) model with ischemia for 1.5 h and reperfusion for 24 h. After the administration of DGMI (i.v.), the levels of amino acid and monoamine neurotransmitters in brain tissue were detected through HPLC-ECD. Results DGMI down-regulated the concentrations of aspartic acid, glutamic acid, glycine and γ-aminobutyric acid which were increased in MCAO/R group. DGMI also reduced the levels of norepinephrine epinephrine, glyoxylic acid, serotonin and 5-HIAA in cortex and hippocampus, and increased adrenaline content compared to the model group. Conclusion DGMI exhibits a protective role in rats with cerebral ischemia /reperfusion injury through regulating amino acids and monoamine neurotransmitters.

DGMI; cerebral ischemia-reperfusion; amino acid neurotransmitters, monoamine neurotransmitters; HPLC-ECD; metabonomics

時間：2016-12-5 15:14

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20161205.1514.010.html

2016-08-02,

2016-09-20

國家科技部“重大新藥創制”科技重大專項資助項目(No 2013ZX09508104，2013ZX09402203)；抗毒藥物與毒理學國家重點實驗室開放課題(No TMC201510)；國家自然科學青年基金項目(No 81603100)；北京協和醫學院研究生創新基金項目(No 2015-1007-07)

張 雯(1990-)，女，博士生，研究方向：神經藥理學與新藥發現，Tel：010-63131571，E-mail：zhangwen9010@imm.ac.cn; 杜冠華(1956-)，男，博士，研究員，博士生導師，研究方向：神經藥理學、心腦血管藥理學與新藥發現，通訊作者,Tel：010-63165184，E-mail：dugh@imm.ac.cn

10.3969/j.issn.1001-1978.2016.12.005

A

1001-1978(2016)12-1648-09

R-332；R282.71；R322.81；R341.7；R347；R743.310.531