不同群體無償獻血者核酸檢測的結果分析及應用

李俊英，葛文超 ，王藝芳，方建華

(河南省紅十字血液中心檢驗科，鄭州 450053)

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·論 著·

不同群體無償獻血者核酸檢測的結果分析及應用

李俊英，葛文超 ，王藝芳，方建華△

(河南省紅十字血液中心檢驗科，鄭州 450053)

目的 通過對獻血者血液標本核酸檢測(NAT)的結果分析，評價不同獻血者的血液安全性及核酸檢測的必要性，同時針對獻血者性別、年齡和職業差異的特點，完善無償獻血宣傳和人群篩選策略，保證血液安全。方法 對鄭州地區2012年9月至2014年8月259 329例無償獻血者NAT結果進行分析，并對陽性獻血者依據不同性別、年齡及職業進行回顧性統計。結果 在259 329例經酶聯免疫吸附試驗(ELISA)陰性的獻血者中檢出144例核酸陽性標本，核酸陽性率為0.056%。不同性別、年齡和職業的差異均有統計學意義(P<0.05)。其中，男性獻血者核酸陽性率(0.075%)比女性獻血者(0.023%)明顯偏高(P<0.01)；核酸陽性率以36～45歲最高(0.088%)，18～25歲最低(0.022%)；不同職業人群中以農民的核酸陽性率(0.095%)較高，公務員(0)、醫務工作者(0)、學生的核酸陽性率(0.018%)較低。結論 實施NAT能更好地保證血液的安全性；學生、公務員及女性血液NAT陽性率較低，應為血站重點招募人群。

核酸檢測； 獻血者； 核酸陽性率

輸血在臨床救治中發揮著不可替代的作用，但輸血亦存在風險[1]，尤其是可導致乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人類免疫缺陷病毒(HIV)的傳播。目前，核酸檢測(NAT)技術是世界上最先進、最精確的疾病檢測手段。人體感染了病毒，體內就會不斷復制并產生大量病毒，這一過程要先于體內對病毒的識別和產生免疫反應[2]。此外，NAT還可以檢出因病毒變異、免疫靜默感染而漏檢的血液，因此，開展NAT是保障血液安全的重要手段。目前，歐美、日本等發達國家的采供血機構已經全面使用NAT技術結合1遍血清學方法進行血液篩查[3]。我國自2010年6月在全國15家采供血機構開展第1批NAT試點工作以來，成效顯著。為了解鄭州地區不同性別、年齡、職業的獻血者NAT陽性率的流行特點，對2012～2014年本中心無償獻血者NAT結果進行回顧性分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年9月至2014年8月鄭州市無償獻血者經酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測為陰性的標本259 329例。

1.2 儀器與試劑 全自動Hamilton STAR加樣儀；全自動Hamilton Microlab FAME酶免分析儀；兩套核酸檢測系統：Roche Cobas s 201血液核酸篩查系統(包括Hamilton STAR全自動混樣儀、Cobas Ampliprep 核酸提取儀和Taqman Analyzer核酸擴增檢測儀)及上海科華血液核酸篩查系統(包括Hamilton STAR全自動混樣、提取儀及ABI 7500 實時熒光擴增儀)。酶免試劑：乙肝表面抗原(HBsAg)(北京萬泰和珠海麗珠)，丙肝抗體(抗-HCV)(北京萬泰和上海科華)；艾滋抗原抗體(HIV Ag/Ab)(北京萬泰和法國BIO-RAD公司)；NAT試劑：Cobas TaqScreen MPX 1.0 test NAT試劑盒(批號R01528，R07643，S00983)；科華HBV、HCV、人類免疫缺陷病毒-1型(HIV-1)NAT試劑盒(批號20111110、20130610、20131020)。以上試劑均批檢合格，且在有效期內使用。

1.3 檢測方法 當日采用兩種不同廠家的ELISA試劑對獻血者的標本進行常規檢測，次日從核酸組挑除ELISA反應性標本，ELISA陰性標本隨機采用一種核酸篩查系統進行檢測。NAT混檢有反應性、拆分亦有反應性的標本判為陽性。

1.4 質量控制 通過陰性質控品和陽性質控品來控制試劑盒的質量和檢測的有效性，標本的采集、運輸到檢測均嚴格按照SOP進行操作，核酸實驗人員均參加過國家衛生和計劃生育委員會臨檢中心舉辦的NAT培訓班且考核成績合格。此外本實驗室每年定期參加省衛生和計劃生育委員會臨檢中心和中國國際輸血感染預防和控制(CITIC)舉辦的血站核酸擴增檢測項目的室間質評，成績均合格。

1.5 核酸陽性獻血者的分組比較 本血液中心核酸陽性獻血者以性別、年齡、職業進行統計分析。

1.6 統計學處理 應用SPSS21.0統計學軟件處理數據，組間率的比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 核酸陽性率情況 2012年9月至2014年8月本中心共進行NAT標本259 329例，檢出核酸陽性標本144例，陽性率為0.56‰。

2.2 不同性別、年齡及職業人群NAT陽性率的比較 見表1～3。男性獻血者核酸陽性率高于女性， 36～45歲核酸陽性率最高，農民的核酸陽性率較其他職業人群偏高。

表1 不同性別NAT陽性率的比較

注：不同性別NAT陽性率的比較，χ2=29.35，P<0.01。

表2 不同年齡組NAT陽性率的比較

注：不同年齡組NAT陽性率的比較，χ2=36.57,P<0.01。

表3 不同職業NAT陽性率的比較(%)

注：因公務員、醫務工作者NAT陽性數均為0，采用Fisher確切概率法，不同職業人群NAT陽性率的比較,χ2=32.15,P<0.01。

3 討 論

輸血相關病毒性傳染病不僅成為輸血界的重要議題，而且成為整個衛生界甚至全社會的焦點[4]。目前，國內采供血機構普遍采用兩遍ELISA檢測，由于該試劑和方法上的局限性，存在一定的漏檢，給臨床用血安全造成了隱患。近年來，我國越來越多的采供血機構開展了靈敏度、特異度較高的NAT技術，更好地保障了臨床用血安全。

從本研究的結果來看，本中心在259 329例ELISA陰性標本中共檢出144例NAT陽性標本，陽性率為0.056%。根據其乙肝五項及對獻血者追蹤的結果可知，大多數為原發性隱匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)病例[5]，而輸注含有OBI血液的受血者則有可能導致感染HBV的風險[6]。144例NAT陽性標本中，有1例為HIV RNA陽性，1例HCV RNA陽性，初步推測本地區的HIV RNA和HCV RNA陽性率約為1/25.9萬，低于深圳市HCV RNA陽性率(1/13.1萬)、遼寧省血液中心HIV RNA陽性率(1/17.7萬)[7]，以及任芙蓉等[2]報道的合格血液中HCV的漏檢率1/4.4萬。各地陽性率的差異，可能與ELISA篩查試劑、NAT試劑、本地區的疾病流行水平，以及研究樣本量的大小有關，尤其是研究樣本量的大小，在低陽性率時樣本量對陽性率的影響更加明顯[8]。盡管以上研究報道的NAT陽性率不盡相同，但是均說明無償獻血者中存在ELISA的漏檢，NAT是一種強有力的篩查補充。

將259329例ELISA陰性但NAT陽性的獻血者按性別、年齡及職業分別分組進行比較，發現3種分類方法的組間差異均有統計學意義(P<0.05)。從表3可以發現：(1)鄭州地區男性獻血者NAT陽性率遠高于女性。估計與男性的生活不規律、飲酒較多、身體狀況很多處于亞健康，更易受到病毒的感染有關。(2)從不同年齡組間NAT陽性率差異來看，36～<45歲年齡組獻血者的NAT陽性率最高，其次為≥45歲的年齡組。估計該兩組年齡段的人群出生在中國六七十年代的生育高峰期，當時國家未實施新生兒乙型肝炎疫苗接種，醫療衛生條件和防范意識差，導致該年齡段NAT陽性率較高。而35～<45歲年齡組的人群，他們社會活動多，應酬多，接觸傳染源的機會也多，所以也更容易感染，陽性率最高。而18～<25歲年齡組的人群，可能與我國從1992年開始實施HBV計劃免疫有關，HBV嬰幼兒免疫大大降低了低年齡組人群中的HBV流行率，并且其中有很大一部分是在校學生，生活單純，接觸病原感染的機會較少，所以該年齡段的人群NAT陽性率最低。(3)從不同職業分布來看，農民的NAT陽性率最高，估計由于他們平時生活條件較差，工作壓力較大，對衛生意識和健康不夠重視，其次為技術人員和其他。其中其他(不明職業)獻血者在無償獻血中發揮主力軍的作用，是獻血比例最高的人群，因為由于社會分工越來越細，有些職業范疇難以確定，再者他們可能由于某些原因不愿透露自己的職業。本研究顯示公務員、醫務工作者的NAT陽性率為0，估計該群體平時注重自己的身體，經常體檢，合格率較高，同時也可能因該群體獻血人數太少有關。除了公務員、醫務工作者，學生的NAT陽性率最低(0.018%)，可能學生因生活單純，注射過乙型肝炎疫苗，因此陽性率較低，因此這部分人群可以作為重點目標人群進行獻血招募。針對以上情況分析，本中心已定期與鄭州市區的高校和機關事業單位聯系，獻血車進校園、進機關、進醫院、進企事業單位為他們提供更方便的獻血服務，進一步擴大該團體的招募獻血，目前該部分人群比例正在不斷提高；同時加強工作人員培訓，強化征詢技巧與策略，從低危人群中招募獻血志愿者。

為消除不同檢測試劑對不同人群NAT陽性率差異的影響，作者針對兩種NAT試劑各自篩查出的NAT陽性獻血者，依照不同性別、年齡、職業做了單獨分析比較，發現羅氏試劑的結果分析與表3結果一致；科華試劑在獻血者不同性別、年齡組的差異，與整體聯合分析的結果一致，均為男性獻血者NAT陽性率高于女性；36～45歲獻血者的NAT陽性率最高，18～<25歲獻血者的NAT陽性率最低，但在職業分布上，以技術人員陽性率最高，其次為農民，估計與科華試劑檢出的陽性標本數較少，而職業分類較多，受檢測樣本量的影響較大有關。

綜上所述，通過對獻血者的標本實施NAT，能使輸血感染相關病毒的風險降到最低，極大程度地保障血液安全；另外從以上數據的統計分析可以看出：鄭州地區獻血者人群的人口學特征是，45歲以下占主體、男性為主、其他職業人群為主，女性、18～<25歲及公務員、醫務工作者、學生的NAT陽性率較低，這為有針對地動員更多女性和年輕的獻血者參加獻血，及時調整招募策略，以及采取措施鼓勵更多獻血者重復獻血，提供了一定的參考數據。

[1]Sachs UJ.Recent insights into the mechanism of transfusion-related acute lung injury[J].Curr Opin Hematol,2011,18(6):436-442.

[2]任芙蓉，王憬惺，趙海燕，等．我國5城市合格獻血者血液HIV及HCV殘余風險研究[J]．中國輸血雜志，2007，20(6)：469-475．

[3]張龍穆，馮秋霞．楊忠思，等．核酸檢測對HIV篩查的影響[J]．臨床輸血與檢驗，2015，17(3)：249-251．

[4]馮秋霞，侯云，劉麗，等.1遍ELISA+1遍NAT血液篩查模式的應用研究[J].中國輸血雜志，2014,27(9)：920-922.

[5]涂東晉，趙亮，林授，等．福州地區獻血者人群隱匿性乙型肝炎病毒感染及其基因型與S區突變的研究[J]．中國輸血雜志，2015，28(5)：523-527．

[6]Satake M,Taira R,Yugi H,et al.Infectivity of blood components with low hepatitis B virus DNA levels identified in a lookback program[J].Transfusion,2007,47(7):1197-1205．

[7]王芳，欒燕，劉顯智．核酸檢測技術(NAT)在獻血者人類免疫缺陷病毒篩查中的應用[J]．中國輸血雜志，2010，23(10)：892-894．

[8]李俊英，王藝芳，葛文超，等．2種核酸篩查系統應用于病毒核酸檢測的比較[J].中國輸血雜志，2015，28(6)：720-723．

Analysis and application of nucleic acid testing results among different groups of blood donors

LIJunying,GEWenchao,WANGYifang,FANGJianhua△

(DepartmentofClinicalLaboratory,HenanProvincialRedCrossBloodCenter,Zhengzhou,Henan450053,China)

Objective To analyze the results of nucleic acid testing(NAT) and to evaluate the blood safety of different blood donors and necessity of NAT,meanwhile to perfect the voluntary blood donation propaganda and population screening strategy for ensuring the blood safety.Methods The results of NAT in 259 329 voluntary blood donors in Zhengzhou area from September 2012 to August 2014 were analyzed.Then the positive blood donors were retrospectively analyzed according to different genders,ages and occupations.Results Among 259 329 negative blood donors detected by ELISA,144 cases of NAT positive samples were detected,the nucleic acid positive rate was 0.056%.The different genders,ages and occupations had statistically significant difference in the NAT results.Among them,male donors had a significantly higher NAT positive rate than female(0.075%vs. 0.023%,P<0.01).The NAT positive rate was highest in the age group of 36-45 years old(0.088%)and lowest in the age group of 18-25 years old(0.022%);in different occupational groups,the NAT positive rate in the farmers group was higher(0.095%),but which in civil servants,medical workers and students group(0,0,0.018%).Conclusion The NAT implementation can better ensure the blood safety,students,civil servants and the females should serve as the focus recruited populations due to lower NAT positive rate.

nucleic acid testing; blood donors; NAT positive rate

李俊英，女，主管技師，主要從事血液檢驗研究。△

，E-mail:xyzxjyk@yahoo.com.cn。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.24.014

A

1673-4130(2016)24-3421-03

2016-09-01

2016-10-20)