改良龍膽紫快速染色法檢測(cè)陰道分泌物真菌的研究應(yīng)用

張 玲,陳艷文,周碧云,李淑嘉,趙 望,巫小莉

(廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心 510168)

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·臨床研究·

改良龍膽紫快速染色法檢測(cè)陰道分泌物真菌的研究應(yīng)用

張 玲,陳艷文,周碧云,李淑嘉,趙 望,巫小莉△

(廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心 510168)

目的 研究一種簡(jiǎn)易快速染色法，提高陰道真菌的檢出率，為臨床提供診斷依據(jù)。方法 改良龍膽紫快速染色法：于白帶常規(guī)的試管中加入生理鹽水約0.3 mL，龍膽紫(革蘭Ⅰ液)1滴，室溫染2 min，1滴懸液均勻涂于玻片中鏡檢。結(jié)果 孢子無(wú)色而夾膜則呈亮黃綠色，真菌菌絲著色不均勻呈紫色或無(wú)色，上皮細(xì)胞、白細(xì)胞、球菌、加德納菌、線索細(xì)胞染成紫色，滴蟲(chóng)、乳酸桿菌不上色，紅細(xì)胞呈暗紅色。孢子檢出率高于革蘭快速染色法和生理鹽水懸液濕片法。結(jié)論 改良龍膽紫快速染色法，融合了傳統(tǒng)生理鹽水懸液濕片法和革蘭快速染色法的優(yōu)點(diǎn)，快速、簡(jiǎn)單，易掌握，涂片色差大，孢子易于辨認(rèn)，檢測(cè)準(zhǔn)確性高，實(shí)用性強(qiáng)，有臨床應(yīng)用價(jià)值。

改良龍膽紫快速染色法; 革蘭快速染色法; 生理鹽水懸液濕片法; 真菌

真菌、細(xì)菌及滴蟲(chóng)性陰道炎、子宮炎是婦科的常見(jiàn)病和多發(fā)病，但這3種病患者的臨床表現(xiàn)常無(wú)區(qū)別[1]。陰液(白帶)常規(guī)是婦科炎癥一種常見(jiàn)的常規(guī)檢查手段，檢查結(jié)果準(zhǔn)確與否直接影響臨床醫(yī)生對(duì)患者的診斷、用藥和治療，如何能快速準(zhǔn)確給臨床提供診斷依據(jù)，是檢驗(yàn)界一直探討的問(wèn)題。常用的生理鹽水懸液濕片法干擾因素多，體積細(xì)小的孢子混雜在分泌物中容易漏檢，所以檢出率低[2]；而革蘭快速染色法操作繁瑣檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，難以應(yīng)付大批量的門診標(biāo)本，為改變這種局面，作者嘗試用龍膽紫(革蘭第Ⅰ液)直接滴加到白帶常規(guī)鹽水懸液中染色，濕片鏡檢,收到理想的效果，作者稱之為改良龍膽紫快速染色法。

1 材料與方法

1.1 材料 奧林巴斯BX-43雙目顯微鏡、玻片、0.9%生理鹽水、革蘭染色液(貝索企業(yè)，批號(hào)415061)。

1.2 標(biāo)本來(lái)源 376例來(lái)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)金沙洲醫(yī)院2015年11月體檢中心及婦科門診患者陰液常規(guī)標(biāo)本。

1.3 方法

1.3.1 0.9%生理鹽水懸液濕片法 于陰液常規(guī)管內(nèi)加入生理鹽水約0.3 mL制成懸液，涂片高倍鏡(40×)鏡檢(并留用于革蘭染色)。

1.3.2 革蘭快速染色法 上述涂片，按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行初染、媒染、脫色、復(fù)染[3]，油鏡(100×)鏡檢。

1.3.3 改良龍膽紫快速染色法 于上述0.9%生理鹽水懸液(約0.3 mL)中加入龍膽紫(革蘭Ⅰ液)1滴，室溫染2 min，1滴懸液均勻涂于玻片中，高倍鏡(40×)鏡檢。

2 結(jié) 果

2.1 生理鹽水懸液法 背景雜質(zhì)多，孢子不易辨認(rèn)，特別是不典型的小孢子,很容易漏檢；見(jiàn)圖1。

2.2 革蘭快速染色法 孢子、菌絲、乳酸桿菌染成紫色，上皮細(xì)胞、白細(xì)胞、加德納菌、線索細(xì)胞、染成紅色；見(jiàn)圖2。

注：菌絲+孢子。

圖1 生理鹽水懸液法(高倍鏡，40×)

注：菌絲+孢子。

圖2 革蘭快速染色法(油鏡，100×)

2.3 改良龍膽紫快速染色法 孢子無(wú)色而夾膜則呈亮黃綠色，真菌菌絲著色不均勻呈紫色或無(wú)色，上皮細(xì)胞、白細(xì)胞、球菌、加德納菌、線索細(xì)胞染成紫色，滴蟲(chóng)、乳酸桿菌不上色、紅細(xì)胞呈暗紅色，見(jiàn)圖3。

2.4 3種方法結(jié)果對(duì)比 376例陰液常規(guī)標(biāo)本，真菌檢出率以改良龍膽紫快速染色法為首，革蘭快速染色法為次，生理鹽水懸液濕片法次之，結(jié)果見(jiàn)表1。

注：菌絲+孢子。

圖3 改良龍膽紫快速染色法(高倍鏡，40×)

3 討 論

陰道分泌物檢查真菌，是診斷女性生殖道真菌感染的一種最直接有效的方法，結(jié)果準(zhǔn)確與否嚴(yán)重影響臨床醫(yī)生對(duì)患者的診斷、用藥和治療[4-7]。目前很多醫(yī)院都在采用生理鹽水濕片法或革蘭快速染色法。生理鹽水濕片法，背景雜質(zhì)多，孢子不易辨認(rèn)，容易漏檢和誤檢，檢出率低；革蘭快速染色法經(jīng)過(guò)固定、初染、媒染、脫色、復(fù)染等步驟，操作繁瑣，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，難以應(yīng)付大批量的門診標(biāo)本。而且在工作中發(fā)現(xiàn)，革蘭快速染色法雖然有固定的步驟，孢子會(huì)在染片過(guò)程中因沖洗而流失部分不易找到，往往造成鏡檢時(shí)間長(zhǎng)的局面；改良龍膽紫快速染色法，孢子無(wú)色而夾膜則呈亮黃綠色，真菌菌絲著色不均勻，呈紫色或無(wú)色。不僅孢子、菌絲易于辨認(rèn)，而且還不影響不干擾陰液常規(guī)中其他項(xiàng)目的檢查，上皮細(xì)胞、白細(xì)胞、球菌、乳酸桿菌、加德納菌、線索細(xì)胞染成紫色、滴蟲(chóng)無(wú)色(滴蟲(chóng)在懸液中與鹽水濕片法一樣會(huì)游動(dòng))、紅細(xì)胞呈暗紅色。孢子與涂片顏色反差大，很容易辨別。但隨著染色時(shí)間延長(zhǎng)，鏡檢中也可以看到染成紫色的孢子，可能是孢子離體時(shí)間長(zhǎng)，新陳代謝減弱，還原性減弱，滲透到孢子壁內(nèi)的染液增多，故而染上色，作者認(rèn)為這一類是死孢子；而活孢子細(xì)胞壁完整光滑，染液不易滲透至孢子體內(nèi)[8]，故不上色。建議染色時(shí)間以2 min為宜，一般不超過(guò)10 min。

改良龍膽紫快速染色法檢測(cè)陰道真菌，融合了傳統(tǒng)生理鹽水懸液濕片法和革蘭快速染色法的優(yōu)點(diǎn)，涂片色差大，孢子易于辨認(rèn)，檢測(cè)準(zhǔn)確性高，實(shí)用性強(qiáng)，有較高的推廣應(yīng)用價(jià)值。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.24.035

A

1673-4130(2016)24-3473-02

2016-05-26

2016-07-29)

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