尿標本前處理對測定尿微量清蛋白的影響

譚 昆，李全雙，徐 湛，任思坡，韓光宇，吳 燕，梁 軍

(1.江蘇省徐州市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所 221006;2.江蘇省徐州市中心醫(yī)院 221006;3.江蘇省徐州市糖尿病研究所 221006)

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·臨床研究·

尿標本前處理對測定尿微量清蛋白的影響

譚 昆1，李全雙1，徐 湛1，任思坡1，韓光宇1，吳 燕1，梁 軍2,3△

(1.江蘇省徐州市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所 221006;2.江蘇省徐州市中心醫(yī)院 221006;3.江蘇省徐州市糖尿病研究所 221006)

目的 探討標本前處理對免疫透射比濁法測定尿微量清蛋白(mALB)的影響。方法 患者尿液標本54例，其中清澈組25例，渾濁組29例。清澈組、渾濁組均分為3組，未離心組、離心1 min組及離心5 min組，用免疫透射比濁法檢測mALB。結(jié)果 清澈組3組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；渾濁尿標本中mALB檢測未離心組與離心1 min和5 min組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而2組離心標本之間mALB檢測差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 清澈尿標本可直接用于mALB檢測，而渾濁尿標本需離心1 min后測定結(jié)果較準確。

尿微量清蛋白； 透射免疫比濁法； 尿液； 離心

尿微量清蛋白(mALB)是指在尿液中含有的微量清蛋白，其濃度的正常范圍小于20 mg/24 h[1]，是臨床上發(fā)現(xiàn)早期腎損傷的一種重要的預(yù)示因子之一[2]。透射免疫比濁法測定mALB操作簡便、快速，可隨時進行標本相關(guān)檢測，已在臨床實驗室得到廣泛應(yīng)用[3-4]。但由于受患者飲食、疾病等影響導(dǎo)致患者尿標本渾濁程度不一。渾濁尿標本較為復(fù)雜，常含有微顆粒、細胞碎片等，常會對mALB測定產(chǎn)生，本研究通過對患者尿標本進行不同時間離心處理，探討對mALB檢測的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年徐州市中心醫(yī)院住院患者尿液標本54份，每份標本尿液6 mL，mALB濃度10～180 mg/L。

1.2 方法與儀器 將尿液標本分為清澈組25例，渾濁組29例，每例標本平均分為3份，每份2 mL，分別標記為未離心組、離心1 min組、離心5 min組，離心速度3000 r/min；用透射免疫比濁法分組檢測mALB，先檢測清澈組后檢測渾濁組，分別按離心5 min組、1 min組和未離心組順序測定。奧林巴斯AU400全自動生化分析儀，試劑上海科華生物科技公司。批量選擇mALB檢測項，儀器自動檢測并顯示結(jié)果。

2 結(jié) 果

清澈組中3組間mALB水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；渾濁組中，未離心組與離心1min組及離心5min組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而離心1min和5min組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 清澈組和渾濁組mALB測定結(jié)果

3 討 論

正常狀態(tài)清蛋白很難通過腎小球濾過膜，只有極少量的清蛋白可通過尿液排出到體外，但隨著腎小球濾過膜功能與結(jié)構(gòu)的異常改變，導(dǎo)致清蛋白的排出增加，靈敏地反映出腎臟開始出現(xiàn)異常，滲漏蛋白質(zhì)。尿清蛋白是腎臟疾病的一個重要指標，在某些腎病疾病的早期，用尿常規(guī)測定蛋白常為陰性，但此時尿中蛋白含量實際已有增加。一旦發(fā)現(xiàn)糖尿病、高血壓、心血管等疾病對腎臟造成損害，可以對尿中的mALB進行相應(yīng)檢測，達到早期診斷、監(jiān)控，有效地預(yù)防并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展[5]。糖尿病的病程和年齡與mALB的發(fā)生有密切關(guān)系[6]。一般發(fā)現(xiàn)mALB時，糖尿病的病程至少5年以上，糖尿病臨床腎病多發(fā)生在糖尿病發(fā)病后10～15年，隨著病程的發(fā)展，若血糖得不到有效控制，部分患者將最終發(fā)展成尿毒癥期，有效地控制糖尿病患者的血糖，推遲發(fā)病時間，能降低糖尿病代謝對自身腎臟等器官的損害和并發(fā)癥的出現(xiàn)。糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展與脂代謝發(fā)生紊亂有密切關(guān)系。血脂的異常與mALB有一定的關(guān)系。糖尿病患者由于血糖升高明顯，胰島素相對缺乏，胰島抵抗，使游離脂肪酸升高，卵磷脂膽固醇轉(zhuǎn)肽酶等活性降低，肝脂酶活性升高等，從而出現(xiàn)三酰甘油、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇升高等脂代謝的紊亂。糖尿病腎臟嚴重程度與糖化血紅蛋白的增高有一定的關(guān)聯(lián)，長期糖化血紅蛋白增高，會增加mALB的排出。

目前，國際上十分重視mALB的測定，認為尿mALB的測定不僅是對糖尿病腎病的早期診斷和改善預(yù)后具有重要意義，評估并發(fā)癥的危險，而且對高血壓、腎病及心血管疾病等都有極其重要的診斷價值[7-8]。免疫透射比濁法的原理是可溶性抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)后形成的免疫復(fù)合物，使介質(zhì)濁度發(fā)生了改變，光線通過抗原抗體反應(yīng)后的溶液時，被其中免疫復(fù)合物微粒吸收，在保持抗體過量的情況下，吸光度(A值)與免疫復(fù)合物呈正相關(guān)。與已知濃度的抗原標準品相比較，可確定標本中抗原的含量。免疫透射比濁法測定mALB具有靈敏度高、特異性強、測定范圍寬、試劑穩(wěn)定性好及操作簡便快速易于自動化等優(yōu)點[9]，影響透射免疫比濁法檢測靈敏度和特異度的主要因素有以下兩個方面：(1)反應(yīng)體系中抗原抗體復(fù)合物濃度和特性；抗體特異性高、親和力強，反應(yīng)的特異性強。(2)反應(yīng)體系中的基質(zhì)會影響光散射。反應(yīng)體系的基質(zhì)影響主要來源于標本，如血清標本高脂血會對結(jié)果產(chǎn)生影響。本方法的mALB濃度范圍在10～180mg/L，如果濃度超過500mg/L，會受到前帶現(xiàn)象的影響，結(jié)果可能呈假性降低，分析前用0.9%NaCl稀釋使它的濃度處于10～180mg/L。留尿前，患者應(yīng)避免鍛煉或運動，若不能及時測定，向尿液中加入防腐劑，貯存于2～8 ℃,另外分析前的質(zhì)量控制對標本準確檢測也有重要的意義[10]。郭蔚等[11]比較了尿液留取的時間對檢測mALB的影響；劉新華等[12]探討了低溫保存對mALB檢測結(jié)果的影響。而尿液中微顆粒等對測定的影響尚未有研究探討。本研究是通過對不同渾濁程度的尿液標本進行測定前處理，以此來探討尿液微顆粒等對測定的影響情況。從數(shù)據(jù)可以看出，尿液標本清澈的標本無需離心(均P>0.05)，可以直接檢測；而渾濁尿液標本，微顆粒對測定結(jié)果有顯著影響，需要先離心后檢測，離心速度3 000r/min，時間可以由5min縮短到1min。從而得出結(jié)論，使用透射免疫比濁法檢測mALB時，清澈尿液標本的標本無需離心，可以直接檢測；使用透射免疫比濁法檢測mALB時存在微顆粒干擾，使mALB測量值偏高，因此，對臨床渾濁的尿液標本，應(yīng)先離心后測量。 離心速度在3 000r/min時，離心5min和離心1min對檢測mALB結(jié)果無影響，可以將離心時間縮短至1min，提高檢測效率。

本實驗通過優(yōu)化尿液標本前處理操作步驟，消除尿液標本中微顆粒等物質(zhì)對mALB檢測的影響，減少標本測量誤差對疾病診療的影響。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.24.036

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1673-4130(2016)24-3474-03

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