乳腺癌組織CD10、MMP-3蛋白表達及其臨床意義

于靜，張曉瑩，房愛菊，戴宗燕，石冉冉，程鳳鳳

(1齊魯醫(yī)學檢驗所，濟南250031；2山東省交通醫(yī)院)

乳腺癌組織CD10、MMP-3蛋白表達及其臨床意義

于靜1，張曉瑩2，房愛菊2，戴宗燕1，石冉冉1，程鳳鳳2

(1齊魯醫(yī)學檢驗所，濟南250031；2山東省交通醫(yī)院)

目的 觀察乳腺癌組織CD10、基質金屬蛋白酶3(MMP-3)表達，探討其臨床意義。方法 采用免疫組化SP法檢測乳腺癌組織(乳腺導管原位癌23例、微小浸潤乳腺癌16例、乳腺浸潤性導管癌81例)和對照組乳腺組織(健康人16例、乳腺良性疾病24例)CD10和MMP-3表達，分析乳腺癌組織CD10、MMP-3表達及二者共表達與患者臨床病理參數的關系，以及二者的相關性。結果 導管原位癌、微小浸潤乳腺癌、乳腺浸潤性導管癌組織中CD10陽性表達率分別為39.1%、43.8%、92.6%，MMP-3陽性表達率分別為34.8%、37.5%、86.4%，均高于對照乳腺組織的12.5%、10.0%(P均<0.05)；乳腺浸潤性導管癌組織中二者陽性表達率均高于乳腺導管原位癌及微小浸潤乳腺癌(P均<0.05 )。乳腺癌組織CD10、MMP-3表達和二者共表達均與患者年齡、淋巴結轉移、組織學類型相關(P均<0.05)。乳腺癌組織中CD10和MMP-3表達呈正相關(r=0.436，P<0.05)。結論 乳腺癌組織CD10、MMP-3表達增加，二者的表達變化參與乳腺癌的浸潤轉移。

乳腺癌；CD10；基質金屬蛋白酶3

乳腺癌是危害女性健康的常見惡性腫瘤之一，其浸潤與轉移是影響患者預后的主要原因。CD10是一種具有中性金屬內肽酶活性的細胞表面酶，具有降解基底膜及基質的作用，表達于間質細胞時參與多種腫瘤細胞的侵襲轉移。基質金屬蛋白酶3(MMP-3)又稱基質分解素1，是基質金屬蛋白酶(MMPs)家族中功能最活躍的成員之一，不僅與腫瘤生長有關，還可破壞周圍正常組織的基質結構而便于腫瘤細胞增殖，導致周圍纖維結締組織結構松弛而利于腫瘤細胞侵襲轉移。本研究檢測乳腺癌組織CD10、MMP-3表達，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2012年1月～2015年6月濟南齊魯醫(yī)學檢驗所、山東省交通醫(yī)院手術切除的女性乳腺癌組織標本120例(觀察組)，患者年齡28～88歲，中位年齡 52 歲；其中乳腺導管原位癌23例、微小浸潤乳腺癌16例、乳腺浸潤性導管癌81例，低中分化72例、高分化48例；雌激素受體(ER)陽性88例、陰性32例，孕激素受體(PR)陽性89例、陰性31例，原癌基因人類表皮生長因子受體2(Her-2)++/+++52例、-/+68例；入組前均未接受任何治療，均無腫瘤家族史。另選對照乳腺組織40例(對照組)，患者年齡27～88歲、中位年齡52歲，包括健康人16例、乳腺纖維腺瘤12例、乳腺增生癥12例。兩組年齡具有可比性。

1.2 乳腺組織CD10、MMP-3表達 乳腺組織均用10%中性甲醛固定，石蠟包埋，3 μm厚連續(xù)切片。采用免疫組化SP法檢測CD10、MMP-3表達，抗原修復用pH 8.0的乙二胺四乙酸，均設立陽性對照及陰性對照，具體步驟參照試劑盒(福建邁新生物技術開發(fā)有限公司)說明書。陽性對照為良性乳腺組織內呈花環(huán)狀連續(xù)環(huán)繞于小導管周圍CD10陽性的肌上皮細胞，陰性對照為以PBS代替一抗。

CD10表達于癌周間質細胞的細胞質、細胞膜及基質，MMP-3表達于腫瘤細胞質；兩者均以細胞質和(或)基質內出現清晰均勻的棕黃色或褐色顆粒同時背景無非特異性著色為陽性。免疫組化結果以染色強度評分與陽性細胞百分比評分之和綜合判斷[1]。染色強度：不顯色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞百分比：無陽性細胞為0分，陽性細胞≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。兩項得分相加：0分為陰性(-)，1～2分為低表達(+)，3～4分為中表達(++)，5～6分為高表達(+++)。中、高表達判定為過度表達。CD10、MMP-3表達均為+～+++，判定為二者共同表達。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。各組乳腺組織中CD10、MMP-3表達比較采用非參數秩和檢驗，其中兩個獨立樣本比較應用Mann-Whitney檢驗，多個獨立樣本比較采用Kruskal-Wallis檢驗。乳腺癌組織CD10、MMP-3表達與患者臨床病理參數的關系采用χ2檢驗。相關性分析采用Spearman相關分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 CD10、MMP-3表達 40例正常及良性乳腺組織中5例間質細胞及基質中CD10弱陽性表達，4例旺熾性增生的導管上皮細胞質中MMP-3弱陽性表達。120例乳腺癌組織中，91例間質細胞陽性表達CD10；84例腫瘤細胞表達MMP-3；76例二者共表達。觀察組乳腺導管原位癌、微小浸潤乳腺癌、乳腺浸潤性導管癌組織及對照組CD10陽性表達率分別為39.1%、43.8%、92.6%、12.5%，過度表達率分別為13.0%、37.5%、67.9%、0；MMP-3陽性表達率分別為34.8%、37.5%、86.4%、10.0%，過度表達率分別為0、37.5%、69.1%、0；觀察組各組織CD10、MMP-3陽性表達率及過度表達率均高于對照組(P均<0.05)；浸潤性導管癌組織中二者陽性表達率及過度表達率均高于乳腺導管原位癌和微小浸潤乳腺癌組織(P均<0.05)。見表1。

表1 各乳腺組織CD10、MMP-3表達(例)

2.2 乳腺癌組織CD10、MMP-3表達及二者共表達與患者臨床病理參數的關系 乳腺癌組織CD10、MMP-3表達及二者共表達均與患者年齡、淋巴結轉移、組織學類型有關(P均<0.05)，與腫瘤直徑、組織學分級、TNM分期、ER、PR、Her-2表達情況等均無關(P均>0.05)。見表2。

2.3 乳腺癌組織CD10和MMP-3表達的相關性 乳腺癌組織中CD10和MMP-3表達呈正相關(r=0.436，P<0.05)。見表3。

3 討論

在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的過程中，腫瘤間質形成了有利于其生長的微環(huán)境。表達CD10的間質細胞屬于肌纖維母細胞，是腫瘤間質的主要成分，其表達的CD10可通過降解基底膜及改變基質癌周環(huán)境進而促進腫瘤的轉移擴散，同時在復發(fā)過程中發(fā)揮重要作用[2,3]。Gnemmi等[4]研究發(fā)現，CD10表達與腎透明細胞癌轉移致胰腺癌相關；周春輝等[5]研究顯示，CD10陽性表達在胰腺癌的發(fā)展、轉移及預后中發(fā)揮重要作用；間質CD10表達亦與結腸癌、食管鱗狀細胞癌發(fā)生有關[6,7]；Iwaya等[8]觀察到浸潤性導管癌中間質細胞表達CD10，在導管原位癌中未見CD10表達；Makretsov等[9]研究發(fā)現，438例浸潤性導管癌和15例導管原位癌患者中間質細胞均表達CD10；這些實驗說明CD10參與了腫瘤的浸潤轉移，并與患者預后密切相關。

表2 乳腺癌組織CD10、MMP-3表達與患者臨床病理參數的關系(例)

表3 乳腺癌組織CD10、MMP-3表達的相關性(例)

MMPs是參與修飾和降解細胞外基質的蛋白酶家族中的一類，是介導乳腺間充質轉化的關鍵因素，能夠通過促進上皮細胞與周圍組織分離、調節(jié)細胞信號通路等途徑提高乳腺癌侵襲轉移能力。MMP-3是MMPs中功能最活躍的成員之一，可破壞內皮衍生的基底膜蛋白多糖，降解細胞外基質。MMP-3在胃腸道腫瘤、肝臟腫瘤等腫瘤細胞中均有表達[10,11]。Lochter等[12]研究發(fā)現，表達MMP-3的乳腺上皮細胞會發(fā)生細胞表型的改變，導致乳腺癌癌前病變及惡性腫瘤形成，且對細胞外基質的降解作用會促進癌細胞浸潤轉移。

腫瘤細胞的浸潤是影響乳腺癌患者預后的主要原因之一[13]，乳腺間質的侵犯可使其直接擴展。Lagios等[14]研究發(fā)現，21%的高級別乳腺導管內癌有隱性浸潤灶，即使切片中未發(fā)現可疑浸潤灶，乳腺導管內癌有微小浸潤灶的可能性依然存在，這可能是某些未見浸潤的乳腺導管內癌患者腋下出現淋巴結轉移的原因。Rosen等[15]曾對18例肉眼可見的乳腺腫瘤范圍以外的微小浸潤進行觀察，發(fā)現11%有乳腺浸潤性癌存在，另有22%有乳腺原位癌存在。Page等[16]曾對25例乳腺導管原位癌患者隨訪3年以上，7例發(fā)展為同側浸潤性乳腺癌。超微結構觀察也證實，當導管內癌尤其是高級別導管內癌本身體積達到一定程度時，基底膜出現缺損，周圍間質細胞異染并伴明顯纖維化[17，18]。上述研究結果提示，乳腺導管原位癌在發(fā)展為微小浸潤、浸潤性乳腺癌的過程中[19]，間質細胞發(fā)揮了重要作用。

目前，國內關于間質CD10和MMP-3在乳腺癌組織中的表達及意義尚未見報道。本組實驗結果顯示，CD10和MMP-3在乳腺導管原位癌、微小浸潤乳腺癌、乳腺浸潤性導管癌中表達陽性率明顯高于正常及良性乳腺組織，且二者共表達均與乳腺癌組織學類型密切相關，即隨乳腺癌進展，CD10和MMP-3表達陽性率及過度表達率增高，此觀點與國外文獻報道[9]結果一致；另外，在乳腺癌組織中二者表達呈正相關，提示間質CD10和MMP-3可能共同參與了乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展；二者共表達程度隨乳腺癌組織學類型進展而升高，推測間質CD10和MMP-3共表達促進腫瘤細胞的浸潤與轉移，并在乳腺導管原位癌向乳腺浸潤性導管癌的轉化過程中可能起到關鍵作用。

本研究我們發(fā)現，乳腺癌組織中CD10和MMP-3表達與患者年齡密切相關，且不同年齡組間表達程度差異明顯，<35歲的青年乳腺癌患者腫瘤間質細胞 CD10和MMP-3均呈中高表達，無低表達，表達陽性率均明顯高于其他年齡組。既往多數文獻報道，青年乳腺癌患者淋巴結轉移率高，預后差[20～23]。本研究13例青年乳腺癌患者中8例出現淋巴結轉移，提示過度表達的間質CD10和MMP-3可能與青年乳腺癌患者易發(fā)生淋巴結轉移有關。但本研究此類病例數少，某些觀點有待擴大樣本后進一步研究證實。

綜上所述，乳腺癌組織CD10、MMP-3表達增加，二者的表達變化參與乳腺癌的浸潤轉移。

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Expression and clinical significance of CD10 and MMP-3 in breast carcinoma tissues

YUJing1,ZHANGXiaoying,FANGAiju,DAIZongyan,SHIRanran,CHENGFengfeng

(1QiluClinicalLaboratory,Jinan250000,China)

Objective To detect the expression and clinical significance of CD10 and matrix metalloproteinase 3 (MMP-3) in breast cancer tissues. Methods The expression of CD10 and MMP-3 was detected in breast cancer tissues(23 cases of ductal carcinoma in situ, 16 cases of microinvasive breast carcinoma, 81 cases of invasive ductal carcinoma and), the control breast tissues (16 cases of normal tissues from healthy people and 24 cases of benign breast tissues) by immunohistochemistry. The correlations between CD10 and MMP-3 and between their co-expression and clinicopathological parameters were analyzed. Results The positive rates of CD10 expression in the ductal carcinoma in situ, microinvasive breast carcinoma and invasive ductal carcinoma were 39.1%, 43.8% and 92.6%, the positive rates of MMP-3 were 34.8%, 37.5%, and 86.4%, which were significantly higher than those of the control breast tissues (12.5% and 10.0%, allP<0.05). The positive rates of CD10 and MMP-3 expression in the invasive ductal carcinoma were higher than those of the ductal carcinoma in situ and microinvasive breast carcinoma (allP<0.05). The (both) positive rates of CD10 and MMP-3 expression were associated with age, histological type and lymph node involvement (allP<0.05). The expression of CD10 and MMP-3 was positively correlated with each other in the breast carcinoma tissues (r=0.436,P<0.05). Conclusion The CD10 and MMP-3 expression is increased in the breast cancer tissues, and the expression changes of CD10 and MMP-3 are involved in the development and metastasis of breast carcinoma.

breast carcinoma; CD10; matrix metalloproteinase 3

山東省交通運輸廳科技計劃項目(2013B24)。

于靜(1985-)，女，住院醫(yī)師，研究方向為腫瘤病理。E-mail: yujing555666@126.com

簡介：程鳳鳳(1978-)，女，主治醫(yī)師，研究方向為腫瘤病理。E-mail: 13210557720@126.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.44.004

R737.9

B

1002-266X(2016)44-0012-04

2016-04-12)