癌組織TTF-1、CK7及p63蛋白檢測對不同病理類型NSCLC的鑒別診斷價值

王建國，史春云，王建飛，曹麗，鐘理

(1河北大學附屬醫院，河北保定071000；2保定市兒童醫院；3河北大學生命科學院)

?

癌組織TTF-1、CK7及p63蛋白檢測對不同病理類型NSCLC的鑒別診斷價值

王建國1，史春云2，王建飛3，曹麗3，鐘理3

(1河北大學附屬醫院，河北保定071000；2保定市兒童醫院；3河北大學生命科學院)

目的 探討癌組織甲狀腺轉錄因子1(TTF-1)、細胞角蛋白7(CK7)及p63蛋白檢測對不同病理類型非小細胞肺癌(NSCLC)的鑒別診斷價值。方法 收集NSCLC組織標本106例份,106例患者中鱗癌39例、腺癌56例、腺鱗細胞癌11例，采用免疫組化SP法檢測診斷TTF-1、CK7及p63蛋白在NSCLC組織中的表達，并分析其與臨床病理特征的關系。計算三者單獨或聯合檢測診斷NSCLC的敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值。結果 TTF-1及CK7在肺癌細胞中定位于細胞核，呈棕黃色；p63定位于胞質，呈棕黃色。TTF-1、CK7、p63蛋白表達均與患者病理類型、性別有關(χ2分別為53.972、57.691、52.051,7.832、6.171、8.715；P<0.01或<0.05)。TTF-1(+)、CK7(+)對肺腺癌診斷的敏感性為96.1%，特異性為79.5%，陽性預測值為87.1%，陰性預測值為93.9%，均較單獨檢測提高。p63(+)、 TTF-1(-)或p63(+)、CK7(-)對肺鱗癌診斷的敏感性和特異性均較單獨檢測高。結論 NSCLC組織中TTF-1、CK7和p63蛋白的表達均與肺癌病理類型密切相關，TTF-1和CK7主要表達于肺腺癌中，而p63則主要表達于肺鱗癌中，聯合檢測TTF-1、CK7及p63蛋白有助于提高肺腺癌和鱗癌診斷的準確性。

非小細胞肺癌；甲狀腺轉錄因子1；細胞角蛋白7；p63蛋白

肺癌早期缺乏有效的診療手段，超過70%的患者確診時已經處于晚期[1，2]；另外，晚期肺癌特別是非小細胞肺癌(NSCLC)對化療的敏感性差，故其病死率較高。目前診斷肺癌有很多手段，包括痰細胞學檢查、支氣管鏡檢查、經胸腔的細針穿刺活檢、縱膈鏡檢查、開胸活檢、其他細胞或病理檢查(胸腔積液、淋巴結等)、胸腔鏡檢查、腫瘤標志物等[3]。肺癌的腫瘤標志物很多，如癌胚抗原(CEA)、神經烯醇酶(NSE)、鐵蛋白等，但缺乏特異性及敏感性。甲狀腺轉錄因子1(TTF-1)、細胞角蛋白7(CK7)和抑癌基因p63蛋白作為新的免疫組化生物學標志物，對肺癌均具有較高的敏感性及特異性。本文通過檢測TTF-1、CK7及p63蛋白在不同NSCLC中的表達情況，探討了它們與NSCLC病理特征的關系及其對不同病理類型肺癌患者的鑒別診斷價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2013年7月～2015年6月河北大學附屬醫院手術切除或活檢的肺癌組織標本106例份，均經病理檢查確診為NSCLC。標本均為肺部原發病例且在獲得標本前均未經過放化療。106例患者中男77例、女29例，年齡38～87歲、中位年齡60歲。根據2004年WHO制定的腫瘤分型標準及分期，病理分型中鱗癌39例，腺癌56例，腺鱗癌11例。其中高分化6例，中分化44例，低分化66例；Ⅰ期29例，Ⅱ期29例，Ⅲ期23例，Ⅳ期25例。

1.2 組織TTF-1、CK7、p63蛋白表達的檢測 采用免疫組化SP法。肺活檢或手術切除組織標本，經10%中性甲醛固定；常規石蠟包埋，連續切5～6張4 μm切片，使用多聚賴氨酸作為防脫片劑，并將切片置于烤箱中2 h，使切片緊密黏附，取1張HE染色并核實組織病理學診斷，其他切片用于免疫組化染色。嚴格按照美國Leica公司免疫組化試劑盒說明書進行，抗體稀釋倍數1∶400，組織切片常規脫蠟、水化后，用PBS緩沖液連續沖洗2次，每次3 min；切片經乙醇脫水干燥后用中性樹膠封片，置于40倍光鏡下觀察結果；用PBS緩沖液取代一抗作陰性對照。

陽性判斷標準：TTF-1蛋白定位于細胞核，陽性染色為棕黃色顆粒；p63定位于細胞核，陽性染色為棕黃色或棕褐色顆粒；CK7定位于細胞質，陽性染色為黃色或棕黃色顆粒。由經驗豐富的病理科醫生對染色結果進行判定。無陽性細胞或陽性細胞所占百分數<1%為陰性,≥1%為陽性。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。TTF-1蛋白表達率與臨床病理資料的比較采用χ2檢驗或Fisher′s確切概率法。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 癌組織TTF-1、CK7、p63蛋白表達與NSCLC患者臨床病理參數的關系 TTF-1蛋白表達于細胞核，CK7蛋白表達于細胞質，陽性染色均為棕黃色顆粒；p63蛋白表達于細胞核，為棕黃色或棕褐色。TTF-1、CK7、p63蛋白表達均與病理類型、性別有關(χ2分別為53.972、57.691、52.051, 7.832、6.171、8.715；P<0.01或<0.05)。見表1。

表1 癌組織TTF-1、CK7、p63蛋白表達與NSCLC患者臨床病理參數的關系[例(%) ]

2.2 TTF-1、CK7、p63蛋白在NSCLC鑒別診斷中的價值 TTF-1、CK7和p63蛋白單獨或聯合檢測在肺腺癌和鱗癌鑒別診斷中的價值見表2。

表2 TTF-1和CK7、p63蛋白在NSCLC診斷中的價值(%)

3 討論

TTF-1的表達多與腫瘤組織來源有關。有文獻[4]研究顯示肺癌中TTF-1在小細胞肺癌中陽性表達率最高，為82.5%～95%，其余依次為腺癌、大細胞癌、鱗癌。本文中TTF-1在肺鱗癌中的表達率僅為20.5%，在肺腺癌中的表達率高達91.1%，與文獻報道一致。這些差異性可以用來鑒別肺鱗癌和肺腺癌。對肺腺癌診斷的敏感性為91.1%，特異性 為79.5%，陽性和陰性預測值分別為86.4%和86.1%，與文獻[5]報道一致。另有文獻[6]報道，TTF-1蛋白在女性、不吸煙及無癥狀者肺癌患者中升高，主要表達于肺腺癌(191/227)，其診斷敏感性和特異性分別達84.1%和89.8%，陽性表達率隨著腺癌分化程度的增加而增加。本研究發現，TTF-1在女性患者陽性表達率為86.2%，高于男性57.1%。也有報道[7]認為TTF-1的表達與患者的性別無關。TTF-1的表達在年齡、TNM分期及腫瘤分化程度方面均無統計學差異，與報道[8，9]一致。有報道[10]認為TTF-1表達與腫瘤分化程度有關，高分化腺癌組表達率高于低分化腺癌組。這些差別需要通過進一步擴大樣本量，嚴格篩選臨床病例資料進行驗證。劉翼軍等[10]研究結果表明TTF-1在小細胞肺癌中表達率為90.5%，鱗癌中表達率為18.2%。認為TTF-1在小細胞肺癌中的表達高于低分化鱗癌；同時聯合p63蛋白的檢測(鱗癌表達高于小細胞肺癌)在區分小細胞肺癌和低分化鱗癌中具有重要的鑒別診斷意義。本研究結果只用于鑒別NSCLC中肺腺癌及肺鱗癌，而TTF-1在小細胞肺癌中表達率最高，亦可用于鑒別小細胞肺癌及低分化鱗癌。

CK多表達于上皮細胞質中，構成角質細胞的骨架蛋白，主要維持上皮組織的連續性及完整性。CK7多表達于肺臟、乳腺、卵巢、子宮內膜、胰腺等上皮細胞中，而其在胃腸道多不表達。有文獻報道，CK7在涎腺惡性多形性腺瘤(MPA)及傳統肺腺癌中表達率均較高，CK7在MPA中陽性表達率為100%(15/15)，在傳統肺腺癌中表達率為96%(48/50)，而TTF-1在MPA中陰性表達率較高，因此，當CK呈陽性表達的同時，TTF-1呈陰性表達，可診斷為MPA。亦有研究表明，在不吸煙的女性肺癌組織中CK7陽性表達率明顯增高。

p63并不是單純的抑癌基因，不表現為基因突變，在腫瘤中常表現為表達異常。有文獻報道,p63多在肺鱗癌中呈陽性表達，陽性表達率為97.0%，并具有較高的敏感性(97.0%)和特異性(74．8%)，診斷的準確性為85.5%，本研究與其一致。

TTF-1、CK7和p63作為診斷、鑒別診斷腫瘤的標志物，單獨檢測均不具備良好的敏感性及特異性。本研究結果顯示，TTF-1(+)、CK7(+)對肺腺癌診斷的敏感性為96.1%，特異性為79.5%，陽性預測值為87.1%，陰性預測值為93.9%，均較單獨檢測高。p63(+)、TTF-1(-)或p63(+)、CK7(-)對肺鱗癌診斷的敏感性和特異性均較單獨檢測高。兩種聯合表達可提高診斷的準確性，可用于診斷及鑒別診斷肺腺癌及肺鱗癌。

綜上所述，本研究發現，在NSCLC中，TTF-1、CK7、p63蛋白的表達與腫瘤病理類型密切相關，TTF-1、CK7蛋白在肺腺癌中的表達高于肺鱗癌，p63蛋白在鱗癌中的表達高于肺腺癌，均對肺腺癌和鱗癌的鑒別診斷有一定價值。

[1] 段楚驍,付圣靈,付向寧,等.CK5/6、p63、TTF-1和CK8/18在NSCLC組織中的表達及意義[J].華中科技大學學報(醫學版),2015,44(2):147-151.

[2] 丁妍,岳萌,張玲玲,等.小細胞肺癌的免疫表型特征及其預后分析[J].中國全科醫學,2015,18(18):2131-2135.

[3] 張著學,彭學勤,薛英波,等.肺腺癌中表皮生長因子受體基因突變與臨床病理因素的關系[J].實用醫學雜志,2015,31(13):2155-2157.

[4] 林冬梅,鄒霜梅,呂寧,等.甲狀腺轉錄因子1 在肺癌中的表達及應用[J].中華腫瘤雜志,2004,26(10):615-617.

[5] 張鵬,韓一平,黃玲,等.TTF-1 和p63 在NSCLC組織中的表達及臨床意義[J].中國肺癌雜志,2009,12(9):995-999.

[6] 蔣榕,莫曉能.TTF-1在小細胞肺癌與非小細胞肺癌中的表達及鑒別診斷意義的Meta 分析[J].中國實用醫藥,2013,8(11):1-2.

[7] Tan D, Li Q, Deeb G, et al.Thyroid transcription factor-1 expression prevalence and its clinical implications in non-small cell lungcancer: a high-throughput tissue microarray and immunohistochemistry study[J]. Hum Pathol, 2003,34(6):597-604.

[7] 李君,王照明,姚洪田.TTF-1 在肺腺癌中的表達[J].實用腫瘤雜志,2003,18(5):383-385.

[8] 蔣榕,莫曉能.TTF-1在非小細胞肺癌中的表達及意義[J].中國實用醫藥,2013,8(14):4-6.

[9] 陸鳴,董亞文,王翠芝,等.TTF-1在肺腺癌中的表達特點及意義[J].診斷病理學雜志,2007,14(5):353-356.

[10] 劉翼軍,王春福.p63和TTF-1在肺小細胞肺癌與低分化鱗癌中的鑒別診斷價值[J].江西醫藥,2005,40(3):170-171.

[11] 魏清柱,劉江歡,張志雄,等.TTF-1、CK7、CK5/6、p63和CK20在黏液性肺癌中的表達及意義[J].疑難病雜志,2010,9(11):822-824.

史春云(E-mail：Scyun2011@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.45.019

R734.2

B

1002-266X(2016)45-0060-03

2016-07-19)