代謝綜合征患者脂肪組織RBP4表達(dá)及其與胰島素抵抗的關(guān)系

王鈺

(西安市第四醫(yī)院，西安710004)

代謝綜合征患者脂肪組織RBP4表達(dá)及其與胰島素抵抗的關(guān)系

王鈺

(西安市第四醫(yī)院，西安710004)

目的 檢測(cè)代謝綜合征(MS)患者皮下及大網(wǎng)膜脂肪組織視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP4)的表達(dá)，分析其與胰島素抵抗(IR)的相關(guān)性。方法 選擇行腹部手術(shù)的患者55例，根據(jù)是否合并MS分為MS組38例和對(duì)照組17例。術(shù)前采集兩組空腹靜脈血，放免法檢測(cè)血糖和胰島素，計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)；術(shù)中取兩組腹部皮下和大網(wǎng)膜脂肪組織，采用RT-PCR法檢測(cè)RBP4 mRNA表達(dá)。結(jié)果 兩組大網(wǎng)膜脂肪組織中RBP4 mRNA表達(dá)均高于皮下脂肪組織(P<0.05)；MS組大網(wǎng)膜脂肪組織RBP4 mRNA表達(dá)較對(duì)照組升高(P<0.05)，且與HOMA-IR呈正相關(guān)。結(jié)論 MS患者大網(wǎng)膜脂肪組織RBP4 mRNA表達(dá)增加，且與IR有關(guān)。

代謝綜合征；胰島素抵抗；視黃醇結(jié)合蛋白4；葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4；脂肪因子

代謝綜合征(MS)的病理生理基礎(chǔ)是胰島素抵抗(IR)[1]。脂肪組織能夠分泌多種具有可調(diào)控機(jī)體功能的脂肪因子，參與IR的發(fā)生發(fā)展[2]。視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP4)是在構(gòu)建葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)基因缺陷導(dǎo)致IR大鼠模型時(shí)鑒定出的新的脂肪因子[3]。研究顯示，RBP4與IR相關(guān)疾病存在密切關(guān)聯(lián)[4，5]。2013年1月～2014年12月，我們通過(guò)觀察MS患者皮下脂肪組織和大網(wǎng)膜脂肪組織中RBP4 mRNA的表達(dá)，分析其與IR的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇因慢性膽囊炎、腸息肉、胃潰瘍、卵巢囊腫行腹部手術(shù)的患者55例。根據(jù)2005年IDF發(fā)布的MS診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]將患者分為MS組38例和對(duì)照組17例。MS組男22例、女16例，年齡(57.08±8.99)歲，BMI(26.38±2.62)kg/m2，腰臀比0.95±0.02，空腹血糖(7.80±2.08)mmol/L，TG(2.52±0.79)mmol/L，TC(5.35±0.55)mmol/L，HDL(1.12±0.44)mmol/L，LDL(3.02±0.79)mmol/L，SBP(149.18±12.73)mmHg，DBP(83.79±9.07)mmHg。對(duì)照組男8例、女9例，年齡(56.05±7.38)歲，BMI、腰臀比、空腹血糖、血脂、血壓均在正常范圍，無(wú)糖尿病史、糖尿病家族史、高血壓家族史。排除惡性腫瘤及急性炎癥、慢性肝腎功能損害、其他內(nèi)分泌疾病患者，近3個(gè)月體質(zhì)量無(wú)明顯變化(<10%)，未接受過(guò)節(jié)食及減肥藥物治療。研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)的測(cè)算 術(shù)前采集患者空腹靜脈血，采用放免法檢測(cè)血糖和胰島素水平，計(jì)算HOMA-IR。

1.2.2 RBP4 mRNA檢測(cè) 采用RT-PCR方法。術(shù)中取腹部皮下和大網(wǎng)膜脂肪各約0.5 g，置液氮中保存。TRIzol法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。根據(jù)GenBank報(bào)道的人基因序列，引物設(shè)計(jì)采用Primer 5.0軟件，RBP4引物上游：5 ′-CTTCACAGACACCGAGGAC-3 ′，下游：5 ′-AAAGGCAAGCAGATTCACT-3 ′，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為495 bp。使用2×Taq PCR MasterMix試劑盒進(jìn)行PCR反應(yīng)。反應(yīng)體系：2×PCR Master Mix 12.5 μL，cDNA 4.0 μL，RBP4上、下游引物各1 μL，GAPDH上、下游引物各1 μL；dd H2O 6.5 μL。擴(kuò)增條件：94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s，54 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，30個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5 min。1.5%瓊脂糖凝膠電泳分離PCR產(chǎn)物，凝膠成像分析軟件進(jìn)行分析，測(cè)量各條帶光密度值，進(jìn)行圖像灰度掃描。以RBP4與內(nèi)參GAPDH基因電泳條帶灰度值之比，作為RBP4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 兩組HOMA-IR比較MS組HOMA-IR為1.79±0.38,對(duì)照組為5.82±2.23，MS組高于對(duì)照組(P<0.01)。

2.2 兩組皮下與大網(wǎng)膜脂肪組織中RBP4mRNA表達(dá)比較 兩組BPR4mRNA表達(dá)在大網(wǎng)膜脂肪組織均高于皮下脂肪組織，MS組大網(wǎng)膜脂肪組織RBP4mRNA表達(dá)較對(duì)照組升高(P均<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 兩組皮下與大網(wǎng)膜脂肪組織中RBP4 mRNA表達(dá)比較

注：與皮下脂肪組織比較，*P<0.01；與對(duì)照組比較，#P<0.01。

2.3 RBP4 mRNA與HOMA-IR的相關(guān)性 相關(guān)性分析顯示，皮下與大網(wǎng)膜脂肪組織RBP4 mRNA表達(dá)與體質(zhì)量、BMI、腰圍、臀圍、腰臀比、SBP、TG、TCH、LDL、FBG、FINS、HOMA-IR呈正相關(guān)，與HDL呈負(fù)相關(guān)(P<0.05或<0.01)。以脂肪組織RBP4 mRNA表達(dá)為因變量，進(jìn)行多元逐步回歸分析，結(jié)果顯示，腰臀比和HOMA-IR是RBP4 mRNA表達(dá)的獨(dú)立影響因子。

3 討論

脂肪組織被認(rèn)為是IR的始發(fā)部位，脂肪分泌的脂肪因子如RBP4在IR方面的作用越來(lái)越受到重視。在肥胖、冠心病、2型糖尿病、IGT甚至血糖正常的非肥胖但有糖尿病家族史的人群中，血清RBP4均升高[7]。Farjo等[8]提出，RBP4表達(dá)升高可激活NADPH氧化酶和NF-κB，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng)，增加IR及動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。脂肪組織按照部位不同分為皮下脂肪及內(nèi)臟脂肪。不同部位的脂肪組織對(duì)機(jī)體的代謝作用各異。Hamdy等[9]認(rèn)為，內(nèi)臟脂肪與外周皮下脂肪存在許多生物學(xué)和基因遺傳學(xué)上的差異，內(nèi)臟脂肪在受體的分布、脂肪因子、酶的活性等方面與皮下脂肪有顯著差異，在代謝上遠(yuǎn)比皮下脂肪活躍[10]。皮下脂肪與內(nèi)臟脂肪在肥胖相關(guān)疾病如糖尿病、心血管代謝疾病的發(fā)病機(jī)制上也存在不同。內(nèi)臟脂肪增多引起中心性肥胖，被認(rèn)為與IR有更密切的關(guān)系[11]。

本研究MS組與對(duì)照組大網(wǎng)膜脂肪組織中的RBP4 mRNA表達(dá)均顯著高于皮下脂肪組織，提示不同部位的脂肪組織功能可能存在差異[12]。MS組大網(wǎng)膜脂肪組織中RBP4 mRNA表達(dá)較對(duì)照組明顯增加，提示RBP4可能與中心型肥胖有關(guān)。

RBP4與IR等相關(guān)的機(jī)制可能與GLUT4的作用有關(guān)。GLUT4是胰島素信號(hào)通路中關(guān)鍵的信號(hào)蛋白，GLUT4表達(dá)減少或活性下降可引起胰島素敏感組織嚴(yán)重的IR[13]。RBP4是在構(gòu)建GLUT4基因缺陷導(dǎo)致IR大鼠模型時(shí)鑒定出的脂肪因子，GLUT4基因缺陷大鼠的血清RBP4升高。血清RBP4升高與脂肪組織GLUT4表達(dá)減少共同參與了IR的發(fā)生。PI3K依賴性的信號(hào)通路是GLUT4轉(zhuǎn)位的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。在RBP4轉(zhuǎn)基因鼠中，肌肉組織在胰島素刺激下PI3K活性下降30%，而RBP4基因敲除純合子和雜合子小鼠肌肉組織PI3K活性增強(qiáng)了80%。因此推測(cè)，MS患者RBP4在大網(wǎng)膜組織的表達(dá)升高與GLUT4表達(dá)降低共同參與了IR的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

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