蒙藥黃連-4湯對心肌缺血再灌注損傷SD大鼠炎癥因子TNF-α、IL-6的影響

李 平，金哈布日，張青山*，布仁巴圖*

（1．內(nèi)蒙古民族大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合在讀研究生，內(nèi)蒙古 通遼 028000；2．內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000）

近年來，防止缺血性心臟病方面取得了較滿意的成果，隨之出現(xiàn)的心肌缺血再灌注損傷（Myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI）成為目前急需解決的醫(yī)學(xué)難題[1]。有研究證實(shí)急性心肌梗死患者接受了最好的再灌注治療，但還是有10%～30%的幾率出現(xiàn)MIRI，MIRI現(xiàn)在被認(rèn)為是導(dǎo)致心梗后心力衰竭的發(fā)生率高達(dá)了25%及年死亡率達(dá)到了10%的最主要原因[2]。因此MIRI在心血管疾病當(dāng)中危及人們生命的最主要病因之一。缺血再灌注損傷與炎癥因子的關(guān)系現(xiàn)已成大家的共識(shí)[3]。目前對再灌注損傷機(jī)制的研究很多，發(fā)現(xiàn)缺血后心臟功能的損傷程度炎與癥因子水平的高低有直接的關(guān)系[4]。在治療心血管疾病方面?zhèn)鹘y(tǒng)蒙藥具有獨(dú)特的優(yōu)勢。蒙藥黃連-4湯是蒙藥傳統(tǒng)方劑之一，由黃連、梔子、瞿麥、多葉棘豆組成，具有清熱解毒、防止燥濁熱、調(diào)理赫依齊素相搏之功效。其主要成分黃連具有清熱燥濕、瀉火解毒、改善心臟赫依、齊素循環(huán)、抗癌、降糖、調(diào)節(jié)免疫功能、改善心血管功能、降血壓、抗血小板聚集等藥效。本文初步探討蒙藥黃連-4湯對SD大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用機(jī)制，為蒙藥黃連-4湯應(yīng)用與臨床提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

（1）試驗(yàn)動(dòng)物

60只健康雄性SD大鼠，體重大約（280±20）g，購自遼寧長生生物技術(shù)有限公司（許可證號碼：SCXK（遼）2015-0001）。要飼養(yǎng)于恒濕和恒溫的動(dòng)物室中，在相同飼養(yǎng)環(huán)境中，自由取用飲用水和食物。

（2）主要試劑及藥品

蒙藥黃連-4湯（生產(chǎn)于內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院制劑室）；丹參片（南京厚生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)）；腫瘤壞死因子-alpha試劑盒（S0000-96T）；白細(xì)胞介素-6試劑盒（S0000-96T）；水合氯醛（天津市天力化學(xué)試劑有限公司）。

（3）主要儀器

酶標(biāo)儀（multiskanmd3，wellwash4mkz 芬蘭）；低速自動(dòng)平衡離心機(jī)（北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司）；恒溫培養(yǎng)箱（BDR-82，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；心電圖機(jī)、動(dòng)物呼吸機(jī)（HX-300S）、BL-420S生物技能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟軟件有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

（1）動(dòng)物分組

6 0只正常雄性S D大鼠喂養(yǎng)一周，體重約（280±20）g，隨機(jī)分成六個(gè)小組，每組10只大鼠。分為假手術(shù)組、模型組、蒙藥黃連-4湯高劑量組、蒙藥黃連-4湯中劑量組、蒙藥黃連-4湯低劑量組、丹參組。

（2）給藥方法

假手術(shù)組和模型組：灌胃等容量的生理鹽水，低劑量蒙藥黃連-4湯組：40 mg/kg·d，中劑量蒙藥黃連-4湯組：80 mg/kg·d，高劑量蒙藥黃連-4湯組：160 mg/kg·d，丹參組（陽性對照組）：40 mg/kg·d，溶于和假手術(shù)組、模型組等體積的生理鹽水，每天灌胃1次，連續(xù)15天。

（3）模型建立

按文獻(xiàn)[5]方法加以改進(jìn)后進(jìn)行造模。大鼠腹腔內(nèi)注射10%水合氯醛進(jìn)行麻醉，麻醉后在手術(shù)臺(tái)上仰臥位固定，剪斷頸部毛，切開并暴露氣管，T字型切開氣管置氣管套管接小動(dòng)物呼吸機(jī)（呼吸頻率70～80次/分，呼吸比3:2，潮氣量0.002-0.003L），大鼠的四肢皮下插入電極，連接實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，記錄Ⅱ?qū)?lián)的心電圖。在胸骨左緣第3或4肋間分離肌肉及組織，逐層打開胸腔，暴露心臟，在左心耳下約2 mm處用6～0無損傷真絲線進(jìn)針（深度約1.0～1.5 mm），結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，然后關(guān)胸腔，使心肌缺血30 min后松開結(jié)扎線再灌注1.5 h。對照組只穿線不予結(jié)扎處理。缺血時(shí)結(jié)扎下方的心肌組織蒼白，心電圖ST段抬高或T波異常，再灌注時(shí)缺血區(qū)心肌組織由蒼白轉(zhuǎn)紅潤，抬高的ST段下降至50%以上。

（4）生化指標(biāo)檢測

各組大鼠均再灌注90 min后，腹主動(dòng)脈取血（約3 mL），離心15 min（3000r·min-1，4℃）取上清放入-80℃冰箱凍存?zhèn)溆?，測定血清中炎癥因子TNF-α、IL-6的指標(biāo)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件對本次數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計(jì)數(shù)資料以例（n），百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用x2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以“±s”表示，采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 蒙藥黃連-4湯對大鼠MIRI血清TNF-α水平的影響

與假手術(shù)組比較，模型組血清TNF-α的表達(dá)顯著性升高（P＜0.05）。與模型組比較，蒙藥黃連-4湯各劑量組均使血清TNF-α水平降低，其中高劑量組產(chǎn)生顯著性作用（P＜0.05）。與模型組相比，丹參組血清TNF-α水平顯著性降低（P＜0.05）。與丹參組相比，黃連-4湯高劑量組血清TNF-α水平的表達(dá)顯著性降低（P＜0.05）。

2.2 蒙藥黃連-4湯對大鼠MIRI血清IL-6水平的影響

與假手術(shù)組相比，模型組血清IL-6水平的表達(dá)顯著性升高（P＜0.05）。與模型組相比，蒙藥黃連-4湯各劑量組均使血清IL-6水平降低，其中高劑量組產(chǎn)生顯著性作用（P＜0.05）。與模型組相比，丹參組血清IL-6水平顯著性降低（P＜0.05）。

3 討 論

心肌缺血再灌注損傷與炎癥密切相關(guān)。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，缺血再灌注不但會(huì)引起嚴(yán)重的組織損傷，還存在著深度的炎癥反應(yīng)[6]。研究顯示：再灌注過程中大量白細(xì)胞浸潤于心肌組織中，通過釋放多種炎癥細(xì)胞因子而加劇心肌損害[7]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：心肌缺血再灌注損傷時(shí)，血清TNF-α、IL-6水平升高，黃連-4湯治療后血清TNF-α、IL-6β水平顯著性降低（P＜0.05）。因此達(dá)到了藥物干預(yù)的保護(hù)作用。在治療心血管疾病方面有很多蒙藥可以用，但最常用的往往幾種，比如：新-II，廣棗-7味丸等藥物。目前對蒙藥黃連-4湯的研究頗少，值得我們進(jìn)一步研究。

TNF-α是一種單核因子（炎癥因子），主要有單核細(xì)胞和巨核細(xì)胞產(chǎn)生，心肌巨核細(xì)胞和心肌單核細(xì)胞本身都可以合成TNF-α，但是在心肌組織中的水平較低，發(fā)生損傷后細(xì)胞便會(huì)釋放大量的TNF-α，大量的TNF-α?xí)又匦募∪毖俟嘧p傷。有文獻(xiàn)報(bào)道，TNF-α參與急性心肌梗死發(fā)病，并與缺血-再灌注損傷的發(fā)病過程有關(guān)[8]。TNF-α能激活一系列級聯(lián)反應(yīng)，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)表面黏附因子，促使中性粒細(xì)胞聚集在缺血區(qū)，加重缺血缺氧程度，釋放多種促炎性因子，同時(shí)也促進(jìn)活性氧產(chǎn)生，加重再灌注期心肌組織的損傷[9]。IL-6也是一個(gè)重要的炎癥因子。IL-6能夠刺激參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞增值、分化、并提高其功能。TNF-α和IL-6可以導(dǎo)致心肌細(xì)胞壞死，因?yàn)樗鼈兪窃谌毖俟嘧p傷過程中由炎癥浸潤細(xì)胞產(chǎn)生的前炎癥細(xì)胞因子[10]。心肌細(xì)胞喪失的原因之一是心肌梗死后激活免疫系統(tǒng)而發(fā)生的自身免疫反應(yīng)[11]。研究表明，缺血及再灌注可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞產(chǎn)生IL-6[12]。炎性細(xì)胞因子在缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制中起著反面作用[13]。

在本實(shí)驗(yàn)中，形成心肌缺血再灌注損傷時(shí)模型組血清炎癥因子IL-6、TNF-α的含量比假手術(shù)組明顯升高。與模型組比較黃連-4湯各劑量組均使血清IL-6水平降低，其中高劑量組產(chǎn)生顯著性作用（P＜0.05），蒙藥黃連-4湯各劑量組之間沒有顯著性差異，但具有下降的趨勢。心肌缺血再灌注損傷血清IL-6的表達(dá)在高劑量組和丹參組之間沒有顯著性差異，但也具有下降的趨勢.在血清TNF-α的表達(dá)中，與丹參組相比，蒙藥黃連-4湯高劑量組血清TNF-α的表達(dá)顯著性降低（P＜0.05），蒙藥黃連-4湯高劑量組治療心肌缺血再灌注損傷可能比丹參組藥效好。蒙藥黃連-4湯治療心肌缺血再灌注損傷時(shí)可能是通過抑制炎癥因子的產(chǎn)生而發(fā)揮其保護(hù)心臟作用。

綜上所述，蒙藥黃連-4湯治療心肌缺血再灌注損傷時(shí)可能降低炎癥因子TNF-α、IL-6的含量，改善其炎癥狀態(tài)，達(dá)到保護(hù)心臟的目的。其具體機(jī)制、復(fù)方的有效成分及單體方面還需進(jìn)行深入的研究，為蒙藥治療心肌缺血再灌注損傷提供更多的科學(xué)依據(jù)。

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