乙肝病毒與肝癌相關(guān)性的研究進(jìn)展

遲艷新

乙肝病毒與肝癌相關(guān)性的研究進(jìn)展

遲艷新

肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是世界發(fā)生率最高的惡性腫瘤之一，目前每年新增30萬～100萬患者［1］。研究表明［2］，在乙型肝炎病毒（HBV）感染相關(guān)的HCC發(fā)生機(jī)制中，HBx基因產(chǎn)物HBx蛋白起重要作用。同時(shí)HBx蛋白在p53依賴性和p53非依賴性凋亡途徑中，均有不同程度的作用。HBxAg在HCC中的表達(dá)比HBeAg和HBcAg活躍，在血清HBsAg陰性HCC患者中也能檢測到HBxAg表達(dá)［3］，可見HBxAg在HCC癌內(nèi)的表達(dá)是HBV幾項(xiàng)標(biāo)志中最活躍的。HBxAg不是一個(gè)指示HBV DNA在肝內(nèi)復(fù)制活性的指標(biāo)，在HBxAg（+）和HBxAg（-）慢性乙肝患者中，其血清HBeAg檢出率無顯著差異。但HBxAg在DNA復(fù)制過程中是一個(gè)必須條件，其通過調(diào)控鈣信號(hào)通道發(fā)揮重要作用［4-5］。HBxAg表達(dá)缺陷型HBV復(fù)制效率明顯降低，表明HBxAg的轉(zhuǎn)錄激活功能可能是產(chǎn)生大量病毒顆粒所必須的。HBxAg不依賴于病毒的復(fù)制，在大多數(shù)HCC中，病毒復(fù)制已終止，但肝內(nèi)HBxAg呈陽性。本文探討HBx與p53的相互作用對含wtp53肝癌細(xì)胞株生長的影響及作用機(jī)制。

1 乙型肝炎病毒與HCC的關(guān)聯(lián)

乙型肝炎病毒共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（HBVcccDNA）是HBV復(fù)制的中間體，是HBV mRNA和前基因組RNA的合成模板，也是HBV持續(xù)感染的關(guān)鍵因素［6-7］，是病毒活躍復(fù)制狀態(tài)的重要指標(biāo)，是HBV生活周期的核心部分［8］。最近有報(bào)道HBV病毒負(fù)荷和活躍復(fù)制與HCC的發(fā)生相關(guān)聯(lián)［9-10］。HBV病毒活躍復(fù)制通過增加病毒DNA整合至癌基因、抑癌基因或細(xì)胞DNA調(diào)控元件附近直接啟動(dòng)惡性轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，還增加轉(zhuǎn)錄活化蛋白HBVx蛋白的產(chǎn)生，通過與p53抑制基因的結(jié)合阻斷其誘導(dǎo)的調(diào)亡，從而誘導(dǎo)癌變。HBV病毒活躍復(fù)制還通過引起肝臟壞死炎性反應(yīng)間接誘導(dǎo)癌變［11］。HBV感染后，病毒基因組常整合入宿主細(xì)胞基因組造成宿主細(xì)胞染色體不穩(wěn)定。X基因是最常被整合的基因，整合形式的X基因產(chǎn)生的HBx蛋白在體內(nèi)和體外均有反式激活作用［12］。

2 X蛋白的生物組成與功能

HBx蛋白是一種多功能蛋白質(zhì)促進(jìn)肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化，X蛋白在胞漿內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的核糖體上合成，可通過核孔進(jìn)入核內(nèi)而發(fā)揮反式激活作用，X蛋白由145～154個(gè)氨基酸組成，不同亞型的組成不盡相等，分子量約為24～28kD，X蛋白是功能蛋白，但其在病毒生命周期中的功能尚未充分了解［13］。X基因表達(dá)較弱，難于從HBV感染者的血液、肝臟或轉(zhuǎn)染細(xì)胞中分離純化得到X蛋白，根據(jù)X蛋白的氨基酸序列，化學(xué)合成多肽用以免疫動(dòng)物制備相應(yīng)抗－X蛋白的抗體，用于檢測感染組織及血中的X蛋白。X蛋白具有反式激活作用，可反式激活一些細(xì)胞基因和病毒基因等，反式激活指一個(gè)基因編碼的蛋白質(zhì)激活另一DNA上的調(diào)節(jié)序列［14］。X蛋白不直接結(jié)合于DNA序列，而多是通過作用于多種轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)、翻譯后修飾等途徑，激活同源或異源基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，進(jìn)而影響細(xì)胞的生長周期（G0/G1→S）及細(xì)胞轉(zhuǎn)化；X蛋白還能與抑癌基因P53、DNA修復(fù)基因等結(jié)合，影響HCC的發(fā)生過程［15］。

3 X蛋白與p53的相互作用

野生型（wt）p53是一種抑癌基因，為了進(jìn)一步明確P53蛋白在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)及診斷價(jià)值，王威等［16］通過病理分組，將患者分為炎癥組、非典型增生組、癌變組進(jìn)行檢測并比較，結(jié)果癌變組P53蛋白的陽性表達(dá)率為58.3%、非典型增生組次之（69.7%），但兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而炎癥組無P53蛋白表達(dá)。表明肝組織惡變在非典型增生期已經(jīng)發(fā)生，在良性病變中無P53基因的突變。以上不同研究結(jié)果表明P53蛋白表達(dá)率，雖然有所差別，但均保持在一個(gè)較高的表達(dá)水平，均＞30%，且在非腫瘤肝組織中均無P53蛋白的表達(dá)，這充分肯定HCC組織中存在P53蛋白的過表達(dá)，間接反映P53基因突變在HCC中廣泛存在，P53基因突變是HCC發(fā)病的一個(gè)重要步驟。P53蛋白可作為反應(yīng)HCC生物學(xué)行為的一個(gè)重要指標(biāo)。其參與基因的轉(zhuǎn)錄、DNA的合成和修復(fù)及細(xì)胞凋亡等過程，與細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切。HBx基因編碼產(chǎn)物HBxAg能與p53蛋白結(jié)合，使p53蛋白在細(xì)胞內(nèi)積聚，半衰期延長，影響其正常的負(fù)調(diào)節(jié)功能［17-18］。HBx蛋白與p53的相互作用對肝癌細(xì)胞凋亡及生長的影響及作用機(jī)制仍不完全清楚，目前研究表明HBx在一定條件下可促進(jìn)細(xì)胞凋亡，而在某些情況下，又可抑制細(xì)胞凋亡［19］。同時(shí)，HBx在p53依賴性和p53非依賴性凋亡途徑中，均有不同程度的作用［20-21］。

4 X蛋白在其他環(huán)節(jié)中的作用

p53蛋白是目前認(rèn)為與腫瘤發(fā)生相關(guān)程度最高的因子之一［22］。病毒編碼的幾種蛋白能與p53結(jié)合，從而促進(jìn)或抑制凋亡和促進(jìn)病毒的復(fù)制。HBx蛋白可能在以下環(huán)節(jié)起調(diào)控作用：（1）HBx蛋白可部分替代腺病毒E1A蛋白能夠刺激凋亡的作用，通過ARF激活p53，這一作用有待證實(shí)。（2）HBx蛋白可誘導(dǎo)c-myc的表達(dá)，進(jìn)一步激活A(yù)RF表達(dá)，促進(jìn)凋亡。（3）p53基因的產(chǎn)物p53蛋白為核內(nèi)磷酸化蛋白質(zhì)，具有結(jié)合蛋白質(zhì)和DNA的功能。研究證實(shí)［22］，p53與HBV基因組增強(qiáng)子1上游的1047～1059bp區(qū)域存在DNA-蛋白質(zhì)結(jié)合，導(dǎo)致p53蛋白在細(xì)胞內(nèi)積聚，正常的負(fù)調(diào)節(jié)功能喪失。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)［23］，HBx可顯著抑制p53啟動(dòng)子活性，導(dǎo)致p53表達(dá)顯著降低，作用位點(diǎn)是p53啟動(dòng)子序列中的E-盒。此外HBx還可抑制p53的DNA修復(fù)效率。王海平等［24］研究發(fā)現(xiàn)，HBx蛋白可能通過激活HIF-1α通路參與肝硬化結(jié)節(jié)形成時(shí)的血管改建和纖維結(jié)締組織的形成及肝癌的發(fā)生。林靜等［25］通過實(shí)驗(yàn)，在吡柔比星的誘導(dǎo)下、HBx促進(jìn)肝細(xì)胞凋亡的結(jié)果分析，認(rèn)為細(xì)胞在DNA損傷因素作用下，HBx可能通過抑制p53導(dǎo)致p21wafl的表達(dá)降低，引起停滯在G0～G1期細(xì)胞的減少，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞仍能繼續(xù)分裂增殖形成惡性生長。白威等［26］研究結(jié)果表明，肝癌患者的HBV感染血清學(xué)表達(dá)特點(diǎn)是多種標(biāo)志物同時(shí)陽性，表明肝癌患者肝內(nèi)HBV處于持續(xù)復(fù)制狀態(tài)。何群等［27］用PCR、PCRSSCP銀染方法對24例血清HBsAg（+）患者肝癌及癌旁組織中HBx基因表達(dá)和p53基因突變進(jìn)行檢測。肝癌組織中HBx基因表達(dá)率為17%，p53基因突變率為33%，癌旁正常組織和硬化組織中均無HBx基因表達(dá)和p53基因突變。存在HBx表達(dá)的肝癌組織中p53基因突變率為100%，p53基因突變與HBx基因表達(dá)具有相關(guān)性（P＜0.01），提示p53基因突變機(jī)制與HBV感染與整合及HBx的啟動(dòng)有一定關(guān)系。

5 展望

HBx蛋白功能重疊的特點(diǎn)及其編碼的HBx蛋白諸多功能，使其在感染宿主細(xì)胞中的作用極其復(fù)雜。HBx蛋白與HCC發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但HBx的確切作用和肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化分子機(jī)制仍不清楚。HBx是一種多功能調(diào)節(jié)蛋白，潛在的致癌基因，HBx基因突變后確切功能如何仍需研究。由于HBV在致癌過程中有較多因素在不同階段參與作用，全面研究HBx蛋白及其突變體調(diào)節(jié)功能的分子機(jī)制將有助于揭示HCC的發(fā)生和發(fā)展過程，為臨床預(yù)防和治療提供依據(jù)。

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132001 吉林省吉林市人民醫(yī)院