中草藥復合微生態制劑對肉雞腸道菌群和肝臟功能的影響

于佳民，謝全喜，徐 輝，亓秀曄，陳 振，徐海燕，谷 巍

（山東寶來利來生物工程股份有限公司，山東泰安271000）

添加劑

中草藥復合微生態制劑對肉雞腸道菌群和肝臟功能的影響

于佳民，謝全喜，徐 輝，亓秀曄，陳 振，徐海燕，谷 巍

（山東寶來利來生物工程股份有限公司，山東泰安271000）

為研究中草藥復合微生態制劑（CHCP）對肉雞腸道菌群和肝臟的保護作用，試驗選用120只1日齡健康白羽肉雛雞，隨機分為4組，每組3個重復，每個重復10只雞，對照組飼喂基礎日糧，試驗Ⅰ組、Ⅱ組飼喂基礎日糧的同時分別飲水添加1‰CHCP、2‰CHCP。結果表明：在28、42日齡，Ⅰ組肉雞盲腸乳桿菌數量在一定程度上高于陰性對照組3.15%、3.52%（P＞0.05），直腸乳酸桿菌數量高于陰性對照組8.6%、6.78%（P＜0.05）；14、28、42日齡，1‰CHCP組肉雞盲腸、直腸大腸桿菌數量均低于陰性對照組，但差異不顯著（P＞0.05）。28、42日齡，1‰CHCP組血清谷丙轉氨酶水平低于陰性對照組41.05%（P＜0.05）、33.26%（P＜0.05）；42日齡時，1‰CHCP組血清谷草轉氨酶水平低于陰性對照組37.11%（P＜0.05）；28、35、42日齡，1‰CHCP組總膽紅素水平分別比陰性對照組低19.7%（P＞0.05）、27%（P＜0.05）、20.1%（P＞0.05）；35日齡時，1‰CHCP組內毒素水平比陰性對照組低45.1%（P＜0.01）。由此可見，該CHCP按1‰飲水添加可以促進肉雞盲腸、直腸乳酸菌繁殖，降低肉雞盲腸、直腸大腸桿菌的數量，起到調節腸道菌群，維護腸道健康的作用，且該CHCP按1‰飲水添加可降低肉雞血清轉氨酶活性、總膽紅素和內毒素水平，對肉雞肝臟具有一定的保護作用。

中草藥復合微生態制劑；腸道菌群；肝臟功能；肉雞

在我國畜禽養殖過程中，濫用飼用抗生素的現象普遍存在，藥物殘留導致家禽肝臟損傷，肝臟損傷后會造成激素、蛋白質的代謝異常，進而導致生產性能下降，引起家禽死亡，造成巨大經濟損失。益生菌作為飼料添加劑，主要通過調節機體腸道菌群平衡，增強機體免疫力，起到預防疾病的作用（謝全喜等，2015）。腸道微生態平衡后，有害菌受到抑制或被殺滅，血漿內毒素降低，肝臟得到保護。中草藥飼料添加劑因其療效好、無副作用、無殘留等特點被廣泛用于畜禽生產中。益生菌與中草藥二者具有協同作用，益生菌可以促進中草藥的吸收和利用，中草藥能夠促進益生菌增殖（左風等，2002）。本試驗將植物乳桿菌、糞腸球菌及中草藥復配制成中草藥復合微生態制劑（CHCP），通過驗證CHCP對肉雞肝臟的保護作用，以探索CHCP在家禽養殖中的應用價值。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 益生菌由植物乳酸桿菌（CCTCC M 2010150）、糞腸球菌（CCTCCM 2010046）及其代謝產物組成，植物乳酸桿菌含量1.0×109cfu/mL，糞腸球菌含量2.2×109cfu/mL。試驗用中草藥（茵陳10～20份，五味子10～15份，白芍5～8份，板藍根10～20份，珍珠草2～4份，垂盆草3～5份等）均購自永春堂大藥房，經鑒定符合中國藥典2005年版的各項要求。丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉移酶（AST）、總膽紅素（TB）、內毒素（LPS）試劑盒均購自上海科華生物工程股份有限公司。主要儀器有卓越330全自動生化分析儀（上海科華生物工程股份有限公司）。

1.2 CHCP制備 稱取中草藥，混合，加入10倍重量的水，浸泡30min，加熱至沸騰，第1次煎煮時間為60min，過濾，濾渣中再加入10倍重量的水進行第2次煎煮，煎煮時間為50min；過濾，濾渣中再加入8倍重量的水進行第3次煎煮，煎煮時間為30 min，合并濾液，濃縮至濾液濃度為1 g/mL；向濃縮后的濾液中加入益生菌菌粉，混合均勻，即得CHCP。

1.3 試驗動物及飼養管理 試驗肉雞購自泰安大禹種禽場，按重復分籠飼養，自由采食和飲水。舍內光照、溫度和濕度嚴格按照常規飼養管理要求控制，按常規免疫程序對雛雞進行新城疫及法氏囊免疫。每日換食換水前進行食槽和飲水器殺菌消毒。試驗期間詳細記錄各組飼料消耗及試驗雞的健康狀況。

1.4 試驗設計 120只1日齡健康白羽肉雛雞，隨機分為4組，試驗Ⅰ組（1‰ CHCP）、試驗Ⅱ組（2‰ CHCP）、試驗Ⅲ組（陰性對照組）、試驗Ⅳ組（空白對照組），每組3個重復，每個重復10只雞。空白對照組飼喂基礎日糧，試驗Ⅰ、Ⅱ組在飼喂基礎日糧的同時，第8天起白天飲水使用CHCP，12日齡攻毒大腸桿菌菌懸液（109cfu/mL，1mL/只）；陰性對照組在飼喂基礎日糧的同時，僅在12日齡攻毒大腸桿菌菌懸液（109cfu/mL，1mL/只）。

1.5 測定指標和方法

1.5.1 腸道菌群數量測定 分別于14、28、42日齡從每個重復中隨機抽取3只肉雞稱重，采用心臟注入空氣法處死雞只，無菌操作取盲腸、直腸內容物，在滅菌生理鹽水中搖勻，用平板培養計數法計數腸道乳酸桿菌和大腸桿菌，其中乳酸桿菌接種于乳酸菌選擇性培養基（LBS）上培養，在37℃生化培養箱中厭氧培養48 h后進行菌落計數；大腸桿菌則接種于伊紅美蘭瓊脂培養基上培養，在37℃生化培養箱中有氧培養24 h后進行菌落計數；菌群數量以每克腸道內容物所含細菌群落總數的對數（lg cfu/g）表示。

1.5.2 血清生化指標 在試驗肉雞14、28、42日齡時，分別從各組中選擇9只雞宰殺采血，然后分離血清，由全自動生化分析儀檢測血ALT、AST、TB的含量，ELISA試劑盒檢測血清LPS。

1.6 數據統計與處理 試驗數據采用SPSS 11.5進行統計，采用one-way ANOVA進行方差分析，采用LSD法進行組間多重比較，結果均以“平均值±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 CHCP對肉雞腸道菌群的影響 由表1可知，在28、42日齡，Ⅰ組肉雞盲腸乳酸桿菌數量高于陰性對照組3.15%、3.52%（P＞0.05）；在28、42日齡，Ⅰ組肉雞直腸乳酸桿菌數量高于陰性對照組8.6%、6.78%（P＜0.05）。表明當肉雞遭遇病原菌感染時，該CHCP按1‰添加可以促進肉雞盲腸、直腸乳酸菌繁殖。在14、28、42日齡，Ⅰ組肉雞盲腸、直腸大腸桿菌數量均低于陰性對照組（P＞0.05）。表明，當肉雞遭遇病原菌感染時，該CHCP 按1‰添加可以降低肉雞盲腸、直腸大腸桿菌的數量，起到調節腸道、維護腸道健康的作用。

2.2 CHCP對肉雞肝臟保護的影響

2.2.1 CHCP對肉雞血清中ALT水平的影響 由表2可知，14、21日齡，Ⅰ組ALT水平分別低于Ⅲ組1.68%、2.18%（P＞0.05）；28日齡時，Ⅰ、Ⅱ組ALT水平分別低于Ⅲ組41.05%（P＜0.01）、25.2% （P＞0.05），接近于空白組；42日齡時，Ⅰ、Ⅱ組ALT水平分別低于Ⅲ組33.26%（P＜0.05）、35.7% （P＜0.05）。總體來看，Ⅰ組即添加1‰CHCP對降低肉雞血清ALT的作用效果較好。

表1 CHCP對肉雞盲腸、直腸內容物中乳酸桿菌、大腸桿菌數量的影響lg cfu/g

表2 CHCP對肉雞血清中ALT水平的影響U/L

2.2.2 CHCP對肉雞血清中AST水平的影響 由表3可知，14日齡時，Ⅰ、Ⅱ組AST水平分別低于Ⅲ組 36.9%、36.93%（P＜0.05）；21、28、35日齡時，Ⅰ組AST水平分別低于Ⅲ組9.9%、4.37%、6.36%（P＞0.05）；42日齡時，Ⅰ、Ⅱ組AST水平分別低于Ⅲ組 37.11%（P＜0.05）、30.27%（P＜0.05）。總體來看，Ⅰ組即添加1‰CHCP對降低肉雞血清AST的作用效果較好。

表3 CHCP對肉雞血清中AST水平的影響U/L

2.2.3 CHCP對肉雞血清中TB水平的影響 由表4可知，21日齡時，Ⅰ、Ⅱ組總膽紅素水平分別比Ⅲ組低31.65%、37.36%（P＜0.05）；28日齡時，Ⅰ、Ⅱ組總膽紅素水平分別比Ⅲ組低19.7%、 18.54%（P＞0.05），接近于空白組；35日齡時，Ⅰ、Ⅱ組總膽紅素水平分別比Ⅲ組低 27%（P＜0.05）、8.27%（P＞0.05）；42日齡時，Ⅰ組總膽紅素水平比Ⅲ組低20.01%（P＞0.05）。總體來看，Ⅰ組即添加1‰CHCP對降低肉雞血清TB的作用效果較好。

表4 CHCP對肉雞血清中TB水平的影響U/L

2.2.4 CHCP對肉雞血清中LPS水平的影響 由表5可知，28日齡時，Ⅰ、Ⅱ組內毒素水平分別比Ⅲ組低22.3%、10.02%；35日齡時，Ⅰ、Ⅱ組內毒素水平分別比Ⅲ組低45.1%（P＜0.01）、27.9%；42日齡時，Ⅰ、Ⅱ組內毒素水平分別比Ⅲ組低23.41%、25.99%。表明該復合中草藥微生態制劑可以降低血清內毒素水平。

表5 CHCP對肉雞血清中LPS水平的影響U/L

3 討論

3.1 中草藥復合微生態制劑對肉雞腸道菌群的影響 Park等（2014）研究表明，日糧中添加枯草芽孢桿菌可以顯著降低腸道沙門氏菌的數量。Li等（2014）研究表明，微生態制劑可以顯著提高肉雞腸道乳酸桿菌的數量。Zhang等（2014）研究發現，飼喂復合微生態制劑后，肉雞盲腸乳酸桿菌的數量顯著升高，致病性大腸桿菌的數量顯著降低。董秀梅等（2004）的研究顯示，與對照組相比，復合微生態制劑組顯著增加了腸道內乳酸桿菌、腸球菌的數量，同時顯著降低了腸道內大腸桿菌的數量。張日俊等（2005）試驗表明，益生菌能不同程度地降低仔雞直腸、十二指腸和回腸等不同腸段的pH，進而調整腸道菌群達到正常狀態。門文卉等（2016）研究表明，中草藥復合微生態制劑可顯著降低腸道pH值，并且使腸道益生菌的比例增加20.2%。中草藥復合微生態制劑中的益生菌通過生物奪氧，降低腸道內的氧化還原電勢，創造有利于厭氧菌生長的環境，扶植腸道內的優勢菌群，抑制大腸桿菌的數量，使失調的腸道菌群結構調整恢復到正常狀態，改善腸道健康。本試驗中，當肉雞遭遇病原菌感染時，該CHCP按1‰、2‰飲水添加均可以促進肉雞盲腸、直腸乳酸桿菌繁殖，降低肉雞盲腸、直腸大腸桿菌的數量，起到調節腸道菌群，維護腸道健康的作用。

3.2 中草藥復合微生態制劑對肉雞肝臟功能的影響 雷明霞等 （2013）研究表明，植物乳桿菌F22可以降低肉雞肝臟中黃曲霉毒素的殘留，進而對肝臟起到一定保護作用。門文卉等（2016）研究表明，中草藥復合微生態制劑可通過提高血液中谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶、超氧化物歧化酶的活性來顯著增強機體抗氧化水平。羅建杰等（2013）研究表明，屎腸球菌可能促使肉仔雞加強肝臟對維生素的代謝速率，調節肝臟關鍵蛋白的豐度，減少免疫和抗氧化能量支出，從而提高生產性能和免疫機能。本試驗中，當肉雞遭遇病原菌感染時，該CHCP按1‰飲水添加可降低肉雞血清轉氨酶活性、總膽紅素及內毒素水平，對肉雞肝臟具有一定的保護作用。

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The experimentwas conducted to investigate the effect of Chinese herbal compound probiotics（CHCP）on intestinalmicroflora and liver function of broiler chickens.A total of 120 1-day-old broiler chickens were randomly allocated to 4 treatments with 3 replicates of 10 each.The control group were fed basal diet，the chickens inⅠ，Ⅱgroups were fed basal diet and 1‰，2‰CHCPby water respectively.The results showed that，at 28，42 days，the quantity of cecal Lactobacillus in 1‰CHCP group were 3.15%，3.52%higher than that of the negative control group（P＞0.05）；the number of rectal Lactobacilli were 8.6%，6.78%higher than that of the negative control group significantly（P＜0.05）.The number of E.coli in cecum，rectum contens in 1‰ CHCP group were lower than that of the negative control group at 14，28，42 days（P＞0.05）.The Alanine aminotransferase levels in 1‰CHCP group were 41.05%（P＜0.05），33.26%（P＜0.05）lower than that of the negative control group at 28、42 days respectively.The Aspartate aminotransferase levels in 1‰CHCP group were 37.11%（P＜0.05）lower than that of the negative control group at 42 days.Total bilirubin content in 1‰CHCP group were 19.7%，27%，20.1%（P＞0.05）lower than that of the negative control group respectively.The serum endotoxin levels in 1‰ CHCP group were 45.1%（P＜0.01）lower than that of the negative control group.The results suggested that 1‰ CHCP were fed by water could promote the Lactic acid bacteria in broilers cecum，rectum contens，reduce the number of E.coli in broilers cecum，rectum contens，modulate the intestinal flora，maintain intestinal health，and 1‰CHCP fed by water could reduce serum transaminase activity，total bilirubin and endotoxin levels，thus had a protective effecton broiler liver.

chinese herbal compound probiotics；intestinalmicroflora；liver function；broilers

S816.7

A

1004-3314（2016）21-0026-04

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20162107

863課題“新型抗感染功能型微生態制劑研制與應用”（2013AA102806）