四個品種小型豬血液學(xué)指標(biāo)測定及比較

楊李廠, 周文兵, 丁 雋, 周新初, 張建平, 謝 東, 楊偉敏

(1. 上海睿智化學(xué)研究有限公司, 上海 201203; 2. 上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院, 上海 200240; 3. 上海甲干生物技術(shù)有限公司，上海 201112)

四個品種小型豬血液學(xué)指標(biāo)測定及比較

楊李廠1, 周文兵1, 丁 雋1, 周新初2, 張建平3, 謝 東1, 楊偉敏1

(1. 上海睿智化學(xué)研究有限公司, 上海 201203; 2. 上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院, 上海 200240; 3. 上海甲干生物技術(shù)有限公司，上海 201112)

目的 分析比較四個品種小型豬的血液學(xué)生物學(xué)特性。方法 分別選取上海地區(qū)飼養(yǎng)的巴馬小型豬、貴州小型豬和版納小型豬及陸川小型豬，每個品種雌雄各20頭，3～6月齡，測量其血液生理、血清生化與血凝指標(biāo)，然后進(jìn)行單因素方差分析，并進(jìn)行數(shù)據(jù)比較。結(jié)果 四個品種的小型豬血液生理14個指標(biāo)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，血清生化12個指標(biāo)組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，血凝4個指標(biāo)差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。分別對各品種群體數(shù)據(jù)進(jìn)行比較分析，巴馬小型豬群體雌雄間血液常規(guī)、血清生化和血凝指標(biāo)差異顯著(P＜0.05)的指標(biāo)分別有6項(xiàng)、4項(xiàng)和3項(xiàng)，而貴州小型豬、版納小型豬和陸川小型豬雌雄間差異指標(biāo)較少或差異不顯著。四品種小型豬相同性別間比較，也有較多指標(biāo)差異顯著。結(jié)論 測定和比較的巴馬小型豬、貴州小型豬、版納小型豬和陸川小型豬在血液學(xué)、血清生化和血凝等方面數(shù)據(jù)，為應(yīng)用和選擇小型豬開展相關(guān)生物醫(yī)學(xué)和藥物研究提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

巴馬小型豬; 貴州小型豬; 版納小型豬; 陸川小型豬; 血液生理; 血清生化; 血凝

中國小型豬品種資源豐富，1980年代已經(jīng)開始開發(fā)。上海本地雖沒有原產(chǎn)的小型豬品種，但上海在國內(nèi)最早制定了實(shí)驗(yàn)用小型豬地方標(biāo)準(zhǔn)[1]，首先詳細(xì)規(guī)定了實(shí)驗(yàn)用小型豬的遺傳分類方法，規(guī)范了環(huán)境與設(shè)施的技術(shù)要求。由于小型豬在解剖學(xué)、生理學(xué)、營養(yǎng)代謝等方面與人類相似,近年來被廣泛應(yīng)用在藥物代謝動力學(xué)、藥效動力學(xué)、藥理以及毒理學(xué)研究中。

小型豬是模擬人類疾病模型的重要實(shí)驗(yàn)動物，在模型研究中血液學(xué)特性的檢測尤為重要，本試驗(yàn)測定飼養(yǎng)于上海地區(qū)的巴馬小型豬、貴州小型豬、版納小型豬和陸川小型豬的血液學(xué)特性，并比較了各品種間的差異，以期為相關(guān)研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 3～6月齡普通級巴馬小型豬、貴州小型豬、版納小型豬各40頭,雌雄各半，由上海市浦東新區(qū)老港鎮(zhèn)華新特種養(yǎng)殖場提供 [SCXK (滬) 2012-0013]，種源分別來自廣西、貴州和云南原產(chǎn)地; 3～6月齡普通級陸川豬40頭，雌雄各半，由上海甲干生物科技有限公司提供[SCXK(滬)2010-0028]，種源來自廣西陸川。

1.1.2 動物飼養(yǎng)條件 普通級環(huán)境,每日定時、定量飼喂豬飼料, 自由飲水。

1.2 方法

1.2.1 血樣采集 所有動物采血前禁食過夜(12～15 h),清醒狀態(tài)下前腔靜脈取血, 每只動物采血量為5～6 mL,分別用于血液學(xué)、血清生化和血凝指標(biāo)的測定。

1.2.2 血液生理指標(biāo)檢測 取1 mL全血用EDTA抗凝,以SysmexXT-200iv全自動五分類動物血液分析儀檢測各品種小型豬的紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、白細(xì)胞數(shù)(WBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞比積(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(M C V)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞容積分布寬度(RDW)、血小板數(shù)(PLT)、中性粒細(xì)胞數(shù)(NE)、淋巴細(xì)胞數(shù)(LY)、嗜酸粒細(xì)胞數(shù)(EO)、單核細(xì)胞數(shù)(MO)、嗜堿粒細(xì)胞數(shù)(BA)等14項(xiàng)指標(biāo)。

1.2.3 血清生化指標(biāo)的檢測 取3 mL非抗凝血離心分離血清, 用Olympus AU400全自動生化分析儀檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酸激酶(CK)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、總膽紅素(TBIL)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)、總膽固醇(TC)等12項(xiàng)生化指標(biāo)。

1.2.4 血凝指標(biāo)檢測 取1.8 mL全血用檸檬酸鈉抗凝，Destiny Plus全自動血凝儀(Trinity Biotech)檢測凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、纖維蛋白原含量(FIB)、凝血酶時間(TT) 等4項(xiàng)指標(biāo)。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 檢測結(jié)果以表示，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計處理。多組均數(shù)比較首先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，然后進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血液生理指標(biāo)

2.2 血清生化指標(biāo)

通過對12個項(xiàng)目血清生化檢測指標(biāo)進(jìn)行方差分析，結(jié)果顯示四個品種間血清生化指標(biāo)全部呈顯著差異 (P＜0.05) ，特別是堿性磷酸酶 (ALP) 和肌酸激酶(CK)。巴馬小型豬群體有4項(xiàng)血清生化指標(biāo)(ALT、ALB、ALP和TC)性別間差異顯著。四品種小型豬雄性群體比較，血清生化指標(biāo)中只有TBIL差異不顯著，其余11項(xiàng)目指標(biāo)均呈差異顯著;雌性群體比較，血清生化指標(biāo)只有ALB差異不顯著，其余11項(xiàng)目指標(biāo)均呈差異顯著。詳見表2。

2.3 血凝指標(biāo)

血凝檢測結(jié)果如表3。所有4個檢測項(xiàng)目中，四個品種間差異都達(dá)到顯著水平 (P＜0.05)。巴馬小型豬群體有3項(xiàng)血凝指標(biāo)PT、APTT和FIB在雌雄間呈顯著差異。四品種小型豬各品種雌雄群體分別比較，所有雌性和雄性品種群體間4項(xiàng)血凝指標(biāo)都呈差異顯著。

3 討論

本研究表明，相對于其它小型豬品種，巴馬小型豬的性別間血液學(xué)指標(biāo)差異較大，巴馬小型豬與另外三品種小型豬之間存在顯著差異的指標(biāo)較多，尤其是雄性群體之間差異更明顯。這些在相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)計時都需要特別關(guān)注。

不過國內(nèi)的小型豬資源豐富，除目前已經(jīng)培育成功的巴馬小型豬、貴州小型豬、版納小型豬、五指山小型豬和西藏小型豬等幾個常用品種外，各地都有利用當(dāng)?shù)匦⌒拓i資源進(jìn)行醫(yī)學(xué)研究，并陸續(xù)被應(yīng)用于心血管疾病模型、代謝研究、口腔疾病模型甚至神經(jīng)學(xué)等諸多領(lǐng)域[2]。生物學(xué)特性作為小型豬的基礎(chǔ)應(yīng)用研究，各品種的相關(guān)研究頗多，但是類似本文對多個品種小型豬的比較研究很少。由于缺少比較數(shù)據(jù)，使用不同種小型豬進(jìn)行醫(yī)學(xué)研究，將所獲得的大量研究成果進(jìn)行比較也會缺乏基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支持。

本試驗(yàn)首次選取了上海地區(qū)引入和飼養(yǎng)的四個品種小型豬進(jìn)行血液學(xué)特性的檢測與比較分析，得到了較為可靠的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。取得的數(shù)據(jù)與中國實(shí)驗(yàn)用小型豬[3]的9項(xiàng)指標(biāo)WBC、RBC、PLT、MCHC、RDW、HGB、HCT、MCV和MCH進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)各項(xiàng)均值都相近。本試驗(yàn)巴馬小型豬WBC均值大于陳克研報道[4]的數(shù)據(jù)，其他指標(biāo)差異較小; RBC與胡延廷等報道[5]的數(shù)據(jù)差異顯著, 其余指標(biāo)均值差異小或是無顯著性差異。與連林生等報道[6]的版納小型豬的血液生理均值相比，本試驗(yàn)中的版納小型豬的WBC、HGB、HCT和PLT差異較大。在已有的參考指標(biāo)，四個品種血液生理指標(biāo)數(shù)值接近北京DB11T 828.4-2011的參考數(shù)據(jù)[7]。

表1 四品種小型豬血液生理指標(biāo)

血清生化指標(biāo)在4個品種小型豬兩個性別群體間的差異明顯，與已有文獻(xiàn)[4-6,8]報道的小型豬生化檢測結(jié)果相比，數(shù)據(jù)范圍相近。與丹麥的哥廷根小型豬參考范圍相比[9]，四個品種小型豬的大部分血清生化指標(biāo)與其都接近, 數(shù)據(jù)范圍同北京DB11T 828.4-2011的參考范圍也都接近。

儀器和試劑等因素雖然能對同類試驗(yàn)的結(jié)果產(chǎn)生重大影響，但是這兩個因素也最容易控制。本試驗(yàn)重點(diǎn)排除了動物相關(guān)的外界因素如生理狀態(tài)、飼養(yǎng)環(huán)境和反應(yīng)應(yīng)激等對結(jié)果的干擾。生理因素是影響血液生理指標(biāo)的重要因素之一， 如動物年齡、性別、品種、精神狀態(tài)、活動情況、飲食及用藥情況等都會影響血液生理檢測結(jié)果。有研究報道[10]，幼齡犬貓的RBC計數(shù)低于成年犬貓，國外研究結(jié)果[11]顯示幼齡小型豬的RBC、HGB、HCT、MCHC和MCV比成年小型豬低。動物在劇烈運(yùn)動或是外界因素刺激下, 腎上腺素分泌會升高，導(dǎo)致嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)增加。因?yàn)槿粘Ｅc小型豬接觸最多的是飼養(yǎng)員，本實(shí)驗(yàn)的小型豬在采血時由飼養(yǎng)員抓取保定，熟練實(shí)驗(yàn)技術(shù)員采集血樣，盡量減小人為因素對小型豬生理以及血樣質(zhì)量的影響。

表2 四品種小型豬血清生化指標(biāo)

表3 四品種小型豬血凝指標(biāo)

影響血清生化的動物相關(guān)因素也非常眾多，并且同一因素還可能對不同指標(biāo)產(chǎn)生相反的影響。例如仔豬離乳前后血清AMYL活性一直在升高，差異極顯著; 血清TP、ALB、GLU含量在離乳后下降, 差異顯著或極顯著[12]。對于國內(nèi)養(yǎng)殖場而言，最需要考慮的影響因素應(yīng)該是高溫和飼料添加劑?，F(xiàn)有研究[13]表明, 高溫條件下豬的血清總蛋白(第2 天)、球蛋白(第21天)、葡萄糖(第2天)、總膽固醇(第1、2、4天)及甘油三酯(第1天)含量均會顯著降低。目前養(yǎng)殖企業(yè)使用的飼料添加劑種類眾多，尤其是抗生素添加很普遍。絕大部分抗生素都會對動物的肝功能和腎功能產(chǎn)生影響。但是營養(yǎng)性的添加劑也可能導(dǎo)致豬群體血清生化指標(biāo)的差異。對離乳仔豬日糧中添加植酸酶研究[14]表明，42日齡的仔豬血清中的葡萄糖、血清尿素氮和血清堿性磷酸酶水平，分別降低15.2%、22.2%和29.5%; 不過T3、T4和胰島素水平卻分別提高了15. 6%、4.4%和10.9%。

本試驗(yàn)采集的動物樣品均來自實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)殖場，采用符合上海市地方標(biāo)準(zhǔn)的動物飼料，養(yǎng)殖場內(nèi)也有較一般養(yǎng)殖場更嚴(yán)格的溫度控制措施。因此，其研究數(shù)據(jù)能夠?yàn)槲磥淼尼t(yī)學(xué)模型研究和藥物研究提供更好基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支持。

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Investigation on Biological Characteristics of Blood for Four Breeds of Minipigs

YANG Li-chang1, ZHOU Wen-bing1, DING Jun1, ZHOU Xin-chu2, ZHANG Jian-ping3, XIE Dong1, YANG Wei-min1
(1. Shanghai Chempartner Co. Ltd, Shanghai 201203, China; 2. School of Agriculture and Biology, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200240, China; 3. Shanghai Jiagan Bio-tech Co. Ltd, Shanghai 201112, China)

Objective To analyze and compare of the biological characteristics of the blood of four breeds of minipigs.MethodThe four breeds of minipigs including Bama minipigs, Guizhou minipigs, Banna minipigs and Luchuan minipigs at the age of 3 to 6 months reared in Shanghai area were selected to determine the hematology, serum biochemistry and blood coagulation values with 40 (half males and half females) in each breed. All data were analyzed by one-way ANOVA method and then compared.ResultAmong the four breeds of minipigs, 14 parameters of hematology, 12 parameters of serum biochemistry and 4 parameters of blood coagulation were significant different (P＜0.05). Compared the results between males and females, 6 hematologic parameters, 4 serum biochemistry parameters and 3 blood coagulation parameters in Bama minipig were significantly different (P＜0.05), a few parameters or no parameters of blood in Guizhou minipigs, Banna minipigs and Luchuan minipigs were significant different. There are many parameters existing significant different between same gender among four minipigs breeds. ConclusionThe parameters of hematology, serum biochemistry and blood coagulation of Bama minipigs, Guizhou minipigs, Banna minipigs and Luchuan minipigs provide the abundant biological data support when applying and selecting minipig for medical science model research and pharmaceutical research.

Bama minipig; Guizhou minipig; Banna minipig; Luchuan minipig; Hematology;

Q95-33

A

1674-5817(2016)06-0441-06

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.06.008

2016-06-21

上海市實(shí)驗(yàn)動物創(chuàng)新行動計劃項(xiàng)目 (13140900200)

楊李廠(1981- ), 男, 碩士, 研究方向: 動物生理/生化。 E-mail: lchyang@chempartner.cn

楊偉敏, 高級實(shí)驗(yàn)師, 研究方向: 實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)與管理。 E-mail: wmyang1@chempartner.cn

Serum biochemistry; Blood coagulation