PRV定量PCR檢測方法的建立及其在豬精液檢測中的初步應用

聶 昂，王婕敏，張居作，蔡文杰，袁安文※，薛立群※

（1.湖南農業大學動物醫學院，湖南長沙410128；2.湖南省畜牧獸醫研究所，湖南長沙410131）

PRV定量PCR檢測方法的建立及其在豬精液檢測中的初步應用

聶 昂1，王婕敏1，張居作1，蔡文杰2，袁安文1※，薛立群1※

（1.湖南農業大學動物醫學院，湖南長沙410128；2.湖南省畜牧獸醫研究所，湖南長沙410131）

文章根據PRV基因序列，設計特異性引物擴增gH基因，構建重組質粒；優化實驗條件，建立PRV SYBR Green I熒光定量PCR檢測方法。結果表明該方法的標準曲線線性關系良好，R 2=0.998，E=103.854％；特異性強，檢測豬細小病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬圓環2型病毒、豬乙腦病毒和豬瘟兔化弱毒疫苗等均無擴增曲線；靈敏度高，最低可檢測到的27.9拷貝；在公豬精液中最低可檢測到病毒量為16TCID50/100μL，可重復驗證，變異系數均低于3.5％；利用該方法對湖南省109份公豬精液樣品進行了檢測，發現20份陽性樣品，陽性率為18.35％，比國標普通PCR法檢出率高。該方法的建立將為PRV的流行病學調查提供可靠的技術支持。

PRV；熒光定量PCR；公豬精液；流行病學

豬偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)又稱豬皰疹病毒Ⅰ型，是危害養豬業的主要病原之一，主要引起仔豬死亡，母豬繁殖障礙（早產，流產，死胎，木乃伊胎）；而成年豬多為潛伏感染[1]。豬偽狂犬病毒可以在豬群中水平傳播，也能夠通過公豬精液垂直傳播[2,3]。隨著人工授精技術在養豬業的推廣使用，病毒在豬群中的廣泛傳播的風險增加。為了掌握公豬精液中攜帶偽狂犬病毒的情況，有必要建立一種能夠在公豬精液中檢測出豬偽狂犬病毒的方法。……