沙丁胺醇的檢測方法研究進展

李政清， 聶 婉， 伍曉紅， 陳秋玲， 王琤*

（江西科技師范大學生命科學學院，江西南昌330013）

檢測分析

沙丁胺醇的檢測方法研究進展

李政清， 聶 婉， 伍曉紅， 陳秋玲， 王琤韋華*

（江西科技師范大學生命科學學院，江西南昌330013）

沙丁胺醇是β-興奮劑的一種，在臨床應用中能有效地治療支氣管哮喘、肺氣腫等常見哮喘類呼吸道疾病。在畜牧業(yè)中能提高瘦肉率，但由于β-興奮劑易產(chǎn)生殘留而危害食用者的身體健康，因此大部分國家通過立法以禁止β-興奮劑的使用。本文就β-興奮劑中沙丁胺醇的危害以及常用檢測方法作一簡述。

沙丁胺醇；檢測；方法

1 沙丁胺醇的作用與危害性

沙丁胺醇化學名為1-（4-羥基-3-羥甲基苯基），屬于β-興奮劑的一種。添加5～10倍劑量的沙丁胺醇可增強蛋白質(zhì)的合成和脂肪組織代謝能力（王振玲等，2014），從而達到提高飼料利用率、改善肉質(zhì)（趙德明，2008；Zhang等，2007）、促進禽類生長的目的（黃素文等，2007）。沙丁胺醇易在人和動物的內(nèi)臟、器官中殘留（Shelver等，2003），產(chǎn)生的毒性對心臟、肝臟、腎臟的危害較大（孫書剛等，2015），易使糖尿病、心腦血管疾病病人病情惡化，嚴重危害人們的身體健康。近年來發(fā)生多起沙丁胺醇中毒事件（胡萍，2008）。因此，高效、實用的檢測方法對畜產(chǎn)品安全有著重要的作用（Wang等，2006），本文就豬肉以及豬尿中的沙丁胺醇檢測方法作一概述。

2 沙丁胺醇的檢測方法

2.1 感官檢測法 正常生豬色澤淡紅，肉質(zhì)具有良好彈性，不易滲血。長期使用沙丁胺醇飼喂的生豬皮膚光亮、色澤光鮮，毛較少，臀部圓潤且上翹，傷口不易愈合，易跛足，及蹄部易感染，易滲血等（畢玉香，2009）。另外，其瘦肉率高、脂肪少、肌肉飽滿、瘦肉纖維疏松。感官檢測法對人員的技術要求比較低，適用于各種人員，但會因每個人的判定標準不同而產(chǎn)生誤判。

2.2 酶聯(lián)免疫吸附法 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是當前最常用的檢測方法之一，也是當前分析化學的重點研究方向。酶聯(lián)免疫吸附法的原理是用酶復合物和抗體結合，從而產(chǎn)生顯色反應以檢測沙丁胺醇是否存在，酶聯(lián)免疫法的檢測限為0.1 ppb（Sawayawn，2000），靈敏度較高。沙丁胺醇的分子結構與萊克多巴胺相似，檢測時容易產(chǎn)生交叉反應。為了建立沙丁胺醇直接競爭酶聯(lián)免疫法，王俊平等（2011）使用沙丁胺醇多克隆抗體進行了試驗，結果所獲得IC15的值為0.05 ng/mL，具有較高的靈敏度。酶聯(lián)免疫法具有檢測時間短、操作簡單、見效快等優(yōu)點，目前可作為一個快速檢測方法，并不能作為確證方法。

2.3 膠體金免疫法 膠體金免疫法（GIFA）是以膠體金為示蹤物，對沙丁胺醇進行快速檢測的方法。其原理為在硝酸纖維素膜上加入待測樣品，以液體的膠體金為標記抗體，對滲濾膜中形成的抗體抗原復合物進行檢測，如果試驗結果為陽性，硝酸纖維素膜上會有紅色斑點顯現(xiàn)（吳巧麗和葉春生，2012）。彭濤等（2015）利用膠體金免疫層析法對豬尿中的沙丁胺醇進行了快速檢測，其檢測限為0.83μg/L，回收率為86.6%～109.7%。韓京朋等（2014）對豬尿中的沙丁胺醇建立了膠體金檢測法，用時5 min，可檢測出豬尿中的SAL，檢測限為3.0μg/L。由此可見，膠體金免疫法具有操作簡便、見效迅速、成本低廉的優(yōu)點。但此法只能作為初步的篩選方法來確定樣品是否含有β興奮劑，并不能準確的檢測出樣品中是否含有沙丁胺醇。

2.4 色譜法

2.4.1 氣象色譜-質(zhì)譜法 氣象色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）是一種可定性和定量的檢測方法，其在檢測樣品中沙丁胺醇含量的應用中已十分成熟。在使用氣相色譜法檢測樣品中的沙丁胺醇時，通常要經(jīng)過處理、凈化、衍生三個步驟 （管健等，2007）。王建平等（2007）對豬肝中的沙丁胺醇建立了免疫親和色譜-氣相色譜/質(zhì)譜法，又稱IAC-GC/MS法，檢測限為0.5 ng/g，定量限為2 ng/g，回收率為78.4%～106.9%。氣相色譜法檢測精準度高、靈敏度高、穩(wěn)定性強（Shen等，2005），但是實驗儀器昂貴，不能普及使用，檢測時間慢，不適合快速檢測，而且氣相色譜法操作難度大，對實驗人員的技術操作與專業(yè)知識要求較高。

2.4.2 反相高效液相色譜-紫外法 反相高效液相色譜-紫外法是利用含有沙丁胺醇的溶液在紫外下特定的吸收波長，用紫外分光光度計對其進行波長掃描，會有一條特異的峰型曲線。秦永平（2003）等對血漿中的沙丁胺醇建立了反相高效液相色譜-紫外法，以嗎啡為內(nèi)標，采用Ultraspher Cyano分析柱（250 mm×4.6 mm，5μm），乙腈∶甲醇∶0.025mol/L磷酸銨緩沖液 （2∶0.5∶97.5）為流動相，在224 nm波長下檢測離子萃取純化后的樣品，按內(nèi)標法進行定量，標準曲線在0.5～32μg/L內(nèi)有良好線性關系，最低檢測濃度為0.3μg/L，萃取回收率為93%～99%，方法回收率為98%～109%，批內(nèi)RSD小于5%，批間RSD小于8%，回收率高。

2.4.3 高效液相色譜-二極管陣列檢測法 高效液相色譜-二極管陣列檢測法是當前沙丁胺醇檢測法中一種較為重要的檢測方法，二極管陣列檢測器工作原理是組分選擇性吸收通過樣品池的復色光進入單色器，然后照射在二極管陣列裝置上，二極管陣列裝置把光信號轉化為電信號，從而獲得特定組分的成分。戴華等（2003）在檢測飼料中的鹽酸克倫特羅與沙丁胺醇時利用了高效液相色譜-二極管陣列檢測法，測得鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇的定量下限分別為0.10、0.36mg/kg，回收率分別大于88%、74%，RSD（n=5）分別小于6.4%、3.0%。尚紅霞等（2003）在檢測飼料中沙丁胺醇含量時使用了Amberlite XAD-2大孔吸附樹脂進行固相萃取，解決了萃取時產(chǎn)生的乳化問題，取得了良好的試驗結果。這種檢測方法的優(yōu)點在于檢測精確度高、噪音低、成本低、易于操作和推廣、可提供組分的定性信息（Korfmachen，2005），而且還可以得到任意時間的光譜圖。

2.4.4 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS）也是沙丁胺醇的常用檢測法之一，該方法采用乙酸銨緩沖液酶以及經(jīng)混合陽離子交換柱凈化的提取液解提血漿中的目標化合物，再采用超高效液相色譜對化合物進行檢測。此法對豬肝中的沙丁胺醇含量檢測可精確到0.1μg/kg。為了檢測動物血液中的沙丁胺醇含量，王鳳美等（2015）對其建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，線性相關系數(shù)均大于0.99，測定低限為0.5μg/kg，說明沙丁胺醇回收良好。谷麗麗等（2010）利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對病理小鼠的肝臟進行檢測，并對其建立病理模型，可以詳細的觀察出沙丁胺醇的含量以及變化趨勢，并且其精確度、靈敏度都較高 （Josefsson等，2006；Spyridaki等，2006）。但是質(zhì)譜儀操作復雜，儀器昂貴，不易普及使用。

3 小結

沙丁胺醇的檢測方法在日益發(fā)展，檢測靈敏度和精確度也在不斷的提高。相信隨著科技的不斷進步，沙丁胺醇的檢測技術會變的越來越成熟，檢測方法會更加精確、簡單。

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salbutamol；detection；methods

S816.17

A

1004-3314（2017）01-0033-03

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20170107

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