白花蛇舌草氯仿部位的化學成分研究Δ

于 亮，姜 潔，劉 勇，付小凱，黃祝剛，容 蓉，蔣海強，鞏麗麗，呂青濤#（.山東中醫藥大學藥學院，濟南 25055；2.山東省藥學科學院中醫藥研究所，濟南 2500；.山東大學齊魯醫院，濟南 25002）

白花蛇舌草氯仿部位的化學成分研究Δ

于 亮1，2＊，姜 潔3，劉 勇1，付小凱1，黃祝剛1，容 蓉1，蔣海強1，鞏麗麗1，呂青濤1#（1.山東中醫藥大學藥學院，濟南 250355；2.山東省藥學科學院中醫藥研究所，濟南 250101；3.山東大學齊魯醫院，濟南 250012）

目的：研究白花蛇舌草氯仿部位的化學成分。方法：采用硅膠柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜和薄層色譜對白花蛇舌草氯仿部位化合物進行分離純化，根據理化性質和波譜數據分析鑒定化合物結構。結果：從白花蛇舌草氯仿部位中分離得到11個化合物，分別鑒定為2-羥基-3-甲基蒽醌（1）、2-羥基-1-甲氧基-3-甲基蒽醌（2）、2-羥基-1-甲氧基蒽醌（3）、鄰苯二甲酸二丁酯（4）、甲基異茜草素（5）、熊果酸（6）、耳草酮B（7）、莨菪亭（8）、2，6-二羥基-3-甲基-4-甲氧基蒽醌（9）、2-羥基-3-羥甲基蒽醌（10）、正十六烷（11）。結論：化合物4、7、10、11為首次從白花蛇舌草植物中分離得到，本研究為白花蛇舌草質量評價奠定了一定基礎。

白花蛇舌草；鄰苯二甲酸二丁酯；耳草酮B；2-羥基-3-羥甲基蒽醌；正十六烷

白花蛇舌草為茜草科Rubiaceae耳草屬Hedyotis L.植物白花蛇舌草Hedyotis diffusa Willd.的全草，具有清熱、解毒、消腫、止痛之功效[1]，現臨床主要用于抗癌治療[2]，其主要含有三萜類、蒽醌類、環烯醚萜類、甾醇類、香豆素類、黃酮類、烷烴類等化學成分[3]。前期藥理實驗已表明白花蛇舌草氯仿部位具有較強的抗子宮內膜癌Ishikawa細胞的活性，為探究其活性成分，本試驗對該植物氯仿部位的化學成分進行了系統分離，以為白花蛇舌草資源的開發利用提供一定參考。

1 材料

1.1 儀器

MAT-212型質譜儀（美國Varian公司）；Bruker AM-400/600型核磁共振儀（德國Bruker公司）；XRC-1型顯微熔點儀（四川大學科教儀器開發公司）；1200型高效液相色譜（HPLC）儀，包括二極管陣列檢測器（美國Agilent公司）；AZL-600Y型粉碎機（永康市艾澤拉儀器有限公司）；EYELA型旋轉蒸發儀（日本東京理化器械株式會社）。

1.2 試劑

柱色譜硅膠（規格：100～200、200～300目）、薄層層析硅膠均購自青島海洋化工有限公司；Sephadex LH-20凝膠（瑞典Pharmacia公司）；甲醇、四氫呋喃（THF）為色譜純，乙醇、三氯甲烷、二氯甲烷、石油醚為分析純，水為超純水。

1.3 藥材

白花蛇舌草藥材購自濟南建聯中藥店（產地：江西，批號：20120730、20130201）經山東中醫藥大學中藥鑒定教研室李峰教授鑒定為真品。

2 提取與分離

取干燥白花蛇舌草藥材15 kg，粉碎，70%乙醇回流提取3次（藥材與乙醇質量比為1∶7），每次1.5 h。抽濾、減壓濃縮、離心棄去沉淀，依次用石油醚、氯仿萃取，減壓濃縮，依次得到石油醚部位浸膏8 g、氯仿部位浸膏75 g。

取氯仿部位浸膏75 g，以二氯甲烷-甲醇（300∶0、300∶1、60∶1、30∶1、15∶1、3∶1、0∶1，V/V）梯度洗脫，得7個流分（Fr.1～Fr.7）。其中，流分Fr.4減壓濃縮后有黃色沉淀產生，此黃色沉淀用HPLC柱（流動相：THF-水，40∶60，V/V）洗脫，得化合物1（26 mg）。流分Fr.3以石油醚-乙酸乙酯（60∶1、30∶1、9∶1、3∶1、1∶1、1∶3，V/V）梯度洗脫，得Fr.3-1～Fr.3-4；流分Fr.3-3在薄層色譜上點樣，以石油醚-乙酸乙酯（2.5∶1，V/V）為展開劑展開，色譜帶成分經Sephadex LH-20凝膠柱分離，得化合物2（35 mg）、化合物3（6 mg）；流分Fr.3-4在薄層色譜上點樣，先以石油醚-乙酸乙酯-甲酸（2∶1∶0.01，V/V/V）為展開劑展開，后以石油醚-乙酸乙酯（1∶1，V/V）為展開劑展開，得化合物4（5 mg）。流分Fr.4以石油醚-乙酸乙酯（60∶1、30∶1、15∶1、8∶1、4∶1、2∶1、1∶1、0∶1，V/V）梯度洗脫，得Fr.4-1～Fr.4-4；流分Fr.4-2減壓濃縮后有黃色沉淀產生，此黃色沉淀用HPLC柱（流動相：甲醇-水，70∶30，V/V）洗脫，得化合物5（11 mg）；Fr.4-3以石油醚-乙酸乙酯（60∶1、30∶1、15∶1、8∶1、4∶1、2∶1、1∶1、0∶1，V/V）梯度洗脫，得化合物6（52 mg）、化合物7（20 mg）；Fr.4-4為針狀結晶，純化后得化合物8（9 mg）。流分Fr.5以石油醚-乙酸乙酯（100∶0、100∶1、50∶1、30∶1、10∶1、3∶1，V/V）梯度洗脫，得Fr.5-1～Fr.5-6；Fr.5-3以石油醚-乙酸乙酯（30∶1、20∶1、15∶1、10∶1、8∶1、5∶1、3∶1，V/ V）梯度洗脫，得Fr.5-3-1～Fr.5-3-4；將Fr.5-3-1中28、30號流分的沉淀分別純化，得化合物9（10 mg）、化合物10（10 mg）；Fr.5-4以二氯甲烷-甲醇（200∶1、100∶1、60∶1、50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、5∶1，V/V）梯度洗脫，取出2號流分的結晶，得化合物11（5 mg）。

3 結構鑒定

化合物1：黃色針狀結晶；經薄層色譜板展開，氨熏后顯紅色；Borntrager’s反應呈陽性；mp：234～235℃。EI-MS：m/z 238[M]+；1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：11.014（1H，s，OH），8.125（2H，m，H-5，8），7.910（1H，s，H-1），7.876（2H，m，H-6，7），7.516（1H，s，H-4），2.271（3H，s，CH3）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：181.77（C-9），182.97（C-10），161.81（C-2），134.78（C-7），134.33（C-6），133.64（C-8a），133.59（C-10a），133.51（C-4a），132.37（C-3），130.29（C-1），126.96（C-5），126.92（C-8），125.43（C-9a），111.70（C-4），16.64（CH3）。與文獻[4]對照，其波譜數據基本一致，可確定該化合物為2-羥基-3-甲基蒽醌（2-Hydroxy-3-methylanthraquinone）。

化合物2：黃色針狀的結晶；經薄層色譜板展開，氨熏后顯紅色；mp：220～222℃。EI-MS：m/z 268[M]+；1HNMR（400 MHz，CDCl3）δ：8.245（2H，m，H-5，8），7.985（1H，s，H-4），7.753（2H，m，H-6，7），4.025（3H，s，OCH3），2.406（3H，s，CH3）。13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：182.52（C-10），182.41（C-9），153.78（C-2），146.03（C-1），134.49（C-8a），133.74（C-7），133.64（C-6），132.96（C-10a），131.34（C-3），126.96（C-8），126.76（C-5），126.66（C-4），126.48（C-4a），123.52（C-9a），62.15（OCH3），16.32（CH3）。與文獻[4]對照，其波譜數據基本一致，可確定該化合物為2-羥基-1-甲氧基-3-甲基蒽醌（2-Hydroxy-1-methoxy-3-methylanthraquinone）。

化合物3：黃色針狀的結晶；經薄層色譜板展開，氨熏后顯紅色；mp：178～179℃。EI-MS：253 m/z[M-H]—；1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：3.838（3H，s，OCH3），7.330（1H，d，J＝8.4 Hz，H-3），7.870（2H，m，H-6，7），7.930（1H，d，J＝8.4 Hz，H-4），8.126（2H，m，H-5，8），10.824（1H，s，OH）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：60.98（OCH3），121.82（C-4），125.35（C-3），126.20（C-9a），126.56（C-5），127.03（C-4a），127.17（C-8），132.09（C-10a），134.31（C-6），134.52（C-7），134.93（C-8a），148.08（C-l），158.31（C-2），181.88（C-9），182.52（C-10）。與文獻[5]對照，其波譜數據基本一致，可確定該化合物為2-羥基-1-甲氧基蒽醌（2-Hydroxy-1-methoxyanthraquinone）。

化合物4：無色油狀液體。ESI-MS：m/z 301[M+ Na]+；1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：7.720（2H，dd，J＝6.0，3.2 Hz，H-3，6），7.670（2H，dd，J＝6.0，3.2 Hz，H-4，5），4.224（4H，t，J＝6.5 Hz，H-8，8′），1.643（4H，m，H-9，9′），1.370（4H，m，H-10，10′），0.907（6H，t，J＝7.2 Hz，H-11，11′）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：14.00（CH3-11，11′），19.12（C-10，10′），30.48（C-9，9′），65.48（C-8，8′），129.13（C-3，6），131.97（C-1，2），132.18（C-4，5），167.42（C-7，7′）。與文獻[6]對照，其波譜數據基本一致，可確定該化合物為鄰苯二甲酸二丁酯（Dibutyl phthalate）。

化合物5：黃色針狀結晶，經薄層色譜板展開，氨熏后顯紅色；Borntrager’s反應呈陽性；mp：249～250℃。ESI-MS：m/z 253[M-H]—；1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：7.248（1H，s，H-4），8.140（1H，d，J＝7.2 Hz，H-5），7.899（2H，m，H-6，7），8.210（1H，d，J＝7.2 Hz，H-8），2.080（3H，s，CH3），13.162（1H，s，1-OH），11.357（1H，s，3-OH）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：8.57（C-11），108.25（C-4），109.20（C-9a），117.73（C-2），126.82（C-8），127.17（C-5），132.26（C-8a），133.42（C-10a），133.65（C-4a），134.82（C-7），135.02（C-6），162.97（C-3），164.08（C-1），182.47（C-10），186.40（C-9）。與文獻[7]對照，其波譜數據基本一致，可確定該化合物為甲基異茜草素（Rubiadin）。

化合物6：白色片狀結晶；經薄層色譜板展開，10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色；Liebermann-Burchard反應呈陽性；mp：239～240℃。ESI-MS：m/z 456[M]+；1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：0.677（3H，s，Me-24），0.750（3H，s，Me-25），0.810（3H，d，J＝6.0 Hz，Me-29），0.867（3H，s，Me-23），0.913（3H，d，J＝7.6 Hz，Me-30），0.979（3H，s，Me-26），1.041（3H，s，Me-27），2.110（1H，d，J＝11.2 Hz，H-18β），2.999（1H，m，J＝4.4 Hz，H-3），4.280（1H，d，J＝4.4 Hz，OH），5.13（1H，s，H-12），11.933（1H，s，COOH）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：15.70（C-24），16.54（C-25），17.39（C-26），17.48（C-29），18.48（C-6），21.45（C-30），23.33（C-11），23.75（C-27），24.29（C-16），27.47（C-2），28.02（C-15），28.73（C-23），30.67（C-21），38.72（C-1），38.92（C-4），38.98（C-8），38.98（C-19），38.85（C-20），42.12（C-14），47.30（C-17），47.50（C-9），52.86（C-18），55.27（C-5），77.31（C-3），125.05（C-12），138.66（C-13），178.72（C-28）。與文獻[8]對照，其波譜數據基本一致，可確定該化合物為熊果酸（Ursolic acid）。

化合物7：青色六面體塊狀結晶；經薄層色譜板展開，熒光燈（365 nm）下顯藍光；mp：149～150℃。ESIMS：m/z 245[M+H]+；1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：1.752（3H，s，H-3′），3.130（1H，dd，J＝16.2，8.1 Hz，H-9a），3.513（1H，dd，J＝16.2，10.0 Hz，H-9b），4.955（1H，s，H-2′a），5.122（1H，s，H-2′b），5.434（1H，t，J＝8.8 Hz，H-8），6.193（1H，d，J＝9.2 Hz，H-3），6.936（1H，s，H-5），7.900（1H，d，J＝9.6 Hz，H-4），9.675（1H，s，OH）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：17.27（C-3′），31.56（C-9），87.56（C-8），112.17（C-5），113.00（C-4a），113.13（C-3），113.88（C-2′），114.49（C-9a），139.17（C-1′），143.63（C-6），144.83（C-4），145.11（C-9b），152.01（C-6a），160.82（C-2）。與文獻[9]對照，其波譜數據基本一致，可確定該化合物為耳草酮B（Hedyotiscone B）。

化合物8：青色針狀結晶；經薄層色譜板展開，熒光燈（365 nm）下顯藍光；紫外收光譜：λEtOHmax：228、253、298、347 nm；λEtOH-NaOHmax：242、400 nm。ESI-MS：m/z 191 [M-H]—；1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：3.792（3H，s，OCH3），6.122（1H，d，J＝9.6 Hz，H-3），6.704（1H，s，H-8），7.133（1H，s，H-5），7.869（1H，d，J＝9.6 Hz，H-4）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：161.37（C-2），110.56（C-3），144.97（C-4），109.5（C-5），146.42（C-6），154.23（C-7），103.18（C-8），150.68（C-9），109.72（C-10），56.36（OCH3）。UV數據與文獻[10]對照完全一致，可確定該化合物不是異莨菪亭；核磁共振數據與文獻[11]對照基本一致，可確定該化合物為莨菪亭（Scopoletin）。

化合物9：黃色片狀的結晶；經薄層色譜板展開，氨熏后顯紅色；Borntrager’s反應陽性；mp：226～228℃。ESI-MS：m/z 284[M]+，266[M-H2O]+，255[M+H-OCH3]+；1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：10.898（1H，s，2-OH），10.145（1H，s，6-OH），7.987～8.001（1H，d，J＝8.4 Hz，H-8），7.800（1H，s，H-1），7.434～7.438（1H，d，J＝2.4 Hz，H-5），7.15（1H，dd，J＝8.4，2.4 Hz，H-7），3.786（1H，s，4-OCH3），2.291（1H，s，3-CH3）。13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：182.02（C-10），180.71（C-9），162.93（C-6），154.97（C-2），146.98（C-4），136.69（C-8a），131.96（C-3），129.33（C-8），125.61（C-1），125.46（C-10a），124.76（C-9a），124.34（C-4a），121.07（C-7），112.25（C-5），61.32（OCH3），16.75（CH3）。與文獻[12]對照，其波譜數據基本一致，可確定該化合物為2，6-二羥基-3-甲基-4-甲氧基蒽醌（2，6-Dihydroxy-3-methyl-4-methoxyanthraquinone）。

化合物10：黃色片狀的結晶；經薄層色譜板展開，氨熏后顯紅色；Borntrager’s反應呈陽性；mp：310～315℃；ESI-MS：m/z 253[M-H]—；1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：11.115（1H，s，1-OH），8.233（1H，s，H-4），8.132～8.170（2H，m，H-5，8），7.864～7.897（2H，m，H-6，7），7.531（1H，s，H-1），5.423（1H，s，CH2OH），4.587（2H，s，CH2OH）。13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：182.82（C-9），181.69（C-10），159.83（C-2），136.58（C-9a），134.62（C-6），134.15（C-7），133.61（C-8a），133.43（C-10a），133.29（C-3），126.80（C-5），126.73（C-8），126.39（C-4），125.24（C-4a），111.41（C-1），58.05（CH2OH）。與文獻[13]對照，其波譜數據基本一致，可確定該化合物為2-羥基-3-羥甲基蒽醌（2-Hydroxy-3-hydroxymethylanthraquinone）。

化合物11：無色沙狀結晶。ESI-MS：m/z 226[MI+，212[M-CH2]+，198[M-CH2-CH2]+，184[M-CH2-CH2-CH2]+；1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：1.1～1.4（28H，m），0.88（6H，t，J＝6.6 Hz）。13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：14.15（C-1，C-16），22.71（C-2，C-15），29.39（C-4，C-13），29.68（C-5，C-12），29.72（C-6，C-7，C-8，C-9，C-10，C-11），31.95（C-3，C-14）。與文獻[14]對照，其碳譜數據基本一致，可確定該化合物為正十六烷（n-Hexadecane）。

4 討論

本試驗從白花蛇舌草全草中分離得到了11個化合物，分別鑒定為2-羥基-3-甲基蒽醌（1）、2-羥基-1-甲氧基-3-甲基蒽醌（2）、2-羥基-1-甲氧基蒽醌（3）、鄰苯二甲酸二丁酯（4）、甲基異茜草素（5）、熊果酸（6）、耳草酮B（7）、莨菪亭（8）、2，6-二羥基-3-甲基-4-甲氧基蒽醌（9）、2-羥基-3-羥甲基蒽醌（10）、正十六烷（11），其中化合物4、7、10、11為首次從白花蛇舌草植物中分離得到。本研究結果對白花蛇舌草植物的質量標準及開發具有一定參考價值。

[1] 黃建榮，劉詠海，喻志標，等.白花蛇舌草化學成分和藥理活性研究進展[J].中成藥，2005，27（11）：1329-1331.

[2] 王順啟，陳力，倪虹，等.白花蛇舌草對肝癌細胞SMMC-7721基因表達的影響[J].中藥材，2007，30（10）：1285-1287.

[3] 于亮，呂青濤，黃祝剛，等.HPLC法比較不同產地白花蛇舌草中兩種香豆素類成分的含量[J].現代儀器與醫療，2015，21（3）：85-87.

[4] 周應軍，吳孔松，曾光堯，等.白花蛇舌草化學成分的研究[J].中國中藥雜志，2007，32（7）：590-592.

[5] 吳孔松，張坤，譚桂山，等.白花蛇舌草化學成分的研究[J].中國藥學雜志，2005，40（11）：817-819.

[6] 羅揚婧，左月明，張忠立，等.梔子化學成分研究：Ⅲ[J].中藥材，2014，37（7）：1196-1198.

[7] 陳紅，陳敏，黃澤豪，等.巴戟天的化學成分研究[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（21）：69-71.

[8] 王寧輝，馬養民，康永祥，等.白檀化學成分的研究[J].時珍國醫國藥，2014，25（11）：2624-2626.

[9] Chen YH，Chang FR.New cytotoxic 6-oxygenated 8，9-dihydrofurocoumarins，hedyotiscone A-C，from Hedyotis biflora[J].Planta Med，2006，72（1）：75-78.

[10] 謝韜，梁敬鈺，劉凈，等.濱蒿化學成分的研究[J].中國藥科大學學報，2004，35（5）：15-17.

[11] Wu YB，Zheng CJ，Qin LP，et al.Antiosteoporotic activity of anthraquinones from Morinda officinalis on osteoblasts and osteoclasts[J].Molecules，2009，14（1）：573-576.

[12] Kang XD，Li X，Zhao CC，et al.Two new anthraquinones from Hedyotis diffusa W[J].J Asian Nat Prod Res，2008，10（2）：193-195.

[13] 黃艷麗，項偉，宋啟示.美麗蛇根草的化學成分研究[J].中草藥，2009，40（4）：519-521.

[14] Lawrence B Alemany.Exceptional resolution and new signals detected in the13C-NMR spectra of alkanes[J].Magn Reson Chem，1989，27（11）：1065-1068.

Study on the Chemical Constituents of the Chloroform from Hedyotis diffusa

YU Liang1，2，JIANG Jie3，LIU Yong1，FU Xiaokai1，HUANG Zhugang1，RONG Rong1，JIANG Haiqiang1，GONG Lili1，LYU Qingtao1（1.School of Pharmacy，Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China；2.Institute of Traditional Chinese Medicine，Shandong Academy of Pharmaceutical Sciences，Jinan 250101，China；3.Qilu Hospital of Shandong University，Jinan 250012，China）

OBJECTIVE：To study the chemical constituents of the chloroform from Hedyotis diffusa.METHODS：Silica gel，Sephadex LH-20 column chromatography and preparative thin layer chromatography were conducted to classify and purify of chemical constituents of the chloroform from H.diffusa，the chemical structures were analyzed and identified based on physicochemical properties and spectral data.RESULTS：Totally 11 compounds were obtained from the chloroform of H.diffusa，namely 2-hydroxy-3-methylanthraquinone（1），2-hydroxy-1-methyl-3-methoxyanthraquinone（2），2-hydroxy-1-methoxyanthraquinone（3），dibutyl phthalate（4），rubiadin（5），ursolic acid（6），hedyotiscone B（7），scopoletin（8），2，6-dihydroxy-3-methyl-4-methoxyanthraquinone（9），2-hydroxy-3-hydroxymethylanthraquinone（10）and n-hexadecane（11）.CONCLUSIONS：Compound 4，7，10，11 are firstly obtained from H.diffusa，the study had laid certain foundation for the quality evaluation of H.diffusa.

Hedyotis diffusa；Dibutyl phthalate；Hedyotiscone B；2-Hydroxy-3-hydroxymethylanthraquinone；n-Hexadecane

R284.1

A

1001-0408（2017）03-0390-04

2016-02-07

2016-09-27）

（編輯：張 靜）

國家自然科學基金資助項目（No.81173614）

＊碩士研究生。研究方向：藥物化學。E-mail：yulianger777@163. com

#通信作者：教授，博士。研究方向：天然藥物化學成分及化學分析。E-mail：luqingtao9@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.03.29