尿毒癥毒素對人腎小管上皮細胞外基質的影響及臨床意義

劉孝猛 劉勁松 李萌 劉麗穎

尿毒癥毒素對人腎小管上皮細胞外基質的影響及臨床意義

劉孝猛 劉勁松 李萌 劉麗穎

目的 探討尿毒癥毒素對人體腎小管上皮細胞外基質的影響。方法 選擇88例血清樣本。疾病組44例尿毒癥患者樣本；健康組44例健康人群樣本。結果 疾病組中20%濃度樣本膠原蛋白含量高于健康組及其它濃度樣本，纖連蛋白含量規律與膠原蛋白相同，差異有統計學意義（P＜0．05）。結論 尿毒癥毒素能夠對人體腎小管上皮細胞外基質的代謝形成干擾，促進腎小管間質纖維化病變進程。

腎小管上皮細胞外間質；尿毒癥毒素；影響

腎小管結構病變越來越受到關注，其不僅在腎臟疾病中會被累及，而且自身上皮細胞外間質也會發生各種病變，其中以纖維化最為典型，導致腎臟對蛋白質吸收率大幅下降，影響泌尿系統功能[1-3]?，F研究尿毒癥毒素對人體腎小管上皮細胞外基質病變的影響，如下為具體研究。

1 資料及方法

1.1 一般資料

研究共選擇2014年12月—2016年12月的88例受檢者。疾病組中男27例，女17例，患者年齡45～83歲，平均年齡為（65.37±2.82）歲。健康組中男29例，女15例，患者年齡44～81歲，平均年齡為（65.29±2.95）歲。兩組受檢者除患病因素外，其余一般資料差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

根據88例受檢者是否患病將其分為兩個小組，其中一組患有尿毒癥，所得數據記疾病組；另外一組則為參與體檢的健康人群，所得數據記健康組。在清晨6∶00～8∶00采集受檢者血清樣本，要求采集前至少空腹8 h，在無菌操作臺內將血清樣本混勻、滅活和過濾，保存溫度應控制在零下20℃。選擇疾病組血清樣本，采用梯度稀釋法，按照5%濃度將樣本配置成濃度為20%、15%、10%以及5%四組。

將血清轉移至含有小牛血清（10%）的RPMI1640培養基上進行孵化，連續培養24～48 h后，選擇相差顯微鏡和電鏡分別對細胞形態進行觀察，同時采用細胞角蛋白18結合免疫組化方式對腎小管上皮細胞進行確定。在顯微鏡下腎小管上皮細胞多呈鵝卵石狀（多邊形），且單個細胞體積大于其它血清細胞，折光率較強，細胞間排列緊密且互相銜連，可觀察到融合性單層分布。經過免疫組化處理后的腎小管上皮細胞內出現棕褐色顆粒物，且呈不均勻狀態分散在細胞漿內；其它細胞漿內無染色顆粒物，且細胞核呈紫色。電鏡下腎小管上皮細胞膜上分布由較多的微絨毛結構，使得細胞間能夠緊密連接，其它細胞無此特征。然后將上皮細胞重新轉移至RPMI1640培養液上孵化，利用消化法對孵化后上清液中膠原蛋白含量進行確定，采用ELISA法對纖連蛋白含量進行確定。

1.3 統計學處理

本次研究采用SPSS 18.0統計學軟件對數據進行處理，計量資料采用（）表示，采用t檢驗，P＜0.05，表示數據差異具有統計學意義。

2 結果

健康組血清中膠原蛋白含量為（30.19±1.62）μg/ml、疾病組5%濃度組含量為（35.61±2.63）μg/ml、疾病組10%組含量為（39.73±2.91）μg/ml、疾病組15%組含量為（41.07±2.33）μg/ml、疾病組20%組含量為（44.52±0.83）μg/ml。由此可見疾病組血清膠原蛋白含量高于健康組，各組數據間差異具有統計學意義（P＜0.05），且尿毒癥毒素濃度越高膠原蛋白含量越高。

健康組血清當中纖連蛋白含量為（105.58±17.73）ng/ml、疾病組5%濃度組含量為（211.87±19.51）ng/ml、疾病組10%組含量為（218.03±23.62）ng/ml、疾病組15%組含量為（229.62±21.37）ng/ml、疾病組20%組含量為（244.89±15.38）ng/ml。由此可見疾病組血清膠原蛋白含量高于健康組，各組數據間差異具有統計學意義（P＜0.05），且尿毒癥毒素濃度越高纖連蛋白含量越高。

3 討論

腎小管上皮細胞間質病變是所有腎臟疾病進展過程中所必然發生的病癥，從生理功能角度看，腎小管是腎小球當中吸收蛋白質的主要結構，在腎臟發病后腎小球透過率就會異常升高，此時腎小管吸收負荷增加，因而導致結構病變。膠原蛋白是腎小管上皮細胞外基質中的主要物質，該物質影響了基質內膠原纖維的合成，人體健康狀態下基質中膠原蛋白含量非常低，從而保證其處于液體狀態[4-8]?，F研究結果表明隨著尿毒癥毒素的不斷升高，細胞外基質當中膠原蛋白的含量也在不斷增加，而且高于健康人群。

纖連蛋白的主要功能是連接間質纖維或促進間質纖維化，根據現代臨床研究顯示，當患者腎臟發生纖維化病變時，纖連蛋白屬于最早異常增加的蛋白質種類。該物質可加快腎小管細胞外基質的凝聚速度，而且可引發細胞本身纖維化，促進纖維化后的細胞聚集?，F研究結果中可以看出，尿毒癥毒素濃度5%時纖連蛋白含量為（211.87±19.51）ng/ml、濃度10%時為（218.03±23.62）ng/ml、濃度15%時為（229.62±21.37）ng/ml、濃度20%時為（244.89±15.38）ng/ml。纖維蛋白與膠原蛋白一樣，與尿毒癥毒素濃度呈正比，說明尿毒癥毒素越高，腎小管上皮細胞外基質纖維化的程度越高。

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The Effect and Clinical Significance of Uremic Toxin on the Extracellular Matrix of Human Renal Tubular Epithelial Cells

LIU Xiaomeng LIU Jinsong LI Meng LIU Liying Nephrology Department, Heilongjiang Province Hospital, Harbin Heilongjiang 150036, China

Objective To investigate the effects of uremic toxins on the extracellular matrix of human renal tubular epithelial cells. Methods 88 cases of serum samples were collected. A sample of 44 cases of uremic patients in the disease group and a sample of healthy subjects in the healthy group (n=44). Results The collagen content of the 20% samples in the disease group was significantly higher than that in the healthy group and the other samples. The content of fi bronectin was similar to that of collagen, the difference was statistically significant (P＜ 0.05). Conclusion Uremic toxin can interfere with the metabolism of extracellular matrix of human renal tubular epithelial cells, and promote the process of tubule interstitial fi brosis.

renal tubular epithelial extracellular matrix; uremic toxin; effect

R692

A

1674-9316（2017）08-0031-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．08．017

黑龍江省醫院腎內科，黑龍江 哈爾濱 150036