中藥制劑有效成分含量測定中高效液相色譜法的應用分析

裴勇

河南中醫藥大學第一附屬醫院中藥制劑提取間，河南鄭州 450000

中藥制劑有效成分含量測定中高效液相色譜法的應用分析

裴勇

河南中醫藥大學第一附屬醫院中藥制劑提取間，河南鄭州 450000

中藥類型包括中藥成方制劑、中成藥、單味制劑等，與西藥相比，中藥制劑不良反應小，用量少，且具有一定持久性和高效性。但中藥制劑所含成分較多，制備工藝復雜，在中藥制劑質量控制上很難做到面面俱到，造成中藥制劑質量良莠不齊。為保證中藥制劑質量，該研究采用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）對中藥制劑有效成分含量測定中的應用與發展進行分析研究，并提出觀點，以供參考。

中藥制劑；含量測定；高效液相；色譜法

中藥制劑質量檢測中，一般將具有生理活性的化學成分作為控制標準與質量評價，以衡量產品是否穩定、質量是否達標等。高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一種具有分析速度快、檢測靈敏度高、分離效率高、應用范圍廣、操作方便、重現性高等諸多特點的成分含量測定方法，可用于分析樣品沸點、大分子量有效成分、熱不穩定性等，已成為目前控制中藥制劑有效成分的重要手段。該研究對HPLC法在中藥制劑中藥苷類、萜類、黃酮類、生物堿類、醌類、木脂素類、香豆素類、有機酸類等8種有效成分含量測定應用進行介紹。

1 中藥苷類成分含量測定

苷類在是天然藥物研究中不可忽視的一類成分，其廣泛分布于中藥界，生理活性多樣，結構不一，國內外均有對采用HPLC法測定中藥苷類成分含量的文獻報道[1]。高廣慧等[2]采用HPLC法對中芍藥苷含量進行測定，將提取與分離工藝優化，有效分離芍藥苷成分，方法準確可靠，能夠較好控制中成藥、中藥材中芍藥苷質量。蘇曉楠等[3]通過HPLC法，快速、準確測定了芒果苷、新芒果苷及知母皂苷成分的含量，為中藥材質量控制的全面性奠定了堅實基礎。陳華等[4]用HPLC法測定黃芩苷含量，通過精密度、穩定性、重復性、加樣回收率試驗及樣品含量測定，結果顯示樣品分離度及重現性好，峰型佳，無雜質峰干擾，保留時間穩定，精密度、穩定性、重復性均符合標準。

2 萜類成分含量測定

萜類成分結構復雜、種類繁多、生理活性多種多樣，采用HPLC法可檢測出一些萜類成分含量，有學者對銀杏葉提取物萜類內酯（倍半萜內酯和二萜內酯）含量進行測定[5]，倍半萜內酯包括白果內脂，二萜內酯包括銀杏內酯A、B、C等，結果顯示，以對照品峰濃度為橫坐標、面積為縱坐標，繪制標準曲線，相關系數＞0.99，適用于含量測定，且白果內酯平均RSD值0.72%，平均回收率101.35%，銀杏內酯 A、B、CRSD 值分別為 1.86%、1.52%、1.40%，平均回收率99.35%、101.21%、101.22%，表明該定量分析方法精密度和重復性良好，可廣泛應用于萜類成分測定。

3 黃酮類成分含量測定

黃酮類化合物多與糖類結合組成各種黃銅苷類，其易溶于水、甲醇、乙醇等極性強的溶劑，抗氧化作用強，可阻止細胞衰老、退化以及癌癥發生。采用HPLC法測定具有較高靈敏度，馮秀麗等[6]研究者利用HPLC法測定猴耳環藥材中黃酮類含量，結果顯示峰面積與成分質量濃度在測定范圍內均呈現良好的線性關系，平均RSD值0.36%～1.20%，平均回收率99.91%～100.98%，表明HPLC法簡單、準確、分離度高、靈敏度佳，可作為一種有效測定黃酮類成分含量的方法。

4 生物堿類成分含量測定

生物堿是中草藥有效成分之一，具有顯著的生物活性和光學活性。生物堿呈環狀結構，可與酸形成鹽，因其存在形式不同（可分為成鹽型與游離型），堿性強弱也有一定差異。應用HPLC法可精準測定生物堿成分含量，經相關研究證實[7]，采用HPLC法測定元胡藥材中5種生物堿（紫堇堿、四氫小柴堿、延胡索乙素、原阿片堿、脫氫海罌粟堿）含量準確，RSD（n=7）均在 1.6%～2.8%以內，精密度及穩定性良好，平均回收率在95.10%～97.20%之間，測定結果可靠、操作方法簡便可行，重現性與分離度較好，可作為元胡類藥材的質量控制。

5 醌類成分含量測定

醌類化合物廣泛分布于植物中，如蓼科的大黃、虎杖、何首烏，豆科的決明子、番瀉葉，百合科的蘆薈等，具有致瀉、抗菌、止血等多種功效，菲醌、蒽醌及萘醌類單體成分在可見光、紫外光下均有較強吸收作用，采用HPLC測定具有準確、快速、靈敏、高效等特點，中藥成分研究應用廣泛。葛素囡等在紫草及其毛狀根萘醌類化合物測定中采用HPLC-ESI-MS/MS法的結果表明[8]，該方法可作為中藥活性成分測定的有效有段。霍金海等[9]對不同時期北青龍衣中38種萘醌類化合物成分進行測定后發現，采用HPLC法能夠準確監測出北青龍衣萘醌類化合物隨采收時間變化其含量呈逐漸下降趨勢，以0.1%甲酸乙腈-甲酸水體系所得的色譜峰形良好，色譜峰穩定且信息較多，分離效果佳，專屬性強，可有效縮短分析時間，適宜醌類成分含量測定。

6 木脂素類成分含量測定

木脂素類多分布于裸子植物與被子植物中，生物活性多種，是由二分子苯丙素衍生物聚合形成的化合物，對多種木脂素類有效成分含量均可采用HPLC法測定，如厚樸酚、連翹苷、牛蒡子苷、五味子素類等，汪麗君等[10]研究者應用HPLC法已成功測定五味子中8個木脂素類有效成分（五味子醇乙、五味子醇甲、五味子酯甲、戈米辛 G、戈米辛 J、五味子乙素、五味子甲素、和五味子丙素），各成分均顯示出良好的線性關系，平均加樣回收率（n=9）在98.9%～102.6%之間，不同時間峰面積RSD在1.5%～2.6%之間，試品溶液24 h內穩定，在不同試驗條件下其重現性均較好，木脂素類含量采用HPLC法測定簡單可行，對制劑質量控制參考價值較高。

7 香豆素類成分含量測定

香豆素類主要由酪氨酸衍生而來，屬于天然藥物生理活性成分，為測定蛇床子中香豆素類成分含量，李義敏等[11]采用高效液相色譜儀對蛇床子3種香豆素成分（歐芹屬素乙、蛇床子素、佛手柑內酯）含量進行測定，HPLC法進行純度檢測質量分數為98%以上，其質量濃度分別為 0.005 1～0.102 6 mg/mL、0.051 3～1.025 mg/mL、0.005 7～0.114 8 mg/mL，其與峰面積線性關系良好，加樣回收率102.85%、101.39%、97.12%，穩定性試驗中測得RSD分別為1.55%、1.50%、1.04%，表明其在24 h內具有良好穩定性，重復性試驗測得RSD為0.41%、1.31%、1.27%，說明重復性良好，采用HPLC法測定香豆素類含量穩定、準確，可為評價不同產地蛇床子質量提供依據。

8 有機酸類成分含量測定

有機酸指的是具有酸性的有機化合物，在中草藥根、葉以及果實中分布廣泛，如覆盆子、五味子等，一般與鈉、鉀、鈣、生物堿類等結合成鹽，也可以游離狀態存在，已有試驗采用HPLC法成功測定有機酸含量，任曉蕾等[12]采用HPLC法測定了短瓣金蓮花藜蘆酸的含量，短瓣金蓮花富含有機酸和黃酮化合物，且與其生物活性有一定相關性，通過采用2010型高效液相色譜儀，將冰醋酸、乙腈作為色譜純，使被測物質鋒行對稱，藜蘆酸平均回收率為100.72%，RSD為0.93%，平均含量1.089 mg/g，明確乙腈-1%冰醋酸溶液等度洗脫可使藜蘆酸成分獲得良好的分離效果，響應值高且峰型好，基線平穩，可作為短瓣金蓮花質量控制指標之一。

綜上所述，HPLC法以其高速、高效、高分辨率等技術優勢在中藥成分含量測定中的作用日益顯現，已逐漸成為中藥檢驗的重要分析手段。該研究相信，隨著HPLC技術不斷更新與改進，必將推動中藥檢驗研究邁向一個嶄新階段。

[1]楊勇,顧中怡,徐春春,等.高效液相色譜法測定氟啶蟲胺腈制劑中有效成分含量[J].農藥,2015,54(7):512-515.

[2]高廣慧,田金苗,趙飛,等.固相萃取-高效液相色譜法測定中藥制劑及保健食品中芍藥苷[J].理化檢驗-化學分冊,2015,51(2):228-230.

[3]蘇曉楠,季德,周亞萍,等.HPLC-DAD-ELSD同時測定知母中黃酮和皂苷類成分的含量[J].中國中藥雜志,2015,40(1):108-111.

[4]陳華,于波濤,范開華,等.辛蒼顆粒中藥材的定性鑒別和黃芩苷的含量測定[J].西部醫學,2016,28(6):855-858.

[5]劉會,黃繩武,郭瑩,等.HPLC法測定不同廠家銀杏葉提取物中黃酮醇苷和萜類內酯含量[J].中華中醫藥雜志,2015,30(2):598-601.

[6]馮秀麗,王歡,祝晨蔯,等.HPLC法同時測定猴耳環藥材中3種黃酮類成分的含量[J].中藥新藥與臨床藥理,2015,26(5):668-671.

[7]徐皓.HPLC法測定不同產地元胡藥材中5種生物堿含量[J].藥物分析雜志,2015,132(8):1403-1407.

[8]葛素囡,王芳,周歌,等.新疆紫草及其毛狀根中萘醌類化合物的研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2015,26(5):675-681.

[9]霍金海,孫國東,董文婷,等.基于UPLC-Q-TOF-MS技術的北青龍衣有效成分動態變化分析[J].中國中藥雜志,2016,41(18):3379-3388.

[10]汪麗君,劉淑敏,毛春芹,等.一測多評法同時測定五味子中8個木脂素類成分的含量[J].藥物分析雜志,2015,132(7):1191-1197.

[11]李義敏,張巧艷,秦路平,等.HPLC法測定蛇床子中3種香豆素類成分的含量[J].中藥材,2015,38(7):1441-1443.

[12]任曉蕾,霍金海,魏文峰,等.HPLC同時測定短瓣金蓮花中4種成分含量[J].中藥材,2015,38(6):1220-1222.

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1672-5654（2017）08（a）-0046-02

2017-05-08）

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.22.046

裴勇（1971-），男，河南鄭州人，本科，主管中藥師，研究方向：中藥制劑提取。