麻黃—附子藥對提取物中麻黃類生物堿的溶解性能考察

王艷宏 劉書博 關楓 陳大忠

摘要：目的 測定麻黃-附子藥對提取物中麻黃類生物堿平衡溶解度和表觀油水分配系數，為經皮給藥研究提供依據。方法 采用70%乙醇提取、D101大孔吸附樹脂純化方法，制備麻黃-附子藥對提取物。采用沉淀法聯合HPLC，測定麻黃-附子藥對提取物中主要有效成分麻黃堿和偽麻黃堿在各類溶劑中的平衡溶解度。采用搖瓶法，測定麻黃-附子藥對中麻黃堿和偽麻黃堿在正辛醇-水中的表觀油水分配系數。結果 提取物在甲醇和乙腈中的溶解度較大，麻黃堿和偽麻黃堿在pH 7.4磷酸鹽緩沖液中的溶解度最大。麻黃堿、偽麻黃堿在正辛醇-水中的表觀油水分配系數分別為0.101（lgP=-0.99）、0.076（lgP=-1.12）。提取物中麻黃生物堿類成分的油水分配系數受pH值影響較大。結論 提取物在極性大的溶劑中溶解性較好，適宜的pH值可在一定范圍內改善其有效成分的水溶性和脂溶性，從而有利于透皮吸收。

關鍵詞：麻黃-附子藥對；麻黃類生物堿；平衡溶解度；表觀油水分配系數；高效液相色譜法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.01.022

中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2017）01-0091-04

Investigation of Dissolvability of Ephedra Alkaloid in Compatibility Ephedrae Herba- Aconiti Lateralis Radix Praeparata WANG Yan-hong， LIU Shu-bo， GUAN Feng， CHEN Da-zhong （Heilongjiang University of Chinese Medicine， Harbin 150040， China）

Abstract： Objective To determine equilibrium solubility and apparent oil/water partition coefficient of ephedra alkaloid in the compatibility Ephedrae Herba-Aconiti Lateralis Radix Praeparata； To provide a basis for transdermal delivery. Methods The extract was prepared by 70% ethyl alcohol and D101 macroporous absorbent resins. Dissolvability of its main effective components （ephedrine and pseudoephedrine） in the compatibility Ephedrae Herba-Aconiti Lateralis Radix Praeparata was determined by precipitation method and HPLC method； the oil/water partition coefficient of ephedrine and pseudoephedrine in n-octanol-water buffer solution system were determined by shaking flask method. Results The extract had optimum solubility in methyl alcohol and acetonitrile， and ephedrine and pseudoephedrine had optimum solubility in buffered solution of pH 7.4. Oil/water partition coefficient of ephedrine and pseudoephedrine in n-octanol-water system was 0.101 with lgP=-0.99 and 0.076 with lgP=-1.12. Oil-water partition coefficients of ephedrine and pseudoephedrine in the extract were affected by pH. Conclusion The extract has optimum solubility in high polar solvents. Ephedrine and pseudoephedrine have certain fatsoluble and water-soluble in suitable pH， which was beneficial for transdermal absorption.

Key words： compatibility Ephedrae Herba-Aconiti Lateralis Radix Praeparata； ephedra alkaloid； equilibrium solubility； apparent oil/water partition coefficient； HPLC

麻黃-附子為臨床常用藥對，在《傷寒論》的麻黃附子湯、麻黃附子細辛湯、麻黃附子甘草湯、烏頭湯等方劑中均有應用。麻黃辛溫，具有發汗解表、宣肺平喘、利水消腫功效；附子辛熱，具有回陽救逆、

基金項目：國家自然科學基金（81473359）；黑龍江省科技廳青年基金項目（QC07C107）；黑龍江省自然科學基金（H201472）；黑龍江省教育廳科學技術研究項目（11531357）

通訊作者：陳大忠，E-mail：799378826@qq.com

補火助陽、散寒止痛功效。兩藥配伍能夠取長補短、相輔相成。近年來有關麻黃-附子藥對的研究多集中在口服煎煮給藥方式，經皮應用的報道較少[1-2]。經皮制劑以其安全性高、不良反應小、避免藥物首過效應的特點，逐漸成為常用藥物應用形式。藥物的理化性質是影響經皮吸收的關鍵因素。本試驗以麻黃生物堿類成分為考察指標，測定其平衡溶解度和表觀油水分配系數，以期明確其理化性質，為藥對中有效成分的膜透過性的預測及中藥復方經皮給藥提供依據。

1 儀器與試藥

AB265-S電子天平，梅特勒公司；HZS-HA水浴振蕩器，哈爾濱市東聯電子技術開發有限公司；LC-20AT型高效液相色譜儀，日本島津公司。

麻黃、黃附子均購自哈藥集團世一堂中藥飲片有限責任公司，經黑龍江中醫藥大學中藥鑒定教研室孫慧峰副教授鑒定，分別為麻黃科植物草麻黃Ephedra sinica Stapf的干燥草質莖和毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaelii Debx.的母根炮制加工品；乙腈（色譜純），美國迪馬公司；鹽酸麻黃堿對照品（批號171241-201508）、偽麻黃堿對照品（批號171237-201208），中國食品藥品檢定研究院；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 麻黃-附子藥對提取物的制備

取麻黃、黃附子，按2∶3比例混合，加入pH 2的70%乙醇提取溶劑，回流提取2次（2、1.5 h）。減壓回收乙醇后，加水配成濃度為0.4 g/mL的上樣液，通過D101大孔樹脂，水洗除雜質后，收集70%乙醇洗脫液，揮干乙醇，真空干燥，得麻黃附子干浸膏提取物（以麻黃堿計14 mg/g、偽麻黃堿計6 mg/g）[2]。

2.2 麻黃生物堿類成分含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Diamonsil C18（5 ?m，250 mm×4.6 mm），流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（2∶98，每100 mL中加入0.04 mL三乙胺），檢測波長為190 nm，流速為1 mL/min，柱溫為30 ℃。

2.2.2 混合對照品溶液的配制 分別精密稱取鹽酸麻黃堿、偽麻黃堿對照品25.14、12.52 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得混合對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的配制 稱取提取物0.2 g左右，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.2.4 標準曲線的繪制 精密吸取一定量上述麻黃堿和偽麻黃堿對照品溶液，按倍數關系稀釋成8種不同質量濃度的溶液，分別吸取10 ?L進樣測定，記錄色譜峰峰面積。以對照品質量濃度為橫坐標，相應峰面積積分值為縱坐標，進行回歸處理，得回歸方程Y=76 152X+1E+06，r=0.999 4和Y=87 629X+129 116，r=0.999 6。結果表明，麻黃堿在0.02～10.06 ?g范圍內線性關系良好，偽麻黃堿在0.01～5.01 ?g范圍內線性關系良好。

2.2.5 精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液，連續進樣6次，進樣量10 ?L，按“2.2.1”項下色譜條件測定，計算峰面積，結果鹽酸麻黃堿峰面積RSD=0.45%（n=6）；鹽酸偽麻黃堿峰面積RSD=0.88%（n=6）。表明精密度良好，符合含量測定基本要求。

2.2.6 穩定性試驗 取供試品溶液，于0、6、12、18、24 h精密吸取10 ?L注入高效液相色譜儀，按“2.2.1”項下色譜條件測定，計算峰面積，麻黃堿峰面積RSD=1.58%（n=5），偽麻黃堿峰面積RSD=1.96%（n=5）。表明供試品溶液在24 h內基本穩定。

2.3 平衡溶解度試驗

2.3.1 沉淀法 稱取提取物0.2 g左右，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入不同溶劑（水、甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、正辛醇）及不同pH值（2.25、4.99、6.8、7.4、8.98）緩沖液各5 mL，放入恒溫水浴振蕩器中，溫度保持在37 ℃，振搖24 h，使其達到充分溶解。將藥液連同殘留的固體藥物一同轉移至已經恒定質量的離心管中，12 000 r/min離心10 min，傾出上清液，殘渣和離心管在70 ℃真空干燥箱中烘干并稱定質量，計算提取物在不同溶劑中的溶解度[3]。溶解度=（m加入量-m未溶解量）÷溶劑體積。結果測得平衡溶解度分別為31.8、35.78、25.94、0.42、33.14、11.3、10.4、7.44、40.16、36.66、34.94、31.3、21.88 mg/mL，說明不同溶劑中提取物的溶解度依次為甲醇>乙腈>水>乙醇>三氯甲烷>正辛醇>丙酮>乙酸乙酯。不同pH值磷酸緩沖液中的平衡溶解度見圖1 。

2.3.2 指標成分法 分別精密吸取上述離心后的各溶液上清液3 mL置5 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度。經0.45 ?m濾膜過濾，取續濾液10 ?L，采用HPLC測定溶液中麻黃堿和偽麻黃堿（色譜圖見圖2），并計算指標藥效成分的溶解量。結果表明，37 ℃條件下，麻黃堿在水中的平衡溶解度為275.19 ?g/mL，偽麻黃堿在水中的平衡溶解度為132.31 ?g/mL，在有機溶劑中的平衡溶解度見表1，在磷酸緩沖體系中的平衡溶解度見圖3。由結果可知，37 ℃時麻黃堿和偽麻黃堿在甲醇中的溶解度最大，在乙醇中的溶解度相對較大，在三氯甲烷中的溶解度最小。指標成分麻黃堿類在磷酸鹽緩沖液中的溶解度均隨pH值的增大呈現先緩慢減小后增大然后再減小的變化趨勢。麻黃堿和偽麻黃堿在pH 7.4磷酸鹽緩沖液中的溶解度最大，分別為344.27 ?g/mL和162.22 ?g/mL。

2.4 表觀油水分配系數的測定

選擇正辛醇為油相，pH值分別為2.25、4.99、6.8、7.4、8.98的磷酸鹽緩沖液及蒸餾水為水相。取提取物0.2 g左右，精密稱定后置5 mL量瓶中，加入被正辛醇飽和的水和系列pH值的磷酸鹽緩沖液，超聲30 min，12 000 r /min離心10 min，取上清液2 mL，用甲醇稀釋至5 mL，取上清液過0.45 ?m濾膜，取20 ?L，經HPLC測定其中指標成分的濃度（C0）。再取上清液2 mL置具塞錐形瓶中，分別加入2 mL被水飽和過的正辛醇溶液，加塞，置于37 ℃恒溫水浴振蕩器中，振蕩24 h，靜止后取上層油相2 mL，用甲醇稀釋至5 mL，混勻，過0.45 ?m 濾膜，取20 ?L，經HPLC測定其中指標成分的濃度（C1）。按公式計算表觀油水分配系數（P）：P=C1/（C0-C1）[3]。結果表明，37 ℃時麻黃堿、偽麻黃堿的正辛醇/水分配系數分別為0.101（lgP=-0.99）、0.076（lgP=-1.12）。麻黃堿和偽麻黃堿的lgP值受pH值影響較大，在pH 6.8時lgP值達到最大，pH 7.4時為最低。之后隨pH值的增加lgP值有所降低。結果見圖4。

3 討論

油水分配系數是影響藥物胃腸吸收和經皮吸收的重要因素。文獻報道，藥物吸收的最佳范圍是-1

麻黃堿和偽麻黃堿的lgP值受pH值影響較大：在pH 6.8時lgP值達到最大，分別為1.336、0.923；pH 7.4時lgP值最低，分別為0.884、0.01。說明藥物所處的酸堿環境能夠影響生物膜透過性，可以考慮通過調整pH值來改變膜透過性，增加透皮吸收。對提取物中主要有效成分研究結果也表明，溶解度的變化趨勢受到pH值影響，故在提取制劑工藝和控制指標成分供藥體系時應注意選擇合適的pH值，以提高有效成分的溶解效果。

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（收稿日期：2016-06-02；編輯：陳靜）