卵黃抗體在豬病防治上的應用

李天芝，于新友，張 穎，沈志強，

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫研究院，山東 濱州 256600）

卵黃抗體在豬病防治上的應用

李天芝1，于新友1，張 穎2，沈志強1，2

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫研究院，山東 濱州 256600）

卵黃抗體是禽類經特異性抗原刺激由B淋巴細胞產生并移行至卵黃中的特異性抗體。卵黃抗體具有制作簡單方便、性質穩定、產量高、成本低等多種優點，在動物的疾病診斷、治療、預防等方面有著廣泛的應用。文章就卵黃抗體在豬病防治中的應用情況進行綜述。

卵黃抗體；豬??；防治；應用

卵黃抗體（IgY）又稱卵黃免疫球蛋白，是禽類經特異性抗原刺激由B淋巴細胞產生并移行至卵黃中的特異性抗體[1]。1893年，Klemperer首次報道了雞卵黃中富含抗體，1969年，Leslie和Clem將這種抗體命名為IgY，此后，各國學者就卵黃抗體不斷進行深入研究，卵黃中IgY的濃度很高，而其它免疫球蛋白在卵黃里的含量很少，可以忽略不計。IgY具有強大的免疫功能，并具有穩定性強、耐酸性、耐高溫、特異性強、制備簡單、成本低、適宜規模化生產等優點。目前卵黃抗體已被廣泛應用于畜禽疾病的防治中，符合目前我國大陸地區的畜禽養殖條件與實際狀況，具有非常廣闊的應用前景。本文綜述了IgY的特性及在豬病防治中的應用研究情況。

1 卵黃抗體的結構特點

IgY分子量為180 kD，其結構與免疫球蛋白E（IgE）類似，同樣由兩條重鏈（H鏈）與兩條輕鏈（L鏈）組成，重鏈由1個可變區（V）與4個恒定區（Cυ1～Cυ4）組成，分子量為67～70 kD，輕鏈分子量為22～30 kD。IgY與免疫球蛋白G（IgG）相比沒有鉸鏈結構，結構更為穩定，與IgG相比IgY疏水性更強，這與IgY存在于脂類含量較高卵黃內的環境中是相對應的。IgY等電點在pH 5.7～7.6之間。

2 卵黃抗體的優勢

2.1 產量高、成本低、便于規模化生產

卵黃抗體是從雞蛋中提取的，一枚蛋可獲得50～100 mg IgY，其中2%～10%為特異性抗體，平均1只雞每年可得到22 500 mg抗體，產量比較高。1只蛋雞每周的抗體產量相當于9～10只兔子的抗體產量。而且飼養母雞也比較方便，其所產的蛋具有均一性好、收集方便快捷，以及價格便宜等優點[2]。卵黃中沒有其它的免疫球蛋白，純度相對較高，提取抗體的技術已經成熟，可以進行大規模生產、提純方便，并在制備卵黃抗體時，不需要采集動物血液，不會對動物造成任何損傷，符合動物保護原則的要求。

2.2 理化性質穩定

穩定性好、耐酸堿，4℃條件下，甚至可保存5～10年，其抗體活性無顯著損失，在室溫條件下，可保持抗體活性半年不變，37℃條件下，也可保持活性1個月。65℃時可以保持24 h以上，在70℃時，當加熱90 min后，卵黃抗體的活性才會發生明顯下降。在pH 4～11時IgY能保持穩定，活性幾乎不變[3]，低于pH 3.0時活性迅速下降。IgY耐高滲、耐高壓，60%濃度的蔗糖溶液中仍有活性，4 000 kg/cm2高壓下，仍可保持活性。IgY還有耐反復凍融的特性。卵黃抗體對胃蛋白酶抵抗力較強，能抵抗幼齡動物腸道中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的消化。這些特性使IgY的生產、加工、貯存、攝取及消化過程中維持其結構的穩定和發揮生物學作用具有重要意義。

2.3 治療效果好，無副作用

用卵黃抗體治療畜禽疾病時起作用快，效果好，對病原的特異性強，病原不會產生耐藥性，不會產生繼發感染的現象[4]。有可能替代抗生素用于畜禽疾病的治療，安全可靠，無毒副作用和不良反應，當IgY與病原發生作用后，殘留部分會被機體視為營養物質分解掉。IgY作為一種優質蛋白源，對畜禽還有一定的促生長作用。

3 卵黃抗體的作用機理

IgY抗菌的機理主要是IgY能黏附于細菌的細胞壁，破壞細菌的完整性，從而抑制細菌的生長繁殖，也可以直接黏附于菌毛上和鞭毛上，使其不能黏附于腸上皮細胞，阻礙細菌擴散、運動[5]。IgY還能與細菌毒素發生中和反應，減輕細菌毒素對動物機體的損傷。IgY抗病毒的機理主要是IgY與病毒顆粒表面多個受體結合時會破壞病毒的結構，影響病毒膜與細胞表面的融合，抑制病毒核酸在細胞內的復制。IgY也可以黏附于病毒衣殼上，抑制病毒的生長繁殖。此外，部分IgY在腸道消化酶作用下，降解為容易被腸道吸收的可變小肽，這些小肽都含有抗體末端，易被腸道吸收，進入血液后能與特定的病原黏附因子結合，使病原失去致病性，保護易感細胞免受病原的黏附和破壞。

4 卵黃抗體在豬病防治上的應用

4.1 卵黃抗體在防治豬病毒病上的應用

4.1.1 卵黃抗體在防治豬流行性腹瀉上的應用 豬流行性腹瀉臨床表現為豬嘔吐、脫水和水樣腹瀉，是一種高度接觸性腸道傳染病。各日齡的豬均可感染豬流行性腹瀉病毒（PEDV）發病，其中哺乳仔豬受到的危害最嚴重[6]。Kweon等[7]用致弱的豬流行性腹瀉病毒免疫產蛋雞，提純卵黃抗體，進行動物感染試驗。待仔豬感染豬流行性腹瀉病毒出現腹瀉癥狀后，日服卵黃抗體，觀察14 d，試驗組仔豬治愈率達73.7%，對照組僅為41.2%。宋維平等[8]將豬流行性腹瀉病毒免疫產蛋雞，收集高效價卵黃，經提純制備抗體，對仔豬攻毒。待仔豬剛出現腹瀉癥狀時，對治療組飼喂卵黃抗體液，腹瀉癥狀明顯減輕，5 d后多數仔豬恢復，治愈率達83.3%。而對照組呈水樣腹瀉，全部脫水死亡，死亡率達到100%，兩者差異極顯著。李冰等[9]用PEDV SC株免疫產蛋雞，收集高免卵黃，采用水稀釋法和水稀釋-鹽析法獲得雞源抗PEDV卵黃抗體，采用已建立的ELISA方法對卵黃抗體效價進行測定。以3日齡無母源抗體的易感仔豬為試驗動物，對抗PEDV卵黃抗體的治療效果及安全性進行測定，并進一步利用自然發病豬場的治療效果進行驗證。結果表明，經PEDV SC株細胞毒免疫的雞可在2次加強免疫后15 d產生高水平的特異性抗體。在實驗室治療試驗中，攻毒治療組仔豬的存活率達60%，攻毒對照組存活率為20%，用于自然發病豬場時，飼喂抗PEDV卵黃抗體飼料的仔豬存活率亦為60%，而自然發病對照組的存活率為10%。潘孝成等[10]用豬PEDV SD株免疫產蛋雞，收集卵黃制備出特異性PEDV抗體。人工感染后治療結果顯示，1次抗體治療組可減少死亡率50.0%，2次抗體治療組可減少死亡率83.3%，3家自然發病豬場的臨床應用表明，相較于對照組，抗體治療組可減少仔豬死亡率分別為67.7個百分點、57.0個百分點和77.5個百分點。崔煥忠等[11]以豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉二聯滅活苗免疫產蛋雞，瓊脂擴散方法檢測抗體效價達到1∶64時，收集卵黃，采用氯仿抽提和硫酸銨鹽析法純化卵黃抗體，進行微生物學檢測、安全性試驗，通過人工感染治療試驗和臨床應用，觀察其治療效果。結果人工感染治愈率為100%，臨床應用治愈率為88.0%。

4.1.2 卵黃抗體在防治豬瘟上的應用 豬瘟是豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，在世界范圍內廣泛流行，其發病率和死亡率均高，對養豬業危害十分嚴重[12]。李建鑫[13]通過對病豬注射豬瘟高免卵黃抗體可明顯遏制患豬病情惡化，注射豬瘟高免卵黃抗體后3 d，試驗豬抗體水平明顯提高，連續觀察15 d，受試豬精神狀態良好，未見不適癥狀或死亡，保護率達100%。

4.1.3 卵黃抗體在防治豬圓環病毒病上的應用 豬圓環病毒病臨床可表現為仔豬斷奶后多系統衰竭綜合征、豬呼吸道病綜合征、豬皮炎與腎炎綜合征等，是豬的免疫抑制性疾病。索江華等[14]自制豬圓環病毒2型滅活苗，免疫無特定病原體（SPF）產蛋雞，收集高免蛋，制備豬圓環病毒2型高免卵黃抗體，對高免卵黃抗體進行無菌檢驗、活體動物安全性檢測，用瓊脂擴散方法進行效價檢驗和人工感染保育豬治療試驗，并將其應用于臨床實踐，觀察其治療效果。結果抗體效價達到1∶64，人工感染治療試驗治愈率達100%，臨床試驗治愈率為96%，應用效果良好。高嶺等[15]用豬圓環病毒2型滅活疫苗免疫健康雞群，收集高免蛋，用水稀釋法和飽和硫酸銨鹽法提純卵黃抗體，酶聯免疫吸附試驗（ELISA）抗體檢測試劑盒檢測血清抗體和卵黃抗體效價。結果顯示，卵黃抗體的產生滯后于血清抗體，且卵黃抗體效價變化幅度小于血清抗體，卵黃抗體穩定性好，血清抗體最高效價可達5 000，提純的抗體濃度最高為9 200 μg/mL。

4.1.4 卵黃抗體在防治豬藍耳病上的應用 豬藍耳病臨床表現主要為母豬繁殖障礙、仔豬呼吸道病癥狀等，具有高度接觸傳染性，既能垂直傳播又能水平傳播。高睿等[16]采用高致病性豬藍耳病滅活疫苗免疫產蛋雞，收集高免蛋，通過水稀釋提取法制備豬藍耳?。≒RRS）高免卵黃抗體，對其進行無菌檢驗、安全性檢測、效力檢驗及動物保護性試驗，并將其應用于臨床實踐，觀察其治療效果。結果發現，該方法制備的PRRS高免卵黃抗體瓊脂擴散效價達到1∶32，保護率達100%，臨床試驗治愈率為84.5%。崔煥忠等[17]以豬藍耳病滅活苗免疫產蛋雞，采用ELISA方法檢測卵黃抗體效價，收集高效價卵黃，采用氯仿抽提和硫酸銨鹽析法純化卵黃抗體。ELISA方法測定收集抗體效價為1∶8 000，測定純化的抗體濃度為7.85 mg/mL，微生物學檢驗及安全性試驗表明制備的卵黃抗體安全可靠，人工感染治愈率和臨床應用治愈率分別為100%和89.1%。

4.1.5 卵黃抗體在防治非洲豬瘟上的應用 高又文等[18]為研究非洲豬瘟病毒p54抗原蛋白及其相應卵黃抗體的生物學特性，制備p54蛋白及相應雞卵黃抗體?？扇苄员磉_制備高純度p54抗原蛋白，并制定合理的免疫程序，免疫產蛋母雞，定時采血并收集雞蛋。卵黃液經粗提取后二次鹽析，制備特異性卵黃抗體。ELISA結果顯示，在首次免疫7 d后的血清中即可檢測出相應抗體，14 d后在卵黃中提取到相應抗體，35 d后IgY效價達到峰值。經SDS-PAGE檢測，制備所得純度達到90%，得率在8.8 g/L以上。Western-blot檢測結果顯示，純化的IgY具有高度特異性。

4.2 卵黃抗體在防治豬細菌病上的應用

4.2.1 卵黃抗體在防治豬大腸桿菌病上的應用 豬大腸桿菌病是由病原性大腸桿菌引起的仔豬一類腸道傳染性疾病。常見的有仔豬黃痢、仔豬白痢和仔豬水腫病3種，以發生腸炎、腸毒血癥為特征。Yokoyama等[19]將提純的產腸毒素性大腸桿菌（ETEC）的K88、K99、987P制成單價菌毛蛋白苗，免疫蛋雞獲得卵黃抗體粉末，ELISA檢測結果表明，抗K88、K99、987P的卵黃抗體能夠特異性地與相應的菌毛抗原作用。用卵黃抗體對不同ETEC菌株攻毒的新生仔豬進行口服治療，治療組仔豬全部存活，而對照組仔豬死亡率超過80%。高云英等[20]用ETEC的K88、K99、987P標準菌株和地方分離菌株制成多價菌體卵黃抗體經預防、攻毒試驗及臨床治療效果觀察，對新生仔豬免疫保護率可達90%以上，3日齡仔豬攻毒保護率達98%以上，3～11日齡仔豬臨床治愈率達95%以上。李心海等[21]用豬大腸桿菌滅活疫苗免疫產蛋母雞，收集高免卵黃，制備雞抗豬大腸桿菌特異性高免卵黃抗體，并進行動物試驗，結果表明該制劑安全性好，當口服劑量達到4 mL時，試驗組仔豬保護率可達100%，而未經口服免疫的仔豬發病率達30.8%～37.5%。趙姝靜等[22]為了研究用不耐熱腸毒素B亞基（LTB）和耐熱腸毒素（STa）的融合蛋白制備雞卵黃抗體的方法及其中和作用，試驗將LTB和STa的編碼基因串聯并在大腸桿菌中表達獲得了重組蛋白，以重組蛋白為免疫原免疫8月齡海蘭蛋雞制備了卵黃抗體，分別用兔腸段結扎試驗和乳鼠灌胃試驗進行了卵黃抗體對不耐熱腸毒素（LT）和STa的體內中和試驗。結果表明：用LTB和STa融合蛋白免疫產蛋雞可誘導產生抗LTB和STa的卵黃抗體，其中抗LTB效價最高可達1∶8 647，抗STa效價最高可達1∶768，卵黃抗體對LT和STa均有中和作用。說明用融合蛋白作為免疫原制備的卵黃抗體具有抗LT和STa的生物學活性，對仔豬大腸桿菌性腹瀉的臨床治療有潛在的應用價值。

4.2.2 卵黃抗體在防治豬鏈球菌病上的應用 豬鏈球菌病是豬的常發病，各年齡段豬均可感染發病，斷奶仔豬所受危害最嚴重，臨床表現為豬腦膜炎、關節炎、心內膜炎、敗血癥、肺炎和突然死亡。靖寧等[23]先用豬鏈球菌活疫苗（ST171）免疫蛋雞，10 d后，用豬鏈球菌活疫苗（ST171）和豬鏈球菌2型滅活疫苗進行第2次免疫，10 d后，再用豬鏈球菌2型滅活疫苗加強免疫1次，15 d后，收集雞蛋，抽檢卵黃，抗體效價達1∶1 024，制備了豬鏈球菌高免卵黃液。小鼠與豬免疫試驗表明安全性良好。對病豬注射豬鏈球菌高免卵黃液，可明顯遏止病情惡化，注射后3 d，試驗豬抗體水平明顯提高，連續觀察15 d，受試豬精神狀態良好，未見不適癥狀或死亡，預防保護率達100%。

5 小結與展望

卵黃抗體在防治動物疾病方面有很多優點，如價廉、速效、生產工藝簡便、無污染、無抗藥性、無殘留、安全等。將來在防治某些畜禽疾病方面很可能替代抗生素和化學合成藥物，同時還具有促生長作用[24]。在畜禽疾病防治方面有著廣闊的應用前景。但在卵黃抗體的開發和臨床應用方面也存在一些問題，首先，卵黃抗體是高蛋白物質、營養豐富、生產制備過程中很容易受到細菌的污染。其次，卵黃抗體對疾病初期、臨床表現輕微時治療效果較好，當病情發展到一定程度時，效果不佳。再次，半衰期短，不能持久發揮作用，一般用于疾病的預防和緊急治療，今后需要開發成一些長效制劑，以達到最佳效果。最后，卵黃抗體還含有大量磷蛋白和脂肪，注入肌肉難以吸收而造成局部腫脹、壞死和過敏反應。目前禽類卵黃抗體研究較為成熟和完善，有著成熟的生產工藝，而對豬的卵黃抗體研究相對較少，大部分處于試驗室階段，希望可以借助禽卵黃抗體的豐富經驗加快豬用卵黃抗體的研發進度，在抗原制備（敏感性、免疫方法、高免蛋的生產抗體滴度）、抗體提取與純化（精制、包被）及使用方法（注射、口服）、技術標準化等方面取得一定的發展。今后卵黃抗體在豬病防治方面必將發揮更大的作用。

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（編輯：郭玉翠）

抗生素耐藥性年致死或千萬人

【英國《每日快報》網站3月19日報道】美國哈佛大學的一個研究小組制作了一段駭人的視頻，清晰展示了僅僅30年后抗生素耐藥性就可能每年造成1 000萬人死亡。

抗生素耐藥性一直是令醫療專家恐懼的問題，他們急于找到某種方法應對這個致命的問題。

哈佛大學醫學院制作的一段視頻展示了這個世界末日現象的駭人規模，即到2050年每年可能有1 000萬人死于抗生素耐藥性。

據《抗菌素耐藥性評估》報告說，估計目前歐洲和美國每年有大約5萬人死于無法醫治的感染。僅在英國，每年就至少有1.2萬人死于對抗生素有耐藥性的超級細菌感染，這個數字超過死于乳腺癌的人數。

哈佛大學的視頻首次讓我們一窺大規模的致命細菌如何適應高劑量抗生素并幸存下來。

研究小組研究了大腸桿菌如何在培養皿中適應逐步提高劑量的抗生素。經過了兩個星期的觀察，科學家發現一小群細菌對越來越高劑量的抗生素變得具有耐藥性。這些耐藥細菌隨后產生了更多的耐藥菌株。

研究報告作者之一羅伊·基肖尼說：“這有力地展示了細菌對抗生素產生耐藥性有多么容易?！?/p>

如果抗生素耐藥性這一發展趨勢不停止，那么到本世紀中期每年可能造成多達1 000萬人死亡。

僅僅30年后，抗生素耐藥性就可能變得比癌癥和心臟病更致命。

最近的英國國民保健制度（NHS）統計數字顯示，抗生素使用量不斷增加，而如此有害的藥物只應該用作最后的手段。

科學家用“徹底的瘋狂”來形容這一趨勢，并警告說這可能意味著作為“最后希望”的藥物，抗生素在10年后就可能變得對人類無效。

感染性疾病顧問邁克爾·魏因布倫博士說：“耐藥性意味著我們正被迫使用有嚴重副作用的藥物，對某些患者來說，你不再有別的選擇?！?/p>

去年，英格蘭首席醫療官員薩莉·戴維斯把日益嚴重的藥物耐藥性描述為一場“抗生素導致的大災難”，并把世界各地抗生素無效的嚴重程度與恐怖主義的嚴重性相提并論。

戴維斯在2016年的評論中說：“抗生素的黃金時代—在50多年里被全世界授權濫用—結束了，一種非?？赡艿那樾问?，近來的死亡率下降時代將被死亡率多年上升所取代。”

她提到，這可能意味著一個簡單的傷口就會證明是致命的，過去很容易治愈的感染（比如結核病和淋?。┮言俣瘸蔀閲乐氐慕】低{。

由于嚴重的抗生素耐藥性，就連那些接受器官移植的患者可能也不得不依靠自身免疫系統來防止身體對捐獻器官產生排異反應。

（轉自參考消息[N]，2017-03-22）

S828

A

1002-1957(2017)02-0109-04

2016-10-19

山東省現代農業產業技術體系生豬產業創新團隊項目（SDAIT-08-17）；山東省自然科學基金青年基金項目（ZR2014CQ010）；濱州市科技發展計劃項目（2013GG0304）

李天芝（1985-），女，山東菏澤人，助理研究員，碩士，主要從事動物傳染病診斷與防控研究工作.E-mail：517493935@qq.com