2016年245個規模豬場7種病毒類疾病病原流行病學調查與2017年防控建議

夏 偉，牟 迪，唐志芬，馬迪楊，張宇輝，朱慶虎，袁 遠，熊永忠

（哈爾濱維科生物技術開發公司，黑龍江 哈爾濱 150069）

豬病防制與保

2016年245個規模豬場7種病毒類疾病病原流行病學調查與2017年防控建議

夏 偉，牟 迪，唐志芬，馬迪楊，張宇輝，朱慶虎，袁 遠，熊永忠

（哈爾濱維科生物技術開發公司，黑龍江 哈爾濱 150069）

2016年1—12月份，哈獸維科技術服務部檢測實驗室共收到來自全國245個規模豬場的692份病料（肺臟、脾臟和淋巴結等組織）樣品和305份（糞便或腸道組織）樣品，采用PCR和RT-PCR方法對7種病毒類疾病病原如豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬瘟病毒（CSFV）、豬偽狂犬病病毒（PRV）、豬圓環病毒2型（PCV2）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、傳染性胃腸炎病毒（TGEV）和豬輪狀病毒（PoRV）等進行檢測。通過對檢測數據進行整理和統計分析得知，CSFV陽性檢出率（10/692）1.45%，PRRSV陽性檢出率（166/665）24.96%，PCV2陽性檢出率（210/585）35.90%，PRV陽性檢出率（100/593）16.86%，PEDV陽性檢出率（125/305）40.98%，TGEV陽性檢出率（9/295）3.05%，PoRV陽性檢出率（14/289）4.84%。其中 PRRSV、PCV2、PRV、PEDV、PoRV等5種病原檢出率高，仍是危害規模豬場的主要病原。CSFV、TGEV檢出率低，說明豬場控制的較好。第一、二季度保育豬慢性消瘦和呼吸道病嚴重病例PRRSV、PCV2檢出率高，保育豬均勻度差，死淘率高。第一季度和第四季度新生仔豬暴發腹瀉病例PEDV、PoRV檢出率高，造成哺乳仔豬成活率下降，損失慘重。總之，2017年我國規模豬場要把PRRSV、PCV2、PRV、PEDV、PoRV等5種常見病毒類疾病病原作為防控重點，但混合感染和新毒株出現是目前疫病防控的難點，建議豬場加強疫病監測制度，優化防疫方案和避免防疫誤區。

1 材料與方法

1.1 樣品來源及分布

由圖1可知，樣品來源于全國29個省市，樣品包括肺臟、脾臟和淋巴結等組織以及腸道內容物和糞便，通過調查了解豬場免疫背景和臨床發病情況以及剖檢典型發病豬取組織樣品，-20℃冷凍送檢。

圖1 樣品分布（圓圈代表樣品來源區域）

1.2 主要試劑和儀器

PCR和RT-PCR擴增試劑盒、飽和酚、TaqDNA聚合酶、dNTPs、EB、DEP水、TRIZOL（總RNA抽提試劑，主要成分苯酚等）、DL 2 000 Marker、TaKaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver 3.0均購自寶生物工程（大連）有限公司。生物安全柜、分析天平、高速離心機、迷你掌上離心機、渦旋振蕩器、PCR擴增儀、電泳儀、電泳槽、紫外凝膠成像儀、冰箱、微波爐、水浴鍋、高壓蒸汽滅菌鍋等。

1.3 引物設計與合成

根據 GenBank登陸的 PRRSV、CSFV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PoRV的基因序列，用Oligo 6.0軟件設計引物，由寶生物工程（大連）有限公司合成。引物序列見表1。

表1 用于PCR和RT-PCR反應的引物

1.4 樣品處理及核酸提取

按檢測需求分別對肺臟、脾臟、淋巴結樣品混合，對腸內容物和糞便混合用研磨器充分研磨，利用MEM營養液進行10倍稀釋，然后利用DNA和RNA提取試劑盒進行核酸抽提。

1.5 病毒核酸檢測

1.5.1 PRRSV、CSFV、PEDV、TGEV、PoRV的擴增分別用BIOZOL總RNA提取試劑盒（博日公司）從病毒培養液提取總RNA為模板，采用TaKaRa One Step RNA PCR Kit（AMV）試劑盒進行RT-PCR擴增，反應條件RT：50℃ 30 min，94℃ 2 min；PCR：（94℃30 s，58℃30 s，72℃1 min）×35個循環，72℃延伸7 min，PCR產物經1.2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。

1.5.2 PRV、PCV2的擴增 分別用天根生物科技有限公司DNA提取試劑盒，從病毒培養液提取DNA為模板，采用TaKaRa One Step DNA PCR Kit試劑盒進行PCR擴增，反應條件94℃2 min；（94℃30 s，55℃ 30 s，72℃ 1 min）×35個循環，72℃延伸10 min，PCR產物經1.2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。

2 結果與分析

（1）2016年對29個省245個規模豬場送檢692份肺臟、脾臟和淋巴結等組織樣品與305份腸道內容物，糞便等組織樣品，分別進行了PRRSV、CSFV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PoRV等7種病原的檢測。結果顯示，CSFV（10/692）陽性檢出率1.45%，PRRSV（166/665）陽性檢出率24.96%，PCV2（210/ 585）陽性檢出率35.90%，PRV（100/593）陽性檢出率16.86%，PEDV（125/305）陽性檢出率40.98%，TGEV（9/295）陽性檢出率3.05%，PoRV（14/289）陽性檢出率4.84%。7種常見感染豬的病原中PEDV、PCV2、PRRSV、PRV等4種病原檢出率明顯高于其他3種病原，其中CSFV檢出率最低（圖2）。

圖2 2016年全年各常見病毒檢出率統計

（2）2016年送檢樣品中CSFV在第一、二、三、四季度檢出率分別為0.87%、1.66%、0、2.78%，檢出率均較低。PRRSV在第一、二、三、四季度檢出率分別為28.57%、29.17%、9.16%、28.70%，檢出率較高，其中一、二、四季度檢出率高，三季度明顯下降。PRV在第一、二、三、四季度的檢出率分別為13.67%、12.80%、5.93%、28.36%，檢出率最高的季度為四季度，其次為一季度。PCV2在第一、二、三、四季度檢出率分別為34.82%、51.18%、28.23%、27.37%，檢出率最高為二季度，其次為一季度。4種病原PCV2檢出率顯著高于其他3種病原。檢出率的動態變化見圖3。

圖3 不同季度CSFV、PRRSV、PRV、PCV2 4種病毒檢出率動態變化

（3）2016年送檢腸道內容物和糞便中PEDV在第一、二、三、四季度的檢出率分別為46.07%、28.77%、35.71%、49.43%，檢出率均較高，尤其第一和四季度檢出率明顯高于第二季度。TGEV在第一、二、三、四季度的檢出率分別為4.88%、1.39%、7.14%、0，檢出率較低。PoRV在第一、二、三、四季度的檢出率分別為0、2.78%、15.79%、3.70%，檢出率略高于TGEV，明顯低于PEDV（圖4）。

圖4 PEDV、TGEV、PoRV 3種病毒檢出率動態變化

（4）對166份檢測到PRRSV陽性樣品統計PRRSV單獨感染和PRRSV與PCV2、PRV、PEDV等病原混合感染情況。其中PRRSV單一檢出率為33.73%，PRRSV與PCV2混合感染檢出率為42.77%，PRRSV與PRV混合感染為9.64%，PRRSV與PEDV混合感染檢出率5.42%，PRRSV與PCV2、PEDV 3種病原混合感染檢出率為1.20%，PRRSV與PRV、PEDV 3種病原混合感染檢出率為1.80%，PRRSV與PCV2、PRV、PEDV 4種病原混合感染檢出率為0.60%（圖5）。

圖5 2016年1—12月PRRSV與其他病毒混合感染變化

（5）對210份PCV2抗原陽性樣品統計PCV2與PRRSV、CSFV、PRV、PEDV等病原混合感染情況，PCV2單獨感染和PCV2與PRRSV、PRV、PEDV等混合感染情況。其中PCV2單一檢出率為41.43%，PCV2與PRRSV混合感染檢出率為29.52%，PCV2與PRV混合感染為16.19%，PCV2與PEDV混合感染檢出率3.81%，PCV2與PRRSV、PEDV 3種病原混合感染檢出率為2.38%，PCV2與PRV、PEDV 3種病原混合感染檢出率為2.38%，PCV2與PRRSV、PRV、PEDV 4種病原混合感染檢出率為0.48%（圖6）。

圖6 2016年1—12月PCV2與其他病毒混合感染變化

（6）比較2015與2016年7種病原檢出率的變化顯示，2015年CSFV檢出率20.59%，2016年1.45%呈明顯下降趨勢。PRRSV檢出率由2015年32.54%下降到2016年的24.96%。PCV2檢出率由2016年的39.35%下降至35.90%。PRV的檢出率由2015年的6.5%上升到2016年16.86%。PEDV檢出率由56.38%下降至40.98%。TGEV檢出率由2015年的7.04%下降到2016年的3.05%。PoRV檢出率由2015年0上升到2016年的4.84%（圖7）。

圖7 2015年與2016年7種病原陽性檢出率對比變化

3 討論

（1）2016年通過對245個規模豬場的692份肺臟、脾臟和淋巴結等組織樣品和305份糞便或腸道組織，采用PCR和RT-PCR方法對常見7種病毒類疾病病原檢測和數據統計分析得知，CSFV陽性檢出率（10/692）1.45%，PRRSV陽性檢出率（166/665）24.96%，PCV2陽性檢出率（210/585）35.90%，PRV陽性檢出率（100/593）16.86%，PEDV陽性檢出率（125/ 305）40.98%，TGEV陽性檢出率（9/295）3.05%，PoRV陽性檢出率（14/289）4.84%。其中PRRSV、PCV2、PRV、PEDV、PoRV等5種病原檢出率高，仍是危害規模豬場的主要病原。CSFV、TGEV等2種病原檢出率低，說明豬場控制的較好。

（2）第一、二季度對保育豬慢性消瘦和呼吸道病嚴重病例PRRSV、PCV2檢出率高，保育豬均勻度差，死淘率高；第一季度和第四季度對新生仔豬暴發腹瀉病例PEDV、PoRV檢出率高，造成哺乳仔豬成活率低，損失嚴重。可見冬季和春季兩個季節是因氣溫下降和晝夜溫差大等環境因素導致豬體抗病能力下降容易感染PRRSV、PCV2、PEDV、PoRV等病原。所以季節來臨前應加強豬場保溫和強化免疫等措施。

（3）對7種病原混合感染情況可看出，PRRSV與PCV2的共感染現象最為嚴重，另外PCV2、PRRSV單獨感染的情況也比較普遍，PCV2、PRRSV與PRV的混合感染也占有一定的比例，零星有與PEDV混合感染發生。建議豬場做好PCV2、PRRSV、PRV等3個病原的防疫工作，感染陽性場豬場引種要慎重。

（4）比較2015年與2016年7種病原CSFV、PRRSV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PoRV陽性檢出率，其中CSFV、PRRSV、PCV2、PEDV、TGEV等5種病原檢出率下降，而PRV、PoRV等2種病原陽性檢出率呈上升趨勢。

（5）對檢測PRRSV的樣品，要求有臨床癥狀并剖檢取肺臟病變部位、脾臟和淋巴結混合作為檢驗樣品，采用RT-PCR方法，不同引物檢測能區分經典株、變異株和類NADC30株，但做數據統計時不同毒株的陽性樣品均判定PRRSV陽性。從送檢單位反映的信息和實驗室的檢測結果分析得知PRRSV的不同毒株在臨床上均有致病性，生長豬感染后會表現不同程度的發燒、咳喘、消瘦、生長抑制、精神沉郁，剖檢以肺臟病變為主，部分樣品來自早產和正常分娩所產死胎。PRRSV導致的母豬繁殖障礙與生長豬的呼吸道病仍是臨床常見的表現形式。而調查發現加強藍耳病活疫苗和滅活疫苗科學合理使用可降低發病率。檢測PRV的樣品主要以發病豬腦為主，臨床上表現典型神經癥狀，如肌肉震顫，精神沉郁，口吐白沫等哺乳仔豬和保育豬發病為主。部分豬場暴發時以母豬流產、早產、死胎等，保育豬神經癥狀和育成豬嚴重呼吸道病為典型臨床表現。剖檢后腦出血病變嚴重。選用合適的引物，通過PCR方法檢測特異性好，敏感度高。檢測PCV2的樣品主要為淋巴結和脾臟等免疫器官為主。因PCV2感染豬體免疫器官造成白細胞水平下降，機體免疫機能下降，在臨床上表現斷奶后仔豬至生長豬階段慢性消瘦、生長抑制以及與PRRSV等病毒和細菌感染增加此階段豬死淘率。臨床PCV2疫苗應用廣泛，但因疫苗品質和免疫方法不正確導致免疫效果不理想，臨床檢出率較高。檢測PEDV、TGEV、PoRV等病毒的樣品只要來自腹瀉豬的糞便和小腸內容物，采用RT-PCR方法檢測特異，敏感，方法可靠，也可以采取膠體金的方法檢測。PEDV感染發病急，傳播快，哺乳仔豬死亡率高為典型特征。通過檢測發現PEDV流行已經無明顯季節性特征，并且臨床上感染各生理階段豬群。所以，豬場要加強群體免疫和全年免疫的理念，做好保溫、消毒及營養等措施能降低發病率和發病死亡率。

4 免疫建議（僅供參考）

4.1 豬瘟兔化弱毒疫苗

種公豬/母豬一年普免3～4次，2頭份/頭或母豬產后21 d跟胎免疫2頭份/頭，仔豬28～35日齡首免2頭份/頭，56～63日齡二免2頭份/頭；后備豬配種前免疫1次，2頭份/頭。

4.2 豬偽狂犬病活疫苗

種公豬/母豬一年普免3～4次，2頭份/頭，仔豬1～3日齡滴鼻1頭份/頭（PRV-gE抗體陰性的豬場可不滴鼻），45～55日齡二免2頭份/頭，90～100日齡三免2頭份/頭。

4.3 豬圓環病毒2型滅活疫苗

種公豬/母豬一年普免3～4次（產前15 d至分娩慎重免疫），2 mL/頭，或者母豬產前30 d，產后14 d加強免疫2 mL/頭，仔豬7～14日齡首免1 mL/頭，28～35日齡二免1 mL/頭，斷奶仔豬和保育中后期出現典型斷奶后多系統衰竭綜合征（PMWS）問題應在發病前2～3周建立堅強免疫。

4.4 豬流行性腹瀉疫苗

種公豬/母豬8月份1年普免1次，1頭份/頭，間隔3周加強免疫，過30 d對產前40～50 d妊娠母豬免疫1頭份/頭，產前20～30 d加強免疫1頭份/頭（建議常年跟胎次免疫），豬病毒性腹瀉三聯活疫苗，產前10～15 d免疫PED滅活疫苗4 mL/頭，仔豬斷奶時免疫1頭份/頭，后備豬配種前免疫2次，1頭份/頭，間隔21 d加強免疫。

（編輯：郭玉翠）

多年無解怪病 全因荔枝惹禍

【英國廣播公司網站2月2日報道】題：印度北部兒童死亡怪癥病因竟是“空腹吃荔枝”

困擾了印度北部荔枝產地的醫生多年的兒童怪病，竟然是由于空腹吃荔枝引起的。都20多年了，明明健康的孩子突然就不行了，喪失知覺，其中差不多一半的孩子會喪命，讓醫生們不得其解。日前，科學家查明，這個神秘怪病的病根就是“空腹吃荔枝”。美國和印度的科學家從此解開了每年導致印度北部比哈爾邦超過100名孩子喪生的怪病之謎。科學家們在發表的研究報告中稱，這些孩子都死于“荔枝中毒”。

雖然中國古代早有對服用荔枝的專述，尤其是對不能空腹吃荔枝的告誡。但遠在印度荔枝主產區的孩子們對此一無所知。他們大多家里很窮，所以當荔枝成熟季節到來時，孩子們就瘋搶著吃熟透掉在地上的荔枝。荔枝進入他們體內后，分泌的毒素抑制身體產生葡萄糖，從而給孩子們帶來危害。這些窮孩子們本來身體里的血糖就低，加上通常還沒吃飯，所以到晚上病發時，就會從睡夢中驚醒尖叫。發病的孩子很快由于急性腦腫而抽搐、失去知覺。研究人員在檢查這些患病的孩子時，注意到他們發病的樣子與加勒比海地區出現在孩子們身上的一種腦腫和抽搐的病癥很像。那種病是由西非荔枝果引起的。隨后，科學家們對荔枝進行化驗，發現荔枝中含有和西非荔枝果肉里同樣的毒素：次甘氨酸。現在，醫生們告誡當地孩子的家長：吃荔枝不能過量。一旦發生“荔枝中毒”，則需要馬上按低血糖接受救治。

（轉自參考消息[N]，2017-02-03）

S858.28

A

1002-1957(2017)02-0089-04

2017-03-01

夏 偉（1977-），男，黑龍江哈爾濱人，獸醫師，執業獸醫師，碩士，主要從事動物傳染病防治及技術服務工作.

E-mail：747360879@qq.com