正交試驗(yàn)優(yōu)選紅杏貝止咳口服液的提取工藝

郝旭

江西省萍鄉(xiāng)市中醫(yī)院制劑室，江西萍鄉(xiāng) 337000

紅杏貝止咳口服液由滿山紅、苦杏仁、浙貝母三味藥組成，具有鎮(zhèn)咳、化痰、平喘的功效。臨床用于急慢性支氣管炎、咽喉部疾病引起的咳嗽等癥。滿山紅即杜鵑花，該品為杜黯花科植物興安杜的干燥葉。具有鎮(zhèn)咳、平喘祛痰、抗炎抑菌、降壓、利尿、鎮(zhèn)痛等作用；歸肺、脾經(jīng)。苦杏仁，該品為東北杏、山杏、西伯利亞杏等蓄薇科的植物種子。功能主治有降氣止咳平喘，潤(rùn)腸通便。用于咳嗽氣喘，胸滿痰多，血虛津枯，腸燥便秘。浙貝母，該品為百合科植物浙貝母的干燥鱗莖。治風(fēng)熱咳嗽，肺癰喉痹，瘰疬，瘡瘍腫毒。該實(shí)驗(yàn)采用單因素水平試驗(yàn),采用正交試驗(yàn)法,以出膏率和總黃酮得率為指標(biāo),考察水提取量、提取次數(shù)和提取時(shí)間對(duì)該品的影響，含量測(cè)定采用分光光度法以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定總黃酮含量，優(yōu)選最佳的提取工藝條件[1-3]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

U-3010分光光度計(jì)；XA205DU電子天平，752型紫外光柵分光光度計(jì)；ZK82B真空干燥箱。

1.2 試藥

蘆丁對(duì)照品購(gòu)買來源是中國(guó)藥品生物制品檢定所，（批號(hào)：0080-9905），實(shí)驗(yàn)中其余的試劑均為分析純。

2 方法

2.1 樣品制備

選用L9(34)正交表，按表1內(nèi)容進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將自制樣品在40℃烘干,粉碎成粗粉,精密稱取各樣品約1 g共9份。趁熱將殘?jiān)^濾出來,用60%乙醇洗滌后，裝入50 mL的容量瓶中定容至刻度,均勻搖晃。用移液管量取2 mL樣品溶液,放入10 mL的容量瓶里，再加入60%乙醇溶液到容量瓶刻度，最后得到9份樣品溶液。

表1 提取條件實(shí)驗(yàn)因素水平

2.2 總黃酮的測(cè)定

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 將減壓干燥器中放置五氧化二磷后，把蘆丁對(duì)照品置于減壓干燥中干燥到恒重，配制終濃度為58 μg/mL的蘆丁對(duì)照品溶液。得到回歸曲線是:A=5.378C+0.1055,r=0.999 4，吸收度和濃度的線性關(guān)系比較好。

2.2.2 樣品測(cè)定 樣品溶液照“標(biāo)準(zhǔn)曲線制備”項(xiàng)下的方法,用移液管吸取樣品溶液1.0 mL，分別放入10 mL的容量瓶里,按照2.2.1方法中從“加入0.1 mol/L三氯化鋁溶液”起,置吸收度測(cè)定選擇的波長(zhǎng)為340 nm,測(cè)定，并按回歸方程計(jì)算樣品溶液中總黃酮含量。

2.3 固形物的測(cè)定

將藥材按照上述設(shè)計(jì)的正交實(shí)驗(yàn)表煎煮，藥渣過濾后，將藥液濃縮到較粘稠后，取一定重量放到已經(jīng)干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，放置在水浴上將其蒸干，快速稱定重量，直到2次稱定的重量差相差不超過0.000 4 g即為恒重，計(jì)算固形物重量。記錄結(jié)果。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

各樣品總黃酮含量級(jí)出膏率見表2。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算和分析見表3。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中能夠看出來每個(gè)因素對(duì)實(shí)驗(yàn)提取結(jié)果的影響程度依次為C（提取次數(shù)）＞A（加水量）＞B（提取時(shí)間）,C 因素具有顯著性差異,所以得到最佳的組合水平是A1B3C3。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果（L934）

續(xù)表2

表3 方差分析

4 討論

①紅杏貝止咳口服液由滿山紅、苦杏仁、浙貝母三味藥組成。其中滿山紅中含有的杜鵑素對(duì)鎮(zhèn)咳、平喘祛痰有明顯作用，愈創(chuàng)木奧類和梫木毒素的抗炎抑菌和鎮(zhèn)痛作用明顯；苦杏仁中含有苦杏仁苷在體內(nèi)能被腸道微生物酶或苦杏仁本身所含甜杏仁的苦杏仁酶水解，產(chǎn)生微量的氫氰酸與苯甲醛，對(duì)呼吸中樞有抑制作用，達(dá)到鎮(zhèn)咳、平喘作用。浙貝母含有貝母堿（貝母素甲）、去氫貝母堿（貝母素乙）、浙貝寧等成分，其中貝母堿與去氫貝母堿有鎮(zhèn)咳作用，貝母生物堿具有阿托品樣作用，低濃度可使氣管平滑肌松弛,高濃度可使氣管平滑肌輕微收縮起到解痙攣的作用，貝母堿與去氫貝母堿有鎮(zhèn)靜及鎮(zhèn)痛作用[4]。滿山紅、苦杏仁、浙貝母三味藥物聯(lián)合相互影響能夠起到協(xié)同增效的作用。

②絕大多數(shù)植物體內(nèi)都含有黃酮類化合物，它在植物的生長(zhǎng)、發(fā)育、開花、結(jié)果以及抗菌防病等方面起著重要的作用。滿山紅中的杜鵑素等均屬于黃酮類物質(zhì)，由于含有多個(gè)黃酮類成分，所以測(cè)定總黃酮的含量。該實(shí)驗(yàn)采用分光光度法以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定總黃酮含量。波長(zhǎng)的選擇時(shí)，對(duì)蘆丁對(duì)照品溶液進(jìn)行200～800 nm波長(zhǎng)掃描發(fā)現(xiàn)，蘆丁對(duì)照品在340 nm和510 nm兩處分別有吸收峰出現(xiàn)，綜合比較峰形，選擇340 nm進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定方法選取好后，先進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示蘆丁在5.8～14.5 μg/mL范圍內(nèi),吸收度和濃度的線性關(guān)系比較好，證明次試驗(yàn)方法可行，接著按照次試驗(yàn)方法進(jìn)行了自制9個(gè)樣品的總黃酮含量測(cè)定，通過含量測(cè)定結(jié)果，選擇最佳的提取方法。

③固形物測(cè)定時(shí)，放入烘箱內(nèi)干燥4 h稱重時(shí)若沒有恒重，需要繼續(xù)烘干直置恒重，不限定于時(shí)間必須為4 h。

④實(shí)驗(yàn)通過L9(34)正交試驗(yàn)的結(jié)果，以出膏率和總黃酮含量為考察指標(biāo),研究水提取的時(shí)間、次數(shù)和加水量的最佳工藝。結(jié)果說明,最佳的實(shí)驗(yàn)方案是A1B3C3,即加入8倍量的水，每次提取提2 h，一共提取3次。為了驗(yàn)證所選的這個(gè)最佳方案的可行性,又進(jìn)行了3次驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果顯示此方法穩(wěn)定，相對(duì)偏差較小，證明此測(cè)定方法誤差較小，提取工藝可行。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015：361.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015：201.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015：292.

[4]羅永會(huì),張翠香,徐春萍,等.正交試驗(yàn)優(yōu)選大理野生橄欖總多酚的提取工藝[J].食品科技，2013,5(11):112.