TACE對肝癌組織中MMP-2和MMP-9表達及其預后的影響

張雄杰 丁佑銘

TACE對肝癌組織中MMP-2和MMP-9表達及其預后的影響

張雄杰 丁佑銘

目的 探討TACE對肝癌MMP-2、MMP-9的表達及預后的影響。方法 選取肝癌患者80例，隨機分為兩組，分別為術前TACE組、直接手術組。采用酶聯免疫吸附法檢測兩組患者術前靜脈血中MMP-2、MMP-9的水平；采用免疫組織化學法檢測兩組患者術中所取肝癌及癌旁組織中MMP-2、MMP-9的表達；比較兩組患者術后1、2、3年的生存情況，并分析其影響因素。結果 直接手術組患者血液中MMP-2、MMP-9水平明顯高于術前TACE組患者，差異有統計學意義(P<0.05)；兩組肝癌組織中MMP-2、MMP-9表達陽性率均較癌旁組織高，且直接手術組肝癌組織中MMP-2、MMP-9的陽性率明顯高于術前TACE組，差異有統計學意義(P<0.05)；術前TACE組1、2、3年生存率及中位生存期明顯優于直接手術組，兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)；Child-Pugh分級、MMP-2、MMP-9表達、門靜脈癌栓、行TACE術均是影響患者生存期的因素(P<0.05)；與患者性別、年齡、AFP、腫瘤大小、腫瘤數目無關(P>0.05)。結論 TACE術能夠降低肝癌患者血液及組織中MMP-2、MMP-9的表達，延長患者術后生存期，且患者生存期的長短受Child-Pugh分級、MMP-2、MMP-9的表達、出現門靜脈癌栓以及行TACE術的影響，MMP-2、MMP-9可能成為評價肝癌治療效果及預后的新的指標。

TACE；肝癌；MMP-2；MMP-9

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:030～033)

數據顯示，每年死于肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的患者超過60萬[1]。除了手術治療以外，近幾年，動脈導管栓塞術(transcatheter arterial chemoembo lization,TACE)是治療HCC的新方法[2]。基質金屬蛋白酶-2、9(matrixmetalloproteinase-2,9,MMP-2,MMP-9)參與HCC的組侵襲轉移[3]。本文通過對進行TACE術后肝癌組織中MMP-2、MMP-9進行檢測，分析TACE與MMP-2、MMP-9的表達及肝癌預后的關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2014 年1 月至2015 年1 月在我院住院治療的HCC患者80例作為實驗組，入組患者均可進行手術切除，經病理確診，隨機分為術前TACE組、直接手術組，每組40例。術前TACE組包括男性20例，女性20例，年齡31～81歲，平均(51.23±2.63)歲。直接手術組包括男性20例，女性20例，年齡30～78歲，平均(49.86±1.52)歲。入組患者的性別、年齡等方面比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 TACE治療原發性肝癌的方法

Seldinger 技術穿刺右股動脈，行腹腔干、腸系膜上動脈造影。采用CMF方案經微導管于腫瘤供血動脈局部灌注化療，具體：5-氟尿嘧啶750 mg、絲裂霉素10 mg、順鉑40 mg，后用碘油-吡柔比星乳劑栓塞填充病灶。

1.3 實驗方法

1.3.1 酶聯免疫吸附法檢測兩組患者血液中MMP-2、MMP-9的表達 患者均于第1 次TACE 術前1天、術后1天、1周、1個月，清晨空腹肘前靜脈取血3 ml，收集于無任何抗凝劑的試管中靜置15 min～1 h，以2 500 r/min 離心15 min,血清保存于-40 ℃待測。

計算板孔數；稀釋標準品；加樣；配液；洗滌；顯色；終止；450 nm波長處測量吸光值。

1.3.2 免疫組織化學法檢測兩組患者組織中MMP-2、MMP-9的表達 標本用福爾馬林液固定；脫水、透明；浸蠟、包埋；切片、貼片、烤片；脫蠟、脫水；高壓熱修復；3%過氧化氫阻斷；山羊血清封閉；加一抗50 μl靜置1 h；加二抗50 μl靜置10 min；顯色；終止；復染、分化；脫水、透明；封片；觀察。

1.4 判斷標準

MMP-2、MMP-9陽性：細胞核不染色，胞膜或胞質

出現棕色或棕黃色顆粒，染色細胞數：陰性(-)：≤10%；弱陽性(+)：11%～25%；陽性(++)：26%～50%；強陽性(+++)：>50%。

1.5 評價指標

術前TACE組患者的生存時間自首次接受TACE第1天為起點，直接手術組以手術第1天為起點，比較兩組患者術后1、2、3年的生存率。

選定年齡、性別、AFP、Child-Pugh分級、腫瘤大小、腫瘤數目、門靜脈癌栓、MMP-2、MMP-9、是否行TACE等變量，分析影響生存期的因素。

1.6 統計學分析

應用SPSS 17.0統計學軟件進行數據處理，計數資料用χ2檢驗，計量資料用方差分析，生存期比較采用Kaplan-Meier法統計，影響生存期的因素采用Cox回歸模型分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 酶聯免疫吸附法檢測兩組患者血液中MMP-2、MMP-9的表達

采用酶聯免疫吸附法對兩組患者MMP-2、MMP-9的水平進行檢測，結果發現，直接手術組患者血液中MMP-2、MMP-9水平明顯高于術前接受TACE治療的患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者血液中MMP-2、MMP-9的表達 比較

注：*為與直接手術組比較，P<0.05。

2.2 免疫組織化學法檢測兩組患者組織中MMP-2、MMP-9的表達

采用免疫組織化學法對直接手術組、術前TACE組患者進行MMP-2、MMP-9的檢測，結果發現，MMP-2、MMP-9鏡下見棕黃色或黃色顆粒表達于胞膜或胞質。直接手術組肝癌組織中MMP-2、MMP-9陽性率分別為87.5%、85.0%；癌旁組織MMP-2、MMP-9陽性率為10.0%、12.5%；術前TACE組肝癌組織中MMP-2、MMP-9陽性率為62.5%、57.5%；癌旁組織MMP-2、MMP-9陽性率7.5%、10.0%。兩組肝癌組織MMP-2、MMP-9陽性率高于癌旁組織，直接手術組肝癌組織MMP-2、MMP-9陽性率高于術前TACE組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組中MMP-2、MMP-9的表達情況/例

注：*為直接手術組肝癌組織與癌旁組織比較，P<0.05；#為術前TACE組肝癌組織與癌旁組織比較，P<0.05；△為兩組肝癌組織間比較，P<0.05。

2.3 兩組患者術后生存期及影響因素的分析

術前TACE組術后1、2、3年生存率為94.4%、69.4%、50.9%，中位生存期37.0個月。直接手術組術后1、2、3年生存率為88.6%%、60.0%、25.7%，中位生存期為26.0個月，差異有統計學意義(P<0.05)。

采用Cox回歸模型，從兩組患者的性別、年齡、AFP、Child-Pugh分級、腫瘤大小、腫瘤數目、門靜脈癌栓、MMP-2、MMP-9、是否行TACE等方面，與患者的生存期進行分析，結果發現，Child-Pugh分級、MMP-2、MMP-9的表達、門靜脈癌栓、行TACE術均是影響患者生存期的因素(P<0.05)；與性別、年齡、AFP、腫瘤大小、腫瘤數目無關(P>0.05)。

3 討論

肝細胞癌作為常見的惡性腫瘤，發病率逐年上升，居全世界第五位，死亡率第二位。對于HCC的治療，手術切除仍是首選，但由于其發病隱匿，患者往往就診較晚，發現時已至中晚期，喪失手術機會，僅有不足20%的患者可以直接手術切除[4]。

臨床上，對于HCC的治療方案很多，對于早期患者，采用手術切除或者射頻消融療效較好，有報道提示，對于能夠進行手術切除的HCC患者，其5年生存率可達50%。而對于不能手術切除的中晚期患者，TACE是首選[5]。TACE結合了TAE 和局部化療，能夠選擇性阻塞肝臟供血動脈，減少90%的腫瘤血供，但對正常的肝臟組織血液供應影響不大，僅為35%。除此之外，TACE局部藥物濃度很高，延長藥物作用時間，降低化療藥的全身毒性，化療相關的不良反應明顯減少[6]。MMPs的表達與腫瘤的惡性程度相關，MMP-2、MMP-9參與腫瘤的侵襲轉移[7]。

本研究選取在我院住院的HCC患者作為入組對象，隨機分為術前TACE組與直接手術組，采用酶聯免疫吸附法對兩組患者進行手術前靜脈血中MMP-2、MMP-9的水平進行檢測，結果發現，直接手術組患者血液中MMP-2、MMP-9明顯高于術前接受TACE治療的患者，差異有統計學意義，這提示，對于HCC患者，在手術前接受TACE治療，能夠明顯降低MMP-2、MMP-9的水平，降低腫瘤侵襲轉移的可能。

對兩組患者手術過程中取肝癌及癌旁組織進行免疫組化檢測，結果發現，MMP-2、MMP-9鏡下見棕黃色或黃色顆粒表達于胞膜或胞質。直接手術組肝癌組織中MMP-2、MMP-9陽性率87.5%、85.0%；術前TACE組肝癌組織MMP-2、MMP-9陽性率62.5%、57.5%；肝癌組織MMP-2、MMP-9陽性率高于癌旁組織，直接手術組肝癌組織MMP-2、MMP-9陽性率高于術前TACE組。這表明，TACE術能夠降低肝癌組織中MMP-2、MMP-9的表達，在一定程度上能夠起到治療HCC的目的。

術前TACE組12、24、36 個月生存率94.4%、69.4%、50.9%，中位生存期37.0個月。直接手術組12、24、36 個月生存率88.6%%、60.0%、25.7%，中位生存期26.0個月，說明經過術前TACE治療后，患者的生存率提高，生存期明顯延長。從兩組患者的性別、年齡、AFP、Child-Pugh分級、腫瘤大小、腫瘤數目、門靜脈癌栓、MMP-2、MMP-9、是否行TACE等方面，與患者生存期的關系進行分析，結果發現，Child-Pugh分級、MMP-2、MMP-9的表達、門靜脈癌栓、行TACE術均是影響生存期的因素，與性別、年齡、AFP、腫瘤大小、腫瘤數目無關。有研究發現，對HCC患者與手術治療前行2次以上TACE治療，其5年生存率達51.0%，5 年無病生存期為66.4個月；術前行1次TACE者其5年生存率為35.5%，5 年無病生存期為22.5個月；手術前未行TACE者生存率僅為21.4%，5 年無病生存期為12.5個月[8]。術前、術后均行TACE對HCC患者生存期的延長更明顯[9]。既往有病例分析顯示，腫瘤大小、腫瘤位置、肝功、術前TACE是影響患者術后生存期的重要因素[10]。上述國內外研究與本實驗結果相一致。

綜上所述，TACE術能夠降低肝癌患者血液及組織中MMP-2、MMP-9的表達，延長患者術后生存期，且患者生存期的長短受Child-Pugh分級、MMP-2、MMP-9的表達、出現門靜脈癌栓以及行TACE術的影響，MMP-2、MMP-9可能成為評價肝癌治療效果及預后的新的指標，而TACE值得在臨床上進一步推廣應用。

[1] Shi J,Lai EC,Li N,et al.A new classifi cation for hepatocellular carcinoma with portal vein tumor thrombus〔J〕.J Hepatobiliary Pancreat Sci,2011,18(1):74-80.

[2] Chen G,Tang XJ,Li HB,et al.Evaluation on Curative Eff- ect of TACE Combined with Microwave Ablation For Hepatic Cellular Carcinoma with Moderate and Advanced Stage〔J〕.J Clin Radiol,2012,31(5):710-713.

[3] Luo J,Yan Z,Liu Q,et al.Endovascular Placement of Iodine-125 Seed Strand and Stent Combined with Chemoembolization for Treatment of Hepatocellular Carcinoma with Tumor Thrombus in Main Portal Vein〔J〕.J Vasc Interv Radiol,2011,22(4):479-489.

[4] 吳興軍,崔 林,劉建軍,等.TACE、PVE、HIFU序貫治療原發性肝癌42例臨床分析〔J〕.腫瘤基礎與臨床,2010,23(1):32-34.

[5] 呂嘉玲.TACE治療原發性肝癌的遠期療效分析〔J〕.中國介入影像與治療學,2012,2(9):114-117.

[6] 俞武生，盧春麗，王在國,等.VEGF 和MVD 在術前接受過肝動脈栓塞化療的肝癌組織中的表達及臨床意義〔J〕.中華普通外科學文獻(電子版)，2010，4(4):323-327.

[7] Kesanakurti D,Chetty C,Dinh DH,et al.Role of MMP-2 in the regulation of IL-6/Stat3 survival signaling via interaction with α5β1 integrin in glioma〔J〕.Oncogene,2013,32(3):327-340.

[8] 鄧小軍，張樹友，張宏文等.基于TACE 的肝癌綜合介入治療的現狀與進展〔J〕.醫學綜述,2010,16(17):2627-2630.

[9] Vog TJ,Nour-Eldin NE,Emad-Eldin S,et al.Portal vein thrombosis and arterioportal shunts:effects on tumor response after chemoembolization of hepatocellular carcinoma〔J〕.World J Gastroenterol,2011,17(10):1267-1275.

[10] 劉 楨,張 濤,蘇曉妹,等.肝動脈化療栓塞聯合微波消融治療大肝癌的臨床研究〔J〕.實用癌癥雜志,2013,28(1):64-67.

(編輯：吳小紅)

Effect of TACE on MMP-2 and MMP-9 Expression and Prognosis of Liver Cancer

ZHANGXiongjie,DINGYouming.

People'sHospitalofWuhanUniversity,Wuhan,430000

Objective To study the effect of TACE on the expression of MMP-2,MMP-9 and prognosis of hepatocellular carcinoma.Methods 80 cases of hepatocellular carcinoma were randomly divided into 2 groups,respectively before operation in group TACE,the direct operation group.Using enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of the 2 groups before blood levels of MMP-2,MMP-9;immunohistochemistry was used to detect the expression of MMP-2 in hepatocellular carcinoma and adjacent tissues,MMP-9 taken from the patients in the 2 groups;the survival time of 12,24,36 months after operation in the 2 groups were compared,and influencing factors were analyzed.Results The enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect the 2 groups of patients with venous blood MMP-2,MMP-9 levels,direct operation group in blood of patients with MMP-2,MMP-9 was significantly higher than that before surgery in patients receiving TACE treatment,the difference was statistically significant(P<0.05);Using immunohistochemical method in the 2 groups of patients with MMP-2,the expression of MMP-9 in tissues were detected,the positive expression rates of the 2 groups,the liver tissue MMP-2,MMP-9 were lower than that of paracancerous tissue increased,the positive rate and direct operation group of MMP-2,MMP-9 in hepatocellular carcinoma tissues was significantly higher than that before operation in group TACE,with statistical significant difference(P<0.05);Preoperative TACE group 12,24,and 36 months survival rate and median survival period was significantly higher than that of direct operation group,there was significant difference between the 2 groups(P<0.05);grade Child-Pugh,MMP-2,MMP-9 expression,portal vein tumor thrombus,TACE patients were survival factors(P<0.05);the number and gender,age,AFP,tumor size,tumor(P>0.05).Conclusion TACE can reduce the expression of MMP-2 in blood and tissues of patients with hepatocellular carcinoma,MMP-9,survival prolonging postoperative patients,and the length of survival by Child-Pugh classification,MMP-2,MMP-9 expression,tumor thrombus in portal vein and TACE effect,MMP-2,MMP-9 might be a new index to evaluate the treatment of liver cancer effect and prognosis.

TACE;Hepatocellular carcinoma;MMP-2；MMP-9

430000 武漢大學人民醫院(張雄杰，丁佑銘)；431600 漢川市人民醫院(張雄杰)

丁佑銘

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.01.010

R735.7

A

1001-5930(2017)01-0030-04

2016-02-17

2016-09-12)