鹽度對葉爾羌高原鰍受精卵孵化和仔魚存活率的影響

陳生熬??+姚娜??+王帥??+宋勇+謝從新??+任道全??+范鎮明

摘要：采用急性毒理學試驗方法，探討6個鹽度0%、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%對葉爾羌高原鰍受精卵孵化率、仔魚成活率等的影響。結果顯示，在不同鹽度梯度下，葉爾羌高原鰍受精卵的孵化時間、孵化率、畸形率均表現出顯著差異（P<0.05）。不同鹽度下的孵化時間差異不顯著，而在0.2%～0.6%之間孵化率較高，3個梯度差異不顯著（P>0.05）。畸形率在0.4%、0.6%鹽度下較低，在0.4%鹽度下最低，低至2.67%。葉爾羌高原鰍仔魚不投喂存活系數（SAI）的測定分析表明，仔魚在48 h內死亡數量較大，但鹽度對其影響極大，適宜鹽度為02%～0.8%，最適鹽度則為0.4%，SAI值較高，且差異不顯著（P>0.05）。鹽度與SAI相關性較高，關系式為Y=-1.146 8X2+11.231X+5.236 4（r2=0.959 8）。在0.2%～0.6%鹽度梯度之間，SAI與孵化率存在直線相關，關系式為Y=0.007 5X+0.703 5（r2=0.937 1）；SAI與畸形率的關系式為Y=-0.005 3X2+0.302 7X-3.394 7（r2=1）。研究表明，在葉爾羌高原鰍資源早期發育過程中，鹽度脅迫至關重要，對其鹽度的選擇將直接影響其生長和發育。

關鍵詞：葉爾羌高原鰍；鹽度；受精卵；仔魚；存活數量

中圖分類號： S917.4文獻標志碼：

文章編號：1002-1302（2016）08-0303-03

葉爾羌高原鰍[Triplophysa （Hedinichthys） yarkandensis （Day）]別稱狗頭魚、小大頭，屬于鯉形目（Cyprinidformes）鰍科（Cobitidae）條鰍亞科（Nemachilinae）高原鰍屬（Triplophysa）鼓鰾亞屬（Hedinichthys）塔里木河水系土著魚類[1-3]。關于塔里木河水系漁業的研究多集中在漁業環境調查、外來物種、裂腹魚類及鰍科魚類生物學[3-7]，對于該水系高原鰍的研究僅為新種報道、形態特征、攝食與生長等，對于葉爾羌高原鰍也僅有生物學特征、生長與攝食、繁殖習性等方面的研究[3-4，8-10]。

近年來，塔里木河干流水量日益減少，鹽堿加劇，環境因子對漁業資源的影響頗大，導致葉爾羌高原鰍資源銳減，其前景令人堪憂，可能成為塔里木河水系繼扁吻魚（Aspiorhynchus laticeps）和塔里木裂腹魚（Schizothorax biddulphi）之后的第3種瀕危魚類[2-3]。鑒于此，開展鹽堿化對葉爾羌高原鰍生長和發育脅迫的研究已迫在眉睫。已有關于塔里木河鹽堿化防治等水利方面的研究[5-7]，但關于鹽堿化對塔里木河流域水生生物的影響，尤其對于葉爾羌高原鰍等土著魚類鹽堿脅迫的研究尚未見報道。

在人工繁殖成功的基礎上，采用鹽度脅迫和存活率研究方法，系統總結葉爾羌高原鰍受精卵和仔魚在鹽度影響下的變化情況，以期為孵化率及育苗成活率的提高、半咸水人工馴養、增殖保護、苗種生產提供依據。

1材料與方法

1.1材料

供試受精卵和仔魚由塔里木大學水產試驗基地提供。葉爾羌高原鰍親魚經人工催產后自然產卵，受精卵在50 L塑料桶改裝的孵化桶內流水孵化。孵化及仔魚養殖均采用曝氣48 h以上的自來水，pH值為6.5～7.5，溶解氧保持在 8.0 mg/L 以上，水溫控制在（20±1） ℃。仔魚孵出后，挑選肉眼觀察無畸形的正常仔魚，用于不投餌存活系數的試驗。

1.2方法

鹽度設置分別為0%（自來水）、0.2%、0.4%、0.6%、08%、1.0%共6個梯度，采用速溶海水晶（上海海業生物科技有限公司產品）配置，并采用HANNAHI931101型鹽度計矯正鹽度，每個組合設置3個平行和1個對照。采用1 000 mL 燒杯作為試驗容器，每個燒杯放100粒。采用 ACO-004型電磁式空氣泵（功率為0.75～1.10 kW）進行微充氣。

1.3取樣和觀察

在孵化過程中嚴格記錄48 h內葉爾羌高原鰍受精卵（原腸胚后期）的孵化時間、周期、孵化率、畸形率、存活率等。孵化時間以50%的個體出膜為準，畸形率以尾部彎曲、個體脊椎彎曲、卵黃囊短小等為標準[13-17]。

仔魚活力以不投餌存活系數（survival activity index，SAI）作為衡量指標[15-17]。仔魚孵出后，挑選健康仔魚作為試驗用魚，采用2 000 mL燒杯作為試驗容器，每個燒杯放50尾，微充氣，不投餌。發現死亡及時撈出，每天按時統計死亡尾數，直至全部死亡，計算平均值比較其SAI值。SAI值計算公式為：

[JZ]SAI=∑[DD（]k〖〗i=1[DD）]（N-hi）×i/N。

式中：N為起始的仔魚數，k為仔魚全部死亡所需時間，d，hi為第i天時仔魚的累計死亡數，尾。

1.4數據處理

采用SPSS 16.0軟件進行數據處理，采用多重比較法進行組間差異顯著性檢驗，以P<0.05為差異顯著。結果以“平均值±標準差”（x[TX-5]±s）表示。

2結果與分析

2.1不同鹽度下葉爾羌高原鰍受精卵的孵化情況

葉爾羌高原鰍受精卵在不同鹽度梯度下孵化情況見表1。采用原腸胚后期受精卵發育，已完全經過20 h以上，從此時開始計時。從3批受精卵的孵化時間可知，孵化時間在不同鹽度下沒有顯著差異（P>0.05），基本一致，但鹽度升高則縮減了孵化時間。孵化率隨著鹽度梯度的升高先升高，從06%開始直線下降，孵化率的變化幅度隨鹽度的變化差異顯著（P<0.05）。畸形率總體變化幅度不大，但表現特征與孵化率相反，差異極顯著（P<0.01）。葉爾羌高原鰍受精卵 12 h 的存活率在0%～0.6%梯度之間，表現為差異不顯著，尤其在0%與0.6%、0.2%與0.4%差異不顯著（P>0.05）。在24 h時，0.2%與0.4%、0.6%與0.8%差異不顯著，但二者間差異顯著（P<0.05）；鹽度為1.0%時，同批次比較差異極顯著，存活率嚴重下降，期間下降明顯的鹽度梯度為02%、1.0%。在48 h時表現尤為凸出，鹽度為0%、1%則存活率直線下降，達到最低點1.67%，仔魚基本無法存活；鹽度為0.2%～0.6%時雖然下降，但趨勢不明顯，差異不顯著（P>0.05）；鹽度為0.8%時持續下降至60.17%，但總體仍保持一定的存活率。本試驗中，鹽度0.2%和0.6%可作為葉爾羌高原鰍孵化和仔魚培育中的鹽度關鍵點或臨界點，超出范圍孵化率和存活率均會受到影響，出現下降趨勢；雖然鹽度為1.0%時孵化率下降至一半，但此鹽度嚴重影響后期存活率，應舍棄此梯度。鹽度的大小不僅影響孵化時間、孵化率、畸形率，對于不同時間段受精卵的存活率也起到關鍵作用，直接影響葉爾羌高原鰍的生長和發育。

2.2不同鹽度下葉爾羌高原鰍的仔魚存活系數

仔魚存活系數指不投餌存活系數，本試驗中依據仔魚存活率和個數對其SAI進行測定。由表2可知，鹽度為0.4%、0.6%時SAI較高，且表現為差異不顯著（P>0.05）；鹽度為0.2%、0.8%時表現為差異不顯著（P>0.05）；兩組相比差異顯著（P<0.05）；鹽度為0%、1%時兩組相比差異顯著，與其他鹽度組相比差異極顯著（P<0.01）。由表2還可知，鹽度為04%、0.6%[JP3]時仔魚存活時間最長，可達10 d；在其他鹽度梯度下，最短存活時間為2 d，這與上述48 h存活的研究結果相一致。

由葉爾羌高原鰍仔魚鹽度和SAI關系式可知，SAI值隨著鹽度的升高呈拋物線趨勢，先上升后下降，回落差異顯著。鹽度中單一0.4%梯度顯示，標準差幅度較大，其他雖然不及0.4%梯度，但鹽度總值影響其存活。由表1、表2還可知，鹽度升高會影響其存活時間，鹽度為0.4%～0.6%時存活系數較高，且半致死時間延長至4～5 d，表明此梯度對葉爾羌高原鰍仔魚存活起到關鍵作用。

由表1的孵化率、畸形率指標結合表2可知，在0.2%～0.6%的鹽度梯度之間，其指標表現為最高和最低，這與本節闡述仔魚存活鹽度在0.4%～0.6%之間相一致。可見，在鹽度梯度試驗中，鹽度梯度0.4%是葉爾羌高原鰍早期發育中的臨界關鍵點。

在葉爾羌高原鰍的仔魚存活系數中，鹽度與SAI的相關性表現為二項式的關系式，相關性較高。在 0.2%～0.6%鹽度梯度之間，SAI與孵化率之間存在直線相關，關系式為Y=0.007 5X+0.703 5（r2=0.937 1）；SAI與畸形率則表現為二項式的關系式，即Y=-0.005 3X2+0.302 7X-3.394 7（r2=1.000 0）。

3結論與討論

3.1鹽度對葉爾羌高原鰍受精卵孵化的影響

對于魚類的繁衍生息，繁殖成敗取決于其棲息中形成的繁殖策略，這也是決定子代成活的關鍵，與魚類的繁殖時間、繁殖地點、孕育子代機體能量資源分配密切相關。繁殖行為必須在有效的水體中進行，水體中鹽堿等離子過高或過低均會影響其生殖[11-14]。

在鹽度脅迫試驗中，鹽度過高或過低均會影響諸多魚類受精卵的孵化和成活，海水魚類對鹽度的適應性較高。已有研究表明，豹紋鰓棘鱸（Plectropomus leopardus）受精卵孵化的適宜鹽度范圍為2.2%～4.2%，最適鹽度范圍為1.6%～34%[15]。趙明等研究七帶石斑魚（Epinephelus septemfasciatus）受精卵的孵化周期、孵化率、畸形率以及卵黃囊仔魚的畸形率表明，受精卵孵化的最適鹽度范圍為3.0%～3.5%，鹽度高于3.5%時孵化率隨著鹽度的升高而降低，仔魚畸形率隨之升高；鹽度低于2.5%時孵化率隨鹽度降低而降低[16]。淡水魚類胚胎發育的適宜鹽度通常較低，且它們之間存在差異[17]。郭永軍等研究表明，在鹽度為0.1%～1.2%的條件下，鯉魚（Cyprinuscarpio）胚胎孵化率與鹽度呈負相關關系，鯉魚胚胎及前期仔魚發育的最佳孵化鹽度為01%左右[18-19]。王杰等研究發現，烏鱧（Ophiocephalus argus Cantor）的最佳孵化鹽度為0.150%～0.712%[17]。王茂元等研究表明，新吉富羅非魚（NEW GIFT Nile Tilapia Oreochromis niloticus）受精卵在鹽度為0.6%～1.5%時孵化率較高，達到8.90%～9.27%，比較接近于本試驗中的9.467%；鹽度低于0.3%、高于1.8%時孵化率較低[20]。對于咸淡水魚類而言，趙俊等報道尖鰭鯉（Cyprinus acutidorsalis Wang）在鹽度0%～1.25%下發育正常，超過此范圍則發育不完全；最佳受精卵孵化梯度為0.5%，范圍在0.25%～0.75%之間[21]。海水魚類的鹽度遠大于塔里木河葉爾羌高原鰍的生存極限，這與本試驗結果相一致。葉爾羌高原鰍受精卵的最佳孵化鹽度梯度為0.4%，范圍為0.2%～0.6%，高于淡水且棲息水域符合咸淡水，這與塔里木河的水質特點[5-7]密切相關，鹽度在0.1%～0.5%范圍內。

3.2鹽度對葉爾羌高原鰍仔魚成活率的影響

鹽度對仔魚存活率的影響比較顯著，當鹽度超出一定范圍時，孵化培育周期縮短、畸形率升高，影響胚胎發育的正常進行，造成仔魚存活率低、對環境變化的耐受性差。魚類機體過弱、發育不完全，尤其是滲透壓調節不完善將導致仔魚死亡率過高，當環境鹽度較低時，仔魚為維持體內滲透壓穩定而消耗的能量也減少[13-14，17]。

趙明等對七帶石斑魚（Epinephelus septemfasciatus）仔魚的最適生存研究發現，此魚類在鹽度為3.0%～3.5%時仔魚存活系數為24.70、23.27[16]。王貴寧等對卵形鯧鲹（Trachinotus ovatus）初孵仔魚的存活和發育研究發現，鹽度為2.8%～3.6%時仔魚存活率較高，均大于5.0%；在最適溫度24 ℃下，最佳鹽度為3.2%，此時仔魚存活系數最高[22]。王涵生等觀察比較發現，在鹽度為3.8%～4.1%、2.1%～2.4%的2個鹽度梯度內，赤點石斑魚（Epinephelus akaara）仔魚的SAI值為3.19～12.42[23]。如果只有SAI值大于5的仔魚才可能被進一步培育成苗，則本試驗中除了1%鹽度梯度以外基本都可以，但最佳范圍鹽度梯度較小。

強俊等研究發現，在不同鹽度下，奧尼羅非魚（Oreochromis mossambicus）仔魚24 h的死亡率顯著不同，鹽度越高則畸形率越高、死亡個體越多、仔魚存活系數越低[24]。本試驗中，在鹽度0.4%、0.6%時葉爾羌高原鰍仔魚存活時間最長，可達10 d；1%梯度下僅能存活48 h，隨著鹽度的升高死亡數顯著上升，SAI值直線下降。

王杰等、易祖盛等研究發現，鹽度對初孵仔魚SAI值的影響主要通過對滲透調節的影響來實現；在不同鹽度下，仔魚需要消耗能量調節其滲透壓，初孵仔魚能夠在鹽度范圍較廣的水體中存活，機體結構與組分使其保持了一定滲透，并有能力維護其滲透，可主動調節滲透壓以保持平衡[17，25]。本試驗的結論與之一致，內陸水域咸淡水棲息的高原鰍魚類具有不同的滲透調節，仔魚在一定鹽度范圍內存活，鹽度范圍內SAI值呈拋物線趨勢，先上升后下降，回落差異顯著。

致謝：在鹽度分析和文章修訂中得到了中國水產科學院長江水產研究所馬寶珊博士的大力協助，謹致謝忱！

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