雜交蘭的組織培養與快繁技術

胡 蕾，申 婷

(金華職業技術學院，浙江 金華 321017)

雜交蘭的組織培養與快繁技術

胡 蕾，申 婷

(金華職業技術學院，浙江 金華 321017)

以雜交蘭的莖尖為外植體進行離體培養，探討雜交蘭的原球莖的誘導、增殖、分化、生根培養，以及練苗移栽等一系列技術措施。結果表明，原球莖誘導的適宜培養基為Hyponex No.1(花寶1號)+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1+AC 2.0 g·L-1+香蕉泥20 g·L-1+土豆泥10 g·L-1；原球莖增殖的適宜培養基為花寶1號+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1+AC 2.0 g·L-1+香蕉泥20 g·L-1+土豆泥10 g·L-1；原球莖分化的適宜培養基為1/2MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1+AC 2.0 g·L-1+香蕉泥20 g·L-1+土豆泥10 g·L-1；生根培養基以1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA1.5 mg·L-1+AC 2.0 g·L-1+香蕉泥20 g·L-1+土豆泥10 g·L-1為佳，移栽基質選用泥炭土∶珍珠巖3∶1成活率高。

雜交蘭； 組織培養； 原球莖

雜交蘭是國蘭與大花蕙蘭的雜交品種，既有國蘭的幽香與雅致，又有大花蕙蘭的花大、色艷，且體積較小，生育期只有2年，深受消費者喜愛，市場前景廣闊。但雜交蘭種子在自然條件下繁殖困難，而傳統的分株繁殖的繁殖系數低，難以滿足市場需要，故通過組織培養的方法來達到快繁的目的。本文對雜交蘭的組培與快繁進行研究，為雜交蘭的規模化生產提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

取雜交蘭品種黃金小神童的莖尖為試驗材料。

1.2 方法

1.2.1 外植體預處理

從親本植株上選取長勢好、葉片尚未展開的新生側芽，取中上部6～13 cm長的側芽，切下新芽，除去肉質根與葉，削去芽尖。流水沖洗30 min后，用1%中性洗滌劑浸泡5 min，再在流水下沖洗30 min后，用吸水紙吸干水分，置超凈工作臺上。無菌條件下對外植體進行嚴格的消毒處理。浸入75%酒精中30 s→無菌水沖洗2次→84消毒液浸泡15 min→無菌水沖洗2次→截取3～6 cm莖尖→84消毒液浸泡8 min→無菌水沖洗5～6次→無菌濾紙吸干水分→切取2～3 mm的莖尖，分別接種到誘導培養基、增殖培養基、分化培養基上，置于室溫(25±1)℃、光照強度1 500～2 000 lx的培養室進行培養。

1.2.2 基本培養基

雜交蘭組培主要以MS、1/2MS、Hyponex No.1(花寶1號)培養基為基礎培養基，附加活性炭0.3%，蔗糖3%，瓊脂0.8%，香蕉泥2%，土豆泥1%，pH值5.5～5.8。不同培養階段附加不同種類和濃度的植物激素，然后配置分裝，在121 ℃條件下滅菌30 min。

1.2.3 雜交蘭原球莖誘導培養基

采用4種雜交蘭誘導培養基：(1)MS+6-BA 1.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1；(2)MS+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1；(3)花寶1號+6-BA 1.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1；(4)花寶1號+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1。接種后每10 d換1次培養基，接種20 d左右發現有大量的原球莖產生。30 d后統計原球莖數目，以及原球莖的生長狀況。

1.2.4 雜交蘭原球莖增殖培養基

采用9種雜交蘭誘導培養基對雜交蘭原球莖增殖培養：(5)1/2MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(6)1/2MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(7)1/2MS+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(8)MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(9)MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(10)MS+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(11)花寶1號+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(12)花寶1號+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(13)花寶1號+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1。將初代培養的原球莖接種到新的培養基中進行增殖培養，半個月繼代1次，連續繼代3次，統計增殖數。

1.2.5 雜交蘭原球莖分化培養基

采用9種雜交蘭誘導培養基對原球莖分化進行研究：(14)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(15)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1；(16)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1；(17)1/2MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(18)1/2MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1；(19)1/2MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1；(20)1/2MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(21)1/2MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1；(22)1/2MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1。

1.2.6 叢生芽生根培養基

采用4種雜交蘭誘導培養基對叢生芽生根進行研究：(23)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(24)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1；(25)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1；(26)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 1.5 mg·L-1。將分化培養基中的小芽接種到4種生根培養基中，1個月后統計生根率與生長狀態。

1.3 煉苗移栽

當小苗長到5 cm左右時，打開瓶蓋，練苗3 d，取出小苗，洗凈根部的培養基后，將根部浸入0.2%多菌靈液3 min，然后取出晾干后定植于苔鮮、泥炭土∶珍珠巖3∶1的育苗盤中，放置陰涼通風處，于溫度25 ℃、濕度80%左右溫室中培養。苔鮮提前用0.2%多菌靈液消毒。

2 結果與分析

2.1 原球莖誘導

從表1可以看出，外植體在4號培養基分化的原球莖最多，誘導率可達120.0%，而且在生長過程中基本無失綠和死亡現象。1號培養基最差，誘導率只有43.3%。因此，4號培養基有利于莖尖的誘導。

表1 不同培養基對雜交蘭原球莖誘導的影響

2.2 原球莖增殖

不同的培養基在相同的時間內，雜交蘭原球莖都有增殖，但增殖倍數不同。從表2中可以看出，13號是雜交蘭原球莖增殖的最佳培養基。

表2 不同培養基對雜交蘭原球莖分化的影響

2.3 原球莖分化

將雜交蘭原球莖接種到分化培養基中，可見原球莖增大變綠，15 d后各培養基均有叢生芽出現，以后小芽逐漸伸長，數量逐漸增多。培養30 d后，分別統計不定芽數量。從表3可以看出，原球莖在22號培養基中分化效果最佳。

表3 不同培養基對雜交蘭原球莖增殖的影響

2.4 叢生芽生根

從表4可以看出，再生苗在4種培養基中生根均達到89%以上，但通過不同培養基比較，發現26號培養基最佳，生根快而且苗長勢好。

表4 不同培養基對叢生芽生根的影響

2.5 煉苗移栽

緩苗后(2周左右)用花寶系列肥結合澆水進行葉面施肥，在泥炭土∶珍珠巖3∶1的基質上1個月成活率可達90%以上，且長勢良好。

3 小結與討論

雜交蘭莖尖在培養基花寶1號+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1上可誘導出原球莖，誘導率可達120%；原球莖增殖培養基為花寶1號+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1時增殖倍數最高，可增殖4.3倍；原球莖分化培養基為1/2MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1時可分化形成大量的叢生芽；促進苗生長生根的最佳培養基是1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 1.5 mg·L-1，生根率達到100%；小苗在泥炭土∶珍珠巖3∶1的基質上生長良好，成活率達90%以上。

通過對雜交蘭組織培養技術的研究，發現適量的加入少量活性炭和多次轉接可解決外植體的褐變問題。另外，原球莖切塊細小、接種稀疏不利于原球莖的生長，切塊大而密集的繁殖快，且長勢好。

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[4] 宋微，潘靜霞，吳靜. 2種蝴蝶蘭組織培養快繁技術[J]. 江蘇農業科學，2014，42(6)：55-56.

(責任編輯：張瑞麟)

2016-09-14

胡 蕾，高級實驗師，從事農學工作，E-mail：550663034@qq.com。

10.16178/j.issn.0528-9017.20170223

S682.31

B

0528-9017(2017)02-0259-02

文獻著錄格式：胡蕾，申婷. 雜交蘭的組織培養與快繁技術[J].浙江農業科學，2017，58(2)：259-260，264.