重組豬α干擾素防治仔豬流行性腹瀉病試驗及臨床應用

趙永旭，袁秀芳，姜 平，李 慧，王一成*

(1.南京農業大學 動物醫學院，江蘇 南京 210095； 2.浙江諾倍威生物技術有限公司，浙江 杭州 310018；3.浙江省農業科學院 畜牧獸醫研究所，浙江 杭州 310021)

重組豬α干擾素防治仔豬流行性腹瀉病試驗及臨床應用

趙永旭1,2，袁秀芳3，姜 平1，李 慧2，王一成3*

(1.南京農業大學 動物醫學院，江蘇 南京 210095； 2.浙江諾倍威生物技術有限公司，浙江 杭州 310018；3.浙江省農業科學院 畜牧獸醫研究所，浙江 杭州 310021)

針對近年在我國再次出現的豬流行性腹瀉，尤其是造成初生仔豬大批死亡的情況，本試驗應用酵母表達的重組豬α-干擾素開展初生仔豬流行性腹瀉病的臨床防治試驗。選擇了3個發病豬場，以口服重組豬α-干擾素方式進行防治。結果表明，口服重組豬α-干擾素對初生仔豬流行性腹瀉具有較好的防治作用，仔豬存活率可達50%～70%。同時進行腹腔或/和口服補液，仔豬存活率從53%提升到71%。同時對重組豬α-干擾素進行臨床防治應用，取得了較好的效果。

重組豬α-干擾素； 豬流行性腹瀉病； 仔豬存活率

2010年下半年以來，豬流行性腹瀉病(porcine epidemic diarrhea，PED)又在我國出現新一輪的暴發流行。最早發生在廣西，然后湖南、華北、華東、山東、河北等地普遍發病，呈現全國性大流行，造成哺乳仔豬的大量死亡。因此，養豬生產中迫切需要立即開展新生仔豬PED防治技術研究，盡快建立有效的防治技術，以解臨床防控的燃眉之急。

早在1996年劉萬均等[1]就已證明白細胞干擾素對同群未發病豬具有仔豬流行性腹瀉病的預防作用，對病豬進行治療能縮短病程，提高日增重，加快腸絨毛修復。張泉軍等[2]用豬白細胞干擾素預防哺乳仔豬腹瀉病和斷乳仔豬腹瀉病有效率分別為84.5%和96.3%；治療哺乳仔豬腹瀉病和斷奶仔豬腹瀉病的治愈率分別為95%和100%；在干擾素推廣應用中，預防哺乳仔豬腹瀉病和斷奶仔豬腹瀉病的有效率分別為88.4%和96.8%；治療哺乳仔豬腹瀉病和斷奶仔豬腹瀉病治愈率分別為95.8%和97.6%。本試驗將酵母表達的重組豬α-干擾素試用于臨床發病的新生仔豬流行性腹瀉防治，取得了一定的防治效果。

1 材料與方法

1.1 材料

凍干的酵母表達的重組豬干擾素產品由浙江諾倍威生物技術有限公司試生產，每瓶5頭份(15 mL/瓶，0.5 mg·mL-1)。

1.2 方法

1.2.1 重組豬α-干擾素對豬流行性腹瀉治療試驗

選取3個發生仔豬流行性腹瀉的豬場，口服重組豬α-干擾素3 mL·頭-1(0.5 mg·mL-1)，每天2次，連用2～3 d，記錄仔豬成活率。

1.2.2 重組豬α-干擾素對豬流行性腹瀉臨床應用防治試驗

選取臨床自然發生仔豬PED的規模養豬場，設3種方法對發病豬群進行防治試驗。方案1：母豬產前10 d肌注2.5頭份，產前3 d肌注2.5頭份；仔豬1日齡肌注1頭份，2日齡肌注1頭份。方案2：母豬產前20 d肌注2.5頭份，產前5 d肌注2.5頭份。方案3：仔豬1日齡肌注1頭份，2日齡肌注1頭份。

固定專人飼養發病豬舍，立即隔離淘汰發病仔豬和母豬，做好豬舍溫濕度控制，每天進行全舍消毒，豬舍門口設置雨鞋消毒桶，進出病豬舍均需嚴格消毒等。

2 結果與分析

2.1 對豬流行性腹瀉治療效果

2.1.1 試驗豬場1

選擇4窩初生仔豬，口服重組豬α-干擾素(0.5 mg·mL-1)3 mL·頭-1，每天2次，連用2 d，統計存活率，結果見表1。平均存活率為51.3%，最高存活率為70.0%。

表1 重組豬α-干擾素腹瀉治療的效果

2.1.2 試驗豬場2

選擇產房一幢，產仔380頭，出生后2～3 d出現典型嚴重腹瀉。立即使用重組豬α-干擾素3 mL·頭-1，(0.5 mg·mL-1)口服治療，出現腹瀉后同窩豬同治，每天2次，連用2～3 d。同時腹腔補液5%葡萄糖鹽水+多維 10～20 mL·頭-1，每天1～2次；口服體脫康(維生素+礦物鹽)，2 mL·頭-1，每天1～2次。

結果表明，重組豬α-干擾素停止使用后，產房中仍出現零星腹瀉，完全停止腹瀉的病程約10 d。至腹瀉停止時存活270頭，存活率71.1%。至4月5日(發病后16 d)存活235頭，存活率61.2%?？诜蟛〕炭s短，病發減少，嚴重腹瀉豬效果不佳。

2.1.3 試驗豬場3

產房一幢，產仔441頭，出生后2～3 d出現典型嚴重腹瀉。立即使用重組豬α-干擾素(0.5 mg·mL-1)口服治療，全幢仔豬同步治療，3 mL·頭-1，每天2次，連用2 d。除口服重組豬α-干擾素外，補液鹽自由飲水，未做其他處理。

結果表明，至4月5日(病程7 d)存活233頭，存活率52.8%，仍有部分腹瀉。

2.2 對豬流行性腹瀉臨床應用效果

2.2.1 方案1

母豬產前10 d和3 d各注射重組豬α-干擾素，同時仔豬1日齡和2日齡注射重組豬α-干擾素的防治結果見表2。

表2 方案1的防治結果

注：豬場1同時執行淘汰、隔離、控溫、消毒等綜防措施，豬場2主要發生于14日齡仔豬，豬場3母豬產前40天免疫T-P二聯苗。

通過對3家豬場利用重組豬α-干擾素治療豬流行性腹瀉，都獲得良好的效果，說明產前10 d和產前3 d注射重組豬α-干擾素，仔豬出生后1日齡和2日齡注射重組豬α-干擾素治療方案可行，有效率達90%以上，但總體防治成本較高。

2.2.2 方案2

母豬產前20 d和產前5 d注射重組豬α-干擾素防治的結果見表3。

表3 方案2的防治結果

注：豬場1母豬產前40 d免疫T-P二聯苗，豬場2主要用于預防。

通過以上2家豬場利用重組豬α-干擾素對母豬進行抗病毒保健，結果表明重組豬α-干擾素對抑制母豬排毒效果明顯，但病毒仍持續存在，如未能做到持續產前保健，流行性腹瀉仍會發生。

2.2.3 方案3

仔豬出生后1日齡和2日齡注射重組豬α-干擾素的防治結果如表4。

表4 方案3的防治結果

注：豬場1在2013年以來一直做初生仔豬保健(1頭份)，豬場2主要用于病豬治療。

以上2個豬場試用結果表明，豬α-干擾素用于預防仔豬發病有較好的預期結果，但用于治療發病仔豬效果不理想。

3 討論

近年來，在重組豬α-干擾素及其抗病毒研究上取得了顯著的成就。Albina等[3]、Yao等[4]、Chinsangaram等[5]分別報道了重組豬α-干擾素可以抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、偽狂犬病毒(PRV)、口蹄疫病毒(FMDV)等多種病毒的復制。華中農業大學姚清俠[6]用腺病毒表達系統對豬α-干擾素進行了表達，體外試驗表明真核表達系統表達的重組豬α-干擾素能有效抑制PRRSV的增殖，但腺病毒表達量低，成本高。福建農林大學崔敏[7]在畢赤酵母中表達了重組豬α-干擾素，并對其體外抗偽狂犬病毒的活性進行了研究，達到1.817×106IU·L-1；江南大學徐俊[8]通過多變量在線監控技術實現了重組豬α-干擾素在畢赤酵母中的高效表達，抗水皰性口炎病毒活性達到1×106IU·mL-1?？梢娬婧吮磉_重組豬α-干擾素的抗病毒活性較高。重組豬α-干擾素有著廣泛的抗病毒作用，具有良好的市場前景。

本試驗結果表明，口服重組豬α-干擾素對初生仔豬流行性腹瀉具有較好的防治作用，仔豬存活率可達50%～70%。比未處理病豬提高20～40個百分點(資料未顯示)。從試驗豬場1的試驗結果可見，不同窩仔豬間重組豬α-干擾素的防治效果差異較大，存活率從37.5%至70.0%不等，可能與初生仔豬感染的嚴重程度不同有關。比較試驗豬場2與試驗豬場3的結果可見，在使用重組豬α-干擾素進行防治的同時，進行腹腔或/和口服補液可起到良好的輔助治療作用，仔豬存活率從53%提升到71%。所以，在用重組豬α-干擾素防治初生仔豬流行性腹瀉時，應注意同時做好綜合防控措施，加強清潔衛生，強化消毒，尤其是必須做好保溫和補液工作。

本試驗臨床應用結果表明，重組豬α-干擾素用于預防PEDV效果好于發病治療，母豬和仔豬聯用效果好于母豬或仔豬單用。嚴重發病時用于病仔豬治療效果不佳，可能原因是仔豬發生嚴重PED時，腸道損傷較嚴重，大量腹瀉引起機體脫水和酸中毒，僅用重組豬α-干擾素不能緩解脫水和酸中毒癥狀。

[1] 劉萬鈞，胡景韶，張道永，等. 用豬白細胞干擾素防治豬流行性腹瀉[J]. 中國獸醫科技，1996，26(2)：27-28.

[2] 張泉軍，鄧紹基. 豬白細胞干擾素防治仔豬腹瀉效果觀察[J]. 畜禽業，2005(3)：52-53.

[3] ALBINA E, CARRAT C, CHARLEY B, et al. Interferon-alpha response to swine arterivirus (PoAV), the porcine reproductive and respiratory syndrome virus [J]. Journal of Interferon & Cytokine Research: the Official Journal of the International Society for Interferon & Cytokine Research, 1998, 18(7)：485-490.

[4] YAO Q, QIAN P, CAO Y, et al. Synergistic inhibition of pseudorabies virus replication by porcine alpha/beta interferon and gamma interferoninvitro[J]. European Cytokine Network, 2007, 18(2)：71-77.

[5] CHINSANGARAM J, KOSTER M, GRUBMAN M J. Inhibition of L-deleted foot-and-mouth disease virus replication by alpha/beta interferon involves double-stranded RNA-dependent protein kinase [J]. Journal of Virology, 2001, 75(12)：5498-5503.

[6] 姚清俠.豬α干擾素、豬β干擾素與豬γ干擾素的抗病毒活性及其免疫佐劑的研究[D]. 武漢：華中農業大學，2007.

[7] 崔敏.豬α干擾素基因在畢赤酵母中的表達與活性檢測[D]. 福州：福建農林大學，2008.

[8] 徐俊. 多變量在線監控實現豬α干擾素在畢赤酵母中高效表達[D]. 無錫：江南大學，2009.

(責任編輯：盧福莊)

2016-10-17

浙江省重大科技專項重點農業項目(2012C12009-1)；杭州市農業科研主動設計項目(20162012A07)

趙永旭(1982—)，男，碩士研究生，從事傳染病預防與免疫研究工作，E-mail：386532053@qq.com。

王一成，E-mail：95711@sina.com。

10.16178/j.issn.0528-9017.20170233

S855.3

B

0528-9017(2017)02-0291-03

文獻著錄格式：趙永旭，袁秀芳，姜平，等. 重組豬α干擾素防治仔豬流行性腹瀉病試驗及臨床應用[J].浙江農業科學，2017，58(2)：291-293.