痛塊消口服液的質量標準研究Δ

梁瑩瑩，張淑君，赫 軍，張 丹，劉 曉，王曉星，馬秉智（中日友好醫院藥學部，北京 100029）

·藥物分析與檢定·

痛塊消口服液的質量標準研究Δ

梁瑩瑩＊，張淑君，赫 軍，張 丹，劉 曉，王曉星，馬秉智#（中日友好醫院藥學部，北京 100029）

目的：建立痛塊消口服液的質量標準。方法：采用薄層色譜法（TLC）對制劑中夏枯草、拳參進行定性鑒別；采用高效液相色譜法測定制劑中嗎啡的含量：色譜柱為Kromsail C18，流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85，V/V）（每100 mL加庚烷磺酸鈉0.1 g），流速為1.0 mL/min，檢測波長為220 nm，柱溫為25 ℃，進樣量為10 μL。結果：夏枯草、拳參的TLC圖斑點清晰，分離度好，陰性對照無干擾。嗎啡檢測質量濃度線性范圍為15.13～242.08 μg/mL（r＝0.999 9）；精密度、重復性、穩定性試驗的RSD＜2.0%；加樣回收率為97.80%～102.10%（RSD＝1.57%，n＝6）。結論：該研究所建標準可用于痛塊消口服液的質量控制。

痛塊消口服液；薄層色譜法；高效液相色譜法；質量標準；嗎啡

痛塊消口服液系我院院內制劑，由夏枯草、拳參、罌粟殼等多味中藥材組成，在腫瘤科應用多年，具有理氣活血、散結止痛之功效[1]。其中，夏枯草為君藥，具有清火明目、散結消腫之功效；拳參為臣藥，具有清熱解毒、消腫止痛之功效。根據《醫療機構制劑注冊管理辦法》[2]相關要求，本著確保醫院制劑質量的原則，筆者采用薄層色譜法（TLC）對痛塊消口服液中夏枯草、拳參進行定性鑒別；又因罌粟殼作為制劑的重要組分，具有成癮性，必須對其含量進行控制，故選取其主要成分嗎啡作為指標成分，采用高效液相色譜法（HPLC）對其進行含量測定，以制定含量限度，確保用藥安全。

1 材料

1.1 儀器

1260型HPLC儀，包括G-1322C型在線真空脫氣機、G-1311C型高壓四元泵、G4212B DAD二極管陣列檢測器、Chemstation色譜工作站（美國Agilent公司）；CPA225D型十萬分之一電子分析天平、BSA423S-CW型千分之一電子分析天平（德國Sartorius公司）；KQ-300DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率：300 W，頻率：40 kHz）。

1.2 藥品與試劑

痛塊消口服液（中日友好醫院中藥制劑室自制，批號：20150123、20150205、20150219，規格：10 mL/支）；綠原酸對照品（批號：110753-200413，純度：＞98%）、嗎啡對照品（批號：171201-201324，純度：99.1%）、夏枯草對照藥材（批號：120993-200604）均購自中國食品藥品檢定研究院；硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠）；聚酰胺薄層板（浙江臺州市路橋四甲生化塑料廠）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別

2.1.1 夏枯草 取樣品30 mL，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30 mL，合并乙酸乙酯溶液，蒸干，殘渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取夏枯草對照藥材2.5 g，加70%乙醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇5 mL使溶解，作為對照藥材溶液。按痛塊消口服液處方和工藝制備缺夏枯草的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。按TLC法[2015年版《中國藥典》（四部）][3]試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇（15∶3∶3.5∶0.5，V/V/V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，詳見圖1。

圖1 薄層色譜圖Fig 1 TLC chromatograms

2.1.2 拳參 取樣品20 mL，加水飽和的正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇層，蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取綠原酸對照品適量，加乙醇制成綠原酸質量濃度為0.5 mg/mL的對照品溶液。按痛塊消口服液處方和工藝制備缺拳參的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。按TLC法[2015年版《中國藥典》（四部）][3]試驗，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，詳見圖1。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件[4]與系統適用性試驗 色譜柱：Kromsail C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85，V/V）（每100 mL加庚烷磺酸鈉0.1 g）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：220 nm；柱溫：25℃；進樣量：10 μL。在上述色譜條件下，理論板數以嗎啡峰計＞10 000；嗎啡的保留時間為13.5 min，組分分離良好，分離度＞1.5，且其他成分無干擾，詳見圖2。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取15.13 mg嗎啡對照品，置于50 mL量瓶中，加20%甲醇溶液（含5%醋酸）溶解并定容，搖勻，即得。

圖2 高效液相色譜圖Fig 2 HPLC chromatograms

2.2.3 供試品溶液的制備 精密量取樣品20 mL，置于150 mL分液漏斗中，加氨試液20 mL，搖勻，以三氯甲烷-異丙醇溶液（9∶1，V/V）振搖提取5次，每次40 mL，合并提取液，蒸干，殘渣以20%甲醇溶液（含5%醋酸）溶解并定容至5 mL，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.4 陰性對照溶液的制備 按痛塊消口服液處方和工藝制備缺罌粟殼的陰性樣品，并按“2.2.3”項下方法制成陰性對照溶液。

2.2.5 線性關系考察 精密量取“2.2.2”項下對照品溶液0.5、1、2、4、8 mL，分別置于10 mL量瓶中，加20%甲醇溶液（含5%醋酸）定容，制成系列對照品溶液。精密量取上述系列對照品溶液各10 μL，按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以嗎啡質量濃度（x，μg/mL）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得嗎啡回歸方程為y＝26.769 6x—46.791 7（r＝0.999 9）。結果表明，嗎啡檢測質量濃度線性范圍為15.13～242.08 μg/mL。

2.2.6 精密度試驗 取“2.2.2”項下對照品溶液適量，按“2.2.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果，嗎啡峰面積的RSD＝0.67%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩定性試驗 取“2.2.3”項下供試品溶液（批號：20150123）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、10、12 h時按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，嗎啡峰面積的RSD＝1.18%（n＝7），表明供試品溶液在室溫放置12 h內基本穩定。

2.2.8 重復性試驗 精密稱取同一批樣品（批號：20150123）適量，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算含量。結果，嗎啡平均含量為0.015 5 mg/mL，RSD＝0.06%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗 取已知含量樣品（批號：20150123）適量，共6份，每份20 mL，分別加入一定質量的嗎啡對照品，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

2.2.10 樣品含量測定 取3批樣品各適量，分別按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（n＝3，mg/mL）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3，mg/mL）

3 討論

預試驗中，筆者首先考慮以萃取方法提取，其中夏枯草以乙酸乙酯萃取，拳參以正丁醇萃?。还P者根據文獻[4]及實際操作，考慮到展開劑毒性問題，選取環己烷-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇（15∶3∶3.5∶0.5，V/V/V/V）作為夏枯草鑒別的展開劑，置紫外光燈（365 nm）下檢視；選取醋酸為拳參鑒別的展開劑，置紫外光燈（365 nm）下檢視，結果顯示，夏枯草和拳參斑點清晰，分離度好，陰性對照無干擾。

本試驗首次將痛塊消口服液中毒性藥材罌粟殼中嗎啡的含量納入其質量控制項中，經紫外光譜掃描發現，嗎啡的最大吸收在220 nm波長處，與文獻[5]報道一致，故選用220 nm為檢測波長；筆者考察了3種溶劑，分別以甲醇、70%甲醇、含5%醋酸的20%甲醇溶液溶解嗎啡[5]，結果表明，以含5%醋酸的20%甲醇溶液作為溶劑時對照品峰形良好，基線平穩，故選取其為溶劑；另外，痛塊消口服液為復方制劑，提取方法為水提，嗎啡在水中的溶解度較小，且水提后痛塊消口服液中其他組分對嗎啡的干擾較大，故筆者參照文獻[5]，優先考察了烘干后甲醇提取、三氯甲烷-異丙醇（9∶1，V/V）萃取2種方法，結果表明，三氯甲烷-異丙醇（9∶1，V/V）萃取能有效地去除雜質，排除干擾，對嗎啡的提取率高，重現性好，便于醫院制劑的常規檢測。

綜上所述，本研究所建標準可用于痛塊消口服液的質量控制。

[1] 劉猛，賈立群.痛塊消口服液治療乳腺癌家族史合并重度乳腺增生1例[J].醫學信息，2014，27（7）：632-633.

[2] 國家食品藥品監督管理局.醫療機構制劑注冊管理辦法：試行[S].2006-06-01.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S].2015年版.北京：中國醫藥科技出版社，2015：57.

[4] 陳蔚琳，漏德寶.暢聲口服液質量標準研究[J].中國藥房，2008，19（12）：933-935.

[5] 何祿仁，宋平順.高效液相色譜法測定蜜炙罌粟殼及種子中嗎啡含量[J].中國藥業，2007，16（21）：25-27.

Study on the Quality Standard for Tongkuaixiao Oral Liquid

LIANG Yingying，ZHANG Shujun，HE Jun，ZHANG Dan，LIU Xiao，WANG Xiaoxing，MA Bingzhi（Dept.of Pharmacy，China-Japan Friendship Hospital，Beijing 100029，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standard for Tongkuaixiao oral liquid.METHODS：TLC was used for the qualitative identification of Prunella vulgaris and Polygonum bistorta in the preparation；HPLC was used for the content determination of morphine：the column was Kromsail C18with mobile phase of acetonitrile-0.1%phosphoric acid（15∶85，V/V）（each 100 mL added sodium heptanesulfonate 0.1 g）at a flow rate of 1.0 mL/min，detection wavelength was 220 nm，column temperature was 25℃，and injection volume was 10 μL.RESULTS：The TLC spots of P.vulgaris and P.bistorta were clear and well-separated，negative control without interference.The linear range of morphine was 15.13-242.08 μg/mL（r＝0.999 9）；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 2.0%；recovery was 97.80%-102.10%（RSD＝1.57%，n＝6）.CONCLUSIONS：The establish standard can be used for the quality control of Tongkuaixiao oral liquid.

Tongkuaixiao oral liquid；TLC；HPLC；Quality standard；Morphine

R284.1；R917

A

1001-0408（2017）03-0374-03

2016-04-15

2016-07-24）

（編輯：張 靜）

國家自然科學基金資助項目（No.81402942）；中日友好醫院青年英才計劃項目（No.2015-QNYC-B-05）；中日友好醫院科研基金項目（No.2014-1-QN-2）

＊中藥師。研究方向：藥品檢驗。E-mail：koma19620610@163. com

#通信作者：副主任藥師，碩士。研究方向：中藥質量控制。電話：010-84205428。E-mail：mbz20052002@aliyun.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.03.24