微柱凝膠法在血型鑒定中的應用

李偉敬，夏瑞雪，崔 艷

（1.解放軍第266醫院檢驗科，河北 承德 067000；2.解放軍第266醫院麻醉科，河北 承德 067000）

微柱凝膠法在血型鑒定中的應用

李偉敬1，夏瑞雪1，崔 艷2

（1.解放軍第266醫院檢驗科，河北 承德 067000；2.解放軍第266醫院麻醉科，河北 承德 067000）

微柱凝膠法；血型鑒定；應用

ABO血型系統是被發現的人類第一個血型系統，至今，現發現人類血型系統已有30多種，隨著人類對血型的進一步研究，Rh血型系統是紅細胞血型中最為復雜的一個血型系統，因此血型在輸血前的正確鑒定，是確保安全輸血的重要措施，直接關系到患者的生命安全。目前傳統的ABO血型和Rh血型鑒定主要采用玻片法，其敏感度不能滿足臨床輸血安全需求。因此，我們選擇了微柱凝膠法ABO、Rh（D）血型定型檢測卡在同一卡片上進行正反血型鑒定。

1 材料與方法

1.1 一般資料

檢測標本為我院2016年8～12月送檢的門診及住院患者2000份EDTA抗凝新鮮血樣。

1.2 試驗原理

本檢測卡是利用微柱凝膠過篩檢測原理。若待檢患者紅細胞與凝膠中的單克隆IgM抗A、抗B、抗D試劑發生特異性凝集反應，或待檢患者血漿與ABO試劑紅細胞發生特異凝集反應，通過TD-2Y醫用多功能離心機離心后，凝集的紅細胞被排阻在具有三維空間網狀結構的凝膠表層或凝膠顆粒間隙之中，判為陽性結果，表示待檢患者紅細胞含相應的血型抗原，或待檢患者血漿含相應的抗體；如果RBC全部沉積于凝膠孔腔底部，則判為陰性結果，表示待檢測紅細胞不含相應的抗原，或待檢血漿不含相應的抗體。正定型管有4管，其中藍色A管含35%單克隆IgM抗A（效價≥128），黃色B管含35%單克隆IgM抗B（效價≥128），灰色D管含35%單克隆IgM抗D（效價≥64），白色Control管含生理鹽水35%，各微柱管分別含凝膠65%，在卡片上的排列順序從左至右由第一管起分別為蘭A、黃B、灰D、白Control；反定型管有4管，白色A、B、O、自身管全部為無抗體微柱管，各管分別含生理鹽水35%、凝膠65%，在卡片上排列順序從左至右由第5管起分別為白A、白B、白O、自身。

1.3 試劑與儀器

ABO、Rh（D）血型定型檢測卡（中山市生科試劑儀器有限公司），ABO血型反定型試劑盒（人紅細胞）（長春博德生物技術有限責任公司），TD-2Y醫用多功能離心機（中山市生科試劑儀器有限公司）。

1.4 檢測方法

1.4.1 ABO、Rh（D）血型定型檢測卡

觀察外觀，如有干膠、雜質、氣泡不可使用，將卡放置平衡至室溫，使用前置離心機1000 r/min離心2 min，1800r/min離心3 min。將待檢全血標本離心分離紅細胞與血漿（血清），取上清（該上清不得有絮狀物或沉淀）。制備1%待檢紅細胞懸液（500 ul生理鹽水或血型分析用稀釋液對5 ul壓積紅細胞）與1%的A1、B、O型試劑紅細胞懸液（1500 ul血型分析用稀釋液對500 ul的4%A1、B、O紅細胞或比例3:1稀釋）。撕開卡封膜，于蘭A、黃B、灰D、Control微柱管反應腔中加入1%待檢RBC懸液各50 μl；于白色A、B、O、自身管分別各加入待檢血漿50 μl，再分別加入對應的1.0%A1、B、O型試劑紅細胞懸液、待檢紅細胞懸液50 μl。將檢測卡，置離心機靜置5 min，1000 r/min，2 min，1800 r/min，3 min離心后取出，判定結果。

1.4.2 玻片法

按照《全國臨床檢驗操作規程》進行操作并判定結果[1]。

2 結 果

在2000例血型鑒定標本中RhD陰性5例（用玻片鑒定也為陰性），正反定型不符7例（其中紅細胞抗原減弱例2例，高效價冷凝集素2例，拖尾現象3例）。

3 討 論

紅細胞血型抗原減弱2例均為腫瘤患者，由于凝集反應減弱，影響結果判定。針對此問題，我們根據凝集反應減弱程度，把腫瘤患者紅細胞懸液濃度相應增加，用標準血清再鑒定一次，結果準確。血型鑒定中高冷凝集素的影響應引起我們的高度重視，高效價冷凝集素是患者體內產生了抗自身紅細胞的嗜異性冷抗IgM。血型鑒定過程中由于在室溫條件下進行，嗜異性冷抗IgM即可與自身紅細胞發生非特異性凝集反應，出現凝集現象而導致血型判斷錯誤。對此我們先把待檢紅細胞用生理鹽水洗滌三次，在用37℃水浴箱溫育30 min后進行檢測并結合玻片法，做出正確判斷。經過檢查發現拖尾現象是由于實驗人員在撕封條的時候用力過猛，導致抗A孔里的血清污染到抗B血清孔里，出現結果拖尾現象，給結果判讀增加難度。我們的解決辦法是檢測卡在離心機1000 r/min，2 min；1800 r/min，3 min離心后小心撕開封條，避免用力過猛。通過實驗我們總結在檢測卡使用過程中，如因運輸過程產生氣泡，可將檢測卡放置在漩渦振蕩器上震蕩，使氣泡漂移至膠面為止，3000 r/min離心2 min。延長抗原抗體反應時間，按1000 r/min，2 min；1800 r/min，3 min離心，可提高試驗靈敏度。避免因離心速度過快、時間過長導致結果假陰性。及時發現由于細菌污染、纖維蛋白析出，抗凝血不佳膠體上清液揮干導致的假陽性。玻片法作為我們常用的血型鑒定方法，其敏感度不能滿足疑難血型的鑒定。微柱凝膠法成為目前血型檢測的主要方法，彌補了玻片法的不足，具有血型鑒定時間短，結果準確、清楚，靈敏度高，易于保存備查等優點。因此，微柱凝膠法檢測血型為臨床安全輸血提供了有效保障，值得推廣使用。

[1] 葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規程.第三版,南京:東南大學出版社.

本文編輯：吳 衛

R446.62

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ISSN.2095-8242.2017.14.2745.01