涼膈散作用機制的研究進展

楊 謙

（天津中醫藥大學，天津 300073）

涼膈散作用機制的研究進展

楊 謙

（天津中醫藥大學，天津 300073）

目前單味中藥的成分及藥理作用的研究已經取得了較多成果，但是對中醫方劑的研究大多還停留在臨床水平。本文收集了涼膈散作用機制的相關文獻并加以總結歸納，以期通過涼膈散更好的了解中醫方劑的研究方法和成果，為日后的深入探索提供參考。

涼膈散；作用機制；綜述。

1 涼膈散簡介

通常涼膈散是指《太平惠民合劑局方》（以下簡稱局方）中的涼膈散，其組成也最能反映“涼膈”之義，本文以此方為準。后世雖然也有不少方劑冠名涼膈散，但有的只是組成稍異而治法不變，有的則是治法組成完全不同，故均不贅述?！毒址健匪d涼膈散，各藥劑量分別為連翹二斤半，大黃、芒硝、甘草各十兩，薄荷、山梔子、黃芩各二十兩[1]。此為宋朝計量單位，據考證[2]，宋時一斤約為634～640 g，一兩約為39～40 g，一錢約為3.9～4 g，具體劑量較難準確判定，按照各藥比例確定劑量可能更為實用。從組成不難看出涼膈散主要為瀉下清熱之用，然其中又有薄荷、竹葉等輕清之品，瀉下之藥用量亦較輕，這大大擴展了它的適用范圍。與涼膈散臨床應用相關的研究亦不在少數，但是其具體的作用機制研究則起步較晚。因此，本文納入了近來發表的諸多論文，以圖對涼膈散的作用機制加以總結，為后來的研究提供依據。

2 涼膈散用藥原理及源流的討論

涼膈散善清上中二焦，已有備述[3]，相似的文章也認為涼膈散是上病下取[4]，并可清頭面之火[5]。盡管這三篇文章篇幅較短，舉例較少，從中仍可看出涼膈散的用藥特點。涼膈散之法易明，其源流之脈絡也比較清晰。涼膈散最早出自《局方》，而不是劉完素首創，這點已無異議[6]。若是將涼膈散方后的加減與原方結合，還可看出劉完素所創防風通圣散與涼膈散之間的聯系[7]。更進一步，亦有認為銀翹散也出自涼膈散[8]，其理論基礎是吳鞠通論銀翹散時言及李東垣之清心涼膈散。雖然查李東垣之書未見清心涼膈散一方，但同為溫病學派的王夢英所著《溫熱經緯》中有此方，并言此方“即涼膈散去硝黃加桔梗。”認識涼膈散的源流有助于我們理解涼膈散運用的臨床基礎，確定作用機制的研究方向。

3 涼膈散化學成分的現代藥理學研究

針對涼膈散中部分單味藥已經有諸多研究，如黃芩、大黃等藥。許多具體成分的作用機制研究也已開展。但是將涼膈散作為一個整體的研究依然十分稀少。目前僅有的方法是利用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）聯合二極管陣列檢測器（Diode Array Detector，DAD）建立涼膈散的指紋圖譜[9]。具體方法是檢測涼膈散水煎液的各項成分及其色譜峰值，并人為選取涼膈散各藥的某幾種化學成分單質組成涼膈散類似物然后檢測其色譜峰值，比較兩者是否具有相似性。結果選定的化學成分均可在涼膈散水煎液中找到對應峰值，為涼膈散的標準化檢測提供了可行的方法。

4 涼膈散作用機制的研究

4.1 涼膈散對肺組織和細胞的作用機理

該方面的研究主要是圍繞與肺部炎癥反應相關的細胞因子、蛋白、基因表達及病理表現展開的。肺組織核因子-κB（NF-κB）是較早得到研究的細胞因子[10]，它是多種信號轉導途徑的匯聚點，在調控炎癥反應的基因表達方面起到關鍵性作用。當利用內毒素（主要為lipopolysaccharide，LPS）干預后NF-κB表達會顯著增多。利用不同劑量的涼膈散對LPS介導的小鼠肺部炎癥模型進行干預，發現與對照組相比肺組織NF-κB表達減少，且呈劑量依賴性。研究中采用的LPS造模方式被許多后繼的研究借鑒。如對LPS介導的小鼠急性肺損傷模型，同樣以涼膈散干預，相比對照組小鼠體內促炎癥因子TNF-α及IL-6[11]的表達減少，肺水含量減少，肺通透指數降低，PaO2明顯提高。病理結果也顯示，其能減少炎癥細胞的肺內積聚，減少肺泡萎陷及肺實變的發生。與以上實驗具有相似流程的研究還證明下列因素也可受涼膈散作用而改善：Th1/Th2比值[12]（Th1、Th2細胞是CD4+T輔助細胞分化產生不同細胞因子的效應細胞亞群，Th1細胞主要分泌IFN-γ等促炎細胞因子，介導細胞免疫，Th2細胞主要分泌IL-4等抗炎細胞因子，介導體液免疫）；IL-lβ和IL-10含量[13]；轉導與轉錄激活子3（SATA3）和磷酸化轉導與轉錄激活子3（P-SATA3）[14]（STAT3是JAK/STAT途徑的重要成員之一，P-SATA3是其磷酸化后的活化形式）；IL-10[15]（一種重要的抗炎因子）；AQP-1和AQP-5[16-17]（肺水通道蛋白的兩種亞型，參與肺內水的異常代謝）；Toll樣受體4[18]（TLR4是介導LPS信號轉導的重要受體，在急性肺損傷中具有重要作用）；a-rENaC、P-rENaC、Y-rENaC、a-Na+-K+-ATase蛋白及其相關調控基因[19]（均可參與大鼠肺組織肺水轉運，改善肺水腫）。另有相關會議論文也涉及到以上內容[20-21]。這一系列實驗為涼膈散如何“清熱”提供了分子級別的解釋，其中對抗炎促炎因子與免疫細胞的影響尚未涉及到機制的層面，但對于肺水轉運相關蛋白和基因的研究，尤其是涉及到Toll通路和JAK/STAT通路的研究提示了涼膈散于這些環節中可能存在明確的作用靶點，值得更深入的研究。

4.2 涼膈散對腸道細胞的作用機制

在研究涼膈散對腸道作用機制時觀察到了部分與肺組織相似的現象，如TNF-α、IL-6和NF-κB水平的下降[22]，說明涼膈散對機體的作用靶點可能分布廣泛或可能作用于全身多個靶點，一定程度上解釋了部分全身性疾病[23]為何也會有涼膈散治療成功的報道。一些具有腸道本身特點的大分子物質變化也被證明受到涼膈散影響，在腸缺血模型小鼠體內予以涼膈散灌腸后，小腸組織內丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量降低，超氧化物歧化酶（Super Oxide Dismutase，SOD）活性增高，Bcl-2蛋白（可抑制細胞凋亡）表達增強，而Bax蛋白（可促進細胞凋亡）表達降低[24]，推測涼膈散腸缺血時細胞壞死的機制可能和減少氧自由基（oxygen free radical，OFR）產生、上調抑凋亡蛋白Bcl-2基因的表達和下調促凋亡蛋白Bax基因的表達有關。

4.3 涼膈散對肝臟細胞的作用機制

將涼膈散用于肝臟疾病的研究并非是受到傳統醫學理論的啟發，而是基于對現代藥理學研究的解讀。因涼膈散中單味藥大黃、黃芩和連翹等藥具有改善微循環的作用，故將其用于創傷性休克所致肝損害的研究。結果發現，涼膈散干預可以顯著促進肝臟內補體結合受體C5a-R基因的表達[25]。實驗中觀察到的減輕肝臟細胞損傷的作用可能是通過C5a-R結合具有損傷效應的補體片段C5a，降低C5a濃度達到的。同時還發現涼膈散也可下調促凋亡蛋白Bax基因的表達，但不影響抑凋亡蛋白Bcl-2基因。這與前面提到的研究結果有部分相互印證的作用，為上文涼膈散靶點的猜測提供了更多線索。文中還提到死亡受體Fas與其受體FasL表達減少以及可反映細胞凋亡水平的caspase3表達的減少。另外，肝臟庫普弗細胞表面CD14和清道夫受體（scavenger receptor，SR）這樣與炎癥水平密切相關的蛋白表達水平也可因涼膈散的介入而改善[26]。

4.4 涼膈散作用于其他細胞的分子機制

自從血小板被證明與機體炎癥反應有關以來，許多與炎癥相關的實驗開始以血小板為對象，研究血小板在各類炎癥反應中的具體變化。涼膈散可以減少血小板活化標志物——血小板源細胞因子sCD40L、β-TG——的釋放，減少血小板中TLR4的表達[27]，并呈劑量依賴性，又一次將涼膈散的靶點指向了Toll途徑。對于在炎癥中起重要作用的巨噬細胞，近來也有涼膈散干預的報道，巨噬細胞內細胞撕裂素蛋白活化激酶p38MAPK的活性[28-29]，CD14mRNA[30]、NF-κB[31]及NF-κB亞基p65[32]的表達均可受涼膈散抑制而不同程度降低，從而減弱細胞對炎癥的反應程度。

4.5 其他與涼膈散有關的機制研究

以往涼膈散都被認為是清熱解毒之劑，但是一些實驗也發現涼膈散可以改善部分凝血指標，甚至對Ⅱ型糖尿病小鼠的血糖及血脂有積極作用。如對家兔內毒素的模型實施涼膈散干預后，不僅有血清過氧化脂質（LPO）水平、SOD活性、TNF-α水平的變化[33]，還發現血小板計數（BPC）、凝血酶原時間（PT）、血漿纖維蛋白原含量（Fb）及血液流變參數全血粘度（J1、J2、J3）、血漿粘度（Br）、紅細胞壓積（Ht）、紅細胞聚集指數（Lb）、紅細胞剛性指數（Rh）的改善[34]。對小鼠內毒素血瘀模型應用涼膈散可以改善腸系膜微循環[35]。對小鼠Ⅱ型糖尿病模型或高脂高糖飲食小鼠應用涼膈散或黃連解毒湯可以改善小鼠的血糖、血清胰島素以及血甘油三酯和總膽固醇。

5 總 結

目前中藥方劑的研究很多還處在臨床水平，含有三種以上中藥的方劑更是如此，涼膈散即是典型代表。這其中的難點在于方劑成分復雜導致實驗中不易得到成分均一穩定的實驗試劑。水煎劑在現代醫學藥理研究中并不是一個理想的產物，而含藥血清由于其可控性較差也存在爭議。將涼膈散用于實驗時也出現了這兩種不同的研究方法，究竟哪一種能更好的反映方劑的臨床作用現在還沒有足夠的證據。另一個原因是方劑多靶點的性質，越來越多的研究表明方劑的作用并不單一，這為實驗的設計和選題帶來了困擾。從涼膈散的研究中可以看出，它既能降低某些廣泛分布的炎癥因子如TNF-α等的水平，又能對特定細胞內的基因或蛋白如肺內a-rENaC的表達產生影響。盡管中醫方劑研究還有很多問題亟待解決，但是隨著后續實驗研究的深入與積累，方劑的具體作用機制會逐漸明晰，為方劑的標準化提供依據。

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本文編輯：趙小龍

R285.5

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ISSN.2095-8242.2017.24.4736.03

楊謙（1992-），性別：男；學歷：碩士；職稱：無；研究方向：無