小鼠卵巢玻璃化冷凍對子代的初步影響及FSH的干預研究

于 佳，王海菲，楊夢怡，劉心蕊，李 雪，潘朋歌

（1.寧夏醫科大學生育力保持教育部重點實驗室、基礎醫學院生物技術系，寧夏 銀川 750004；2.寧夏生殖與遺傳重點實驗室，寧夏 銀川 750004）

女性配子發源地為卵巢，伴隨著周期性卵泡的發育，雌、孕激素也進行周期性的分泌，成為女性健康的保護神。然而過去幾十年里，隨著腫瘤治療和診斷水平不斷得到提高，癌癥女孩和青年女性的生存率也得到明顯提高，但其中的化療及放療方法卻對她們的生育能力起到了危害的作用。從而喪失卵泡功能，導致女性失去了生育能力，同時女性體內的雌激素水平顯著降低，降低絕經后女性的生活質量。故此，在正式進行抗癌治療過程中，需針對患者卵巢進行凍存處理，待患者病癥得到有效控制后，再將其移植到患者體內，進而達到保障患者生育功能的目的。本研究室前期研究顯示，在促卵泡素（follicle stimulating hormone，FSH）的干預下，可有效保障在玻璃化凍融卵巢條件下，卵泡的成活情況[1-2]。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及飼養條件

性成熟健康C57 BL/6J♀100只，體重25～30 g；♂60只，體重30～35 g，購自美國杰克遜實驗室（證號：000664）。所有小鼠均自由進行攝食，且室內溫度控制在20度左右，對應濕度控制在50%左右，并保障室內通風情況。

1.2 主要試劑與儀器

本次研究主要涉及為注射用重組人促卵泡刺激素以及濃度在90%以上的人血清白蛋白，研究過程中所使用熒光生物顯微鏡，由日本生產，型號為OLYMPUS，常規倒置熒光顯微鏡，型號為，CK40，Leica DME實體顯微鏡，液氮罐（美國MVE）。

1.3 試驗方法

取非干預玻璃化凍存組（vitrification test group,VTG）簡稱新鮮移植組和玻璃化凍存FSH干預組（FSH-VG）簡稱玻璃化凍存組的出生子代進行試驗。所有小鼠在出生后12小時，即斷奶。隨后結合小鼠生長情況，針對其生理發育、運動協調情況等展開統計。

1.4 行為測試方法

按文獻[3-4]介紹的程序進行試驗。

1.5 統計學方法

應用SPSS 19.0統計學軟件對數據進行分析處理，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組小鼠出生時一般情況

觀察可知，所有新生小鼠皮膚均表現為紅色，且不存在有毛發，雙眼沒有睜開，雙耳粘貼在皮膚上。兩組進行比較均沒有出現明顯外觀畸形。

2.2 兩組仔鼠體重變化情況

結合對小鼠體重變化情況進行統計可知，在出生后2周時間后，小鼠體重增加速度明顯加快。且組間對比可知，體重變化情況不存在有顯著差異P＞0.05。

2.3 兩組小鼠生理發育指標測試結果

結合統計可以發現，兩組小鼠各方面生理指標均逐漸達標，且在達標時間上未存在有明顯差異，統計學無明顯差異（P＞0.05）。

2.4 兩組小鼠神經反射和運動協調能力結果

比較后發現：兩組小鼠神經反射和運動協調能力指標達標日期大致相當，統計學無明顯差異（P＞0.05）。

3 討 論

近20年來，醫院采用新型化療及放療方案，有效提高惡性腫瘤的年輕女性及兒童的存活率，但對于細胞分裂活動較為頻繁的卵巢組織來說，應用大劑量的化療和放療會造成無法修復的損傷，使得女性患者卵巢出現早衰的現象，嚴重情況下甚至喪失生殖能力。而有研究表明對于女性大量卵泡，卵巢的玻璃化冷凍技術可以做到一次性地保存，待卵巢組織得到有效恢復后，再借由體外培養等方式，進而達到輔助生育的效果。

本研究結果顯示，FSH進行干預的玻璃化凍存組和新鮮移植組相比不具有明顯差別，提示FSH可以作為干預因素的添加，對于玻璃化冷凍過程起到有利，并且不會對出生后子代小鼠的生理發育、成熟情況和神經發育造成影響，沒有出現延遲發育。然而，凍融卵巢的遺傳安全性除了與新生子代生理發育的一般情況密切相關，還與子代的表觀遺傳修飾異常以及對子代的長期觀察具有一定的關聯性。因此，我們今后的研究方向應該以凍融卵巢移植子代表現遺傳信息的改變為主。

[1] 吳 昊,蔡玉芳,張 紅,等.FSH干預對小鼠玻璃化凍融移植卵巢血流重建的影響.寧夏醫科大學學報[J],2014,36(5)∶478-505.

[2] 張 紅,馬文葉,楊延周,等.小鼠卵巢玻璃化凍融過程中FSH干預對VEGF及αvβ3表達的影響.生殖與避孕[J],2015,35(4)∶230-236.