不同容量一次性加樣針對全自動Addcare ELISA檢測的影響

沈 菁，陳 雯，林有東，黃程勇，伍嚴安

(福建醫科大學省立臨床醫學院檢驗科，福建福州350001)

不同容量一次性加樣針對全自動Addcare ELISA檢測的影響

沈 菁，陳 雯，林有東，黃程勇，伍嚴安

(福建醫科大學省立臨床醫學院檢驗科，福建福州350001)

目的評價不同容量一次性加樣針對全自動Addcare ELISA檢測結果的影響，特別是加樣量屬微量的試驗。方法分別用300μl和800μl的一次性加樣針分配純水10μl、50μl和100μl，稱重并計算相對誤差和精密度；各選一份HBsAg、抗-HBs、抗-HCV、抗-HEV IgM以及抗-HEV IgG室內定值弱陽性質控品，在全自動Addcare ELISA 600分析系統分別用300μl和800μl一次性加樣針進行檢測，計算該五個項目各孔間S/CO值和CV值，并進行統計學分析。結果兩種容量加樣針分配10μl、50μl和100μl純水的相對誤差E和精密度CV均達到移液器國家計量基準，使用300μl容量加10μl和50μl的準確度明顯優于800μl（P＜0.05），加100μl差異無統計學意義（P＞0.05），使用300μl容量三種加樣量的CV值均小于800μl；兩種容量加樣針檢測抗-HBs、抗-HCV和抗-HEV IgM的S/CO值有顯著差異（P＜0.05），HBsAg和抗-HEV IgG無顯著差異（P＞0.05），使用300μl容量加10μl項目各孔間S/CO值的CV值明顯小于800μl。結論不同容量一次性加樣針對加樣量10μl和50μl的檢測項目影響較為明顯，在使用全自動Addcare ELISA檢測時，應當選擇適當容量的加樣針以滿足微量樣本分配準確度和精密度的要求。

酶聯免疫吸附試驗；全自動；加樣針

酶聯免疫吸附試驗（ELISA）以其相對較高的靈敏度和特異性等特點，廣泛應用于臨床檢驗。近幾年，隨著科學技術的進步，實驗室酶免自動化檢測得到了快速的發展，各種新型的全自動酶免分析儀器不斷地推出。因其具備高通量、加樣準確、人為干預少等優點使操作過程標準化，被廣泛替代半自動和手工ELISA檢測[1-3]。但全自動酶免分析系統的加樣準確度和精確性與選用不同容量規格的一次性加樣針密切相關，特別是標本加樣量微量的檢測項目，樣本的加樣準確性對其最終檢測結果影響很大[4-6]。作者就此情況設計實驗來探討不同容量的一次性加樣針對常規檢測加樣量100μl的HBsAg、50μl的抗-HBs以及僅10μl的抗-HCV、抗-HEV IgM和抗-HEV IgG ELISA檢測的影響，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源北京康徹思坦生物技術有限公司生產的0.2IU/ml HBsAg、30mIU/ml抗-HBs、2NCU/ ml抗-HCV、2NCU/ml抗-HEV IgM和2NCU/ml抗-HEV IgG定值弱陽性血清標準物質。

1.2 儀器與試劑全自動酶免分析系統：煙臺艾德康生物科技有限公司產的Addcare ELISA 600。電子天平：美國Sartorius生產的1601A MP8-1型電子天平。英科新創（廈門）科技有限公司生產的HBsAg、抗-HBs以及抗-HCV ELISA試劑盒；上海科華生物工程有限公司生產的抗-HEV IgM和IgG ELISA試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 隨機選一個加樣通道分別用300μl和800μl容量一次性加樣針進行10μl、50μl以及100μl純水的分配，電子天平稱重，并計算其精密度和偏差。

1.3.2 用全自動酶免分析系統檢測HBsAg、抗-HBs、抗-HCV、抗-HEV IgM和抗-HEV IgG，每項使用同一試劑盒，分別用300μl和800μl容量一次性加樣針分配該項目定值弱陽性血清標準物質20孔檢測，計算每項目檢測結果的S/CO值和CV值。1.4統計學處理采用SPSS 20.0統計軟件計算加樣量均值±標準差（x±s）、均值相對誤差（E）和變異系數（CV），與移液器國家計量基準比較，并進行t檢驗；計算五項目檢測的S/CO均值及孔間精密度CV值，并進行t檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 進行分配純水時，兩種容量一次性加樣針的加樣精密度CV和均值相對誤差E均達到10μl、50μl以及100μl移液器國家計量基準。但使用300μl容量加10μl和50μl的準確度明顯優于800μl（t=2.996，P＜0.05；t=5.495，P＜0.05），加100μl差異無統計學意義（t=1.399，P＞0.05），使用300μl容量三種加樣量的CV值均小于800μl，結果見表1。

2.2 應用全自動酶免分析系統使用兩種容量一次性加樣針進行五個項目定值弱陽性質控品檢測。兩種容量加樣針檢測抗-HBs、抗-HCV和抗-HEV IgM的S/CO值的差異有統計學意義（t=3.593，P＜0.05；t=4.325，P＜0.05；t=3.528，P＜0.05）；HBsAg和抗-HEV IgG的S/CO值差異無統計學意義（t= 1.499，P＞0.05；t=0.81，P＞0.05），在加樣僅10μl項目檢測的S/CO值的孔間CV值使用300μl容量均明顯小于800μl，在加樣50μl和100μl項目兩種容量加樣針其CV值接近，結果見表2。

表1 兩種容量加樣針分配純水加樣量結果（n=10）

表2 兩種容量加樣針檢測五項目定值弱陽性質控品的S/CO值結果（n=20）

3 討論

ELISA試驗結果的質量受到多種因素的影響，微量加樣器是ELISA測定中必用的設備，微量加樣的準確性直接影響酶免疫測定的結果[7-10]。隨著ELISA檢測的自動化被廣泛應用，全自動酶免分析系統大大提高了酶免檢測的準確性和特異性。但實際工作中選用不同容量規格的加樣針都會對全自動酶免系統的加樣準確性和重復性產生影響[11-13]，有關此類報道較少。一般儀器廠家對全自動酶免樣本處理系統中使用不同規格的一次性加樣針移取液體最少量有嚴格要求[14]。目前國內臨床檢驗科，特別是采供血機構進行多項感染性疾病血清ELISA檢測時大都直接采用800μl或1000μl容量規格的一次性加樣針進行樣本分樣或加樣操作。而在感染性疾病血清ELISA檢測時樣本加樣量多數為10μl、50μl以及100μl，因此直接應用大容量加樣針進行微量加樣，其加樣準確度和精密度能否滿足實際工作要求應引起重視。

本實驗結果表明，應用全自動Addcare ELISA 600分析系統進行10μl、50μl以及100μl加樣時，雖然300μl和800μl容量一次性加樣針的加樣相對誤差和精密度均達到移液器國家計量基準，但使用300μl容量在10μl和50μl加樣的準確度明顯優于800μl，在100μl加樣的準確度和800μl的差異無統計學意義，且使用300μl容量三種加樣量的CV值均小于800μl。對常規感染性疾病血清ELISA加樣10μl、50μl以及100μl項目的檢測時，實驗結果顯示，使用兩種容量一次性加樣針在加樣10μl的抗-HCV和抗-HEV IgM以及加樣50μl的抗-HBs檢測的S/CO值有顯著差異，加樣100μl的HBsAg檢測的S/CO值無顯著性差異，在加樣50μl和100μl項目檢測的S/CO值的孔間CV值接近，但在加樣僅10μl項目時其孔間CV值使用300μl容量均明顯小于800μl。另有報道[5，15]全自動ELISA在進行微量加樣時除了不同容量加樣針的因素外，不同的加樣方式以及實驗室環境溫度對加樣的影響均會影響檢測結果。同時因全自動酶免分析系統能快速、高效處理大樣本所用的加樣通道多數為4通道以上，更加導致加樣時各孔間精密度變大，從而影響ELISA正確結果。

綜上所述，使用全自動酶免分析系統應當根據所檢測酶免項目的不同，從實驗耗時、耗材使用量以及加樣準確性等各方面綜合考慮，設計更適合的加樣參數和方法，特別是加樣量越小的檢測項目應當選擇小容量的一次性加樣針以滿足微量樣本分配準確度和精密度的要求，從而提高加樣的準確性，降低ELISA的系統誤差。同時必須定期進行儀器加樣精密度與準確度的校驗工作，為臨床提供更準確的檢測結果。

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R446.61

A

1674-1129(2017)01-0039-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.01.011

2016-09-02；

2017-01-11)

衛生部醫藥衛生科技發展研究中心，課題編號：28-1-2

沈菁，女，1973年生，學士，副主任技師，主要從事和研究臨床免疫，E-mail：slsj1973@126.com，Tel：13706966803

伍嚴安，女，1954年生，博士，主任醫師，主要研究臨床免疫和分子遺傳相關內容，E-mail：wyaslyy@12 6.com，Tel：13799917951