抗肺炎支原體IgG定性測定的室內質控物濃度的選擇和批間連續質控延續方法的建立

孔評石

(江蘇省第二中醫院檢驗科，江蘇南京210017)

·質量控制·

抗肺炎支原體IgG定性測定的室內質控物濃度的選擇和批間連續質控延續方法的建立

孔評石

(江蘇省第二中醫院檢驗科，江蘇南京210017)

目的建立抗肺炎支原體IgG定性測定的室內質控物濃度的選擇方法和批間連續質控的延續方法。方法選擇系列質控血清中S/CO值減去精密度測定中得到的3倍批間CV與該S/CO值的乘積仍大于1.0者用來監測試驗重復性，選擇S/CO處于1.5左右的質控血清以判斷試劑盒測定下限的有效性。使用新舊兩個批號試劑盒同時檢測系列質控血清得到線性回歸的直線方程，計算得到換算因子，用以將新批號試劑測定值換算至原批號試劑測定值，繼續使用原質控圖。結果通過實驗能夠選擇合適濃度的質控物用以判斷檢測重復性和試劑盒測定下限的有效性。能夠得到不同批號間質控測定的換算因子用以有效延續質控圖。結論通過上述方法能夠有效選擇抗肺炎支原體IgG定性測定的室內質控物濃度，并建立批間連續質控的延續方法。

肺炎支原體；酶聯免疫吸附試驗；室內質控

室內質控是保證臨床檢驗質量的基本要求，定量檢測現通常采用Levey-Jennings質控圖及Westgard質控法則進行室內控制。實際工作中不同的試劑生產廠家間或同一廠家不同批間的定性酶聯免疫吸附實驗(ELISA)測定試劑盒在檢測同一份樣本的吸光度值或S/CO值常會出現較大差異，導致試劑盒更換時室內質控無法繼續，從而使得定性ELISA檢測的室內質控成為難題[1，2]。通常定性ELISA檢測的質控依賴試劑盒本身自帶的陰性、陽性質控血清進行控制，但是因為試劑盒中設定的陽性對照物濃度較高，在監測試驗測定下限變化時靈敏度不足，所以需要選用外部對照物，即靠近陰陽臨界的弱陽性質控物來控制，但具體到各實驗室的多種定性ELISA檢測項目，究竟采用多少濃度的質控血清較為合適，有待建立指導規則；而對于用不同批號試劑進行連續的室內質控的問題，同樣需要建立合適的規則來解決。

抗肺炎支原體IgG(MPG)檢測是臨床上診斷支原體肺炎的重要依據之一，本室開展的定性MPG檢測為臨床提供診斷支持。作為定性實驗的MPGELISA檢測同樣面臨著上述的質控上的難題，即試劑盒配套陽性質控濃度過高和更換試劑盒時質控數據需要修正的問題。實驗室檢測的準確性要求必須保障嚴格的質量控制，為此我們通過查證文獻，結合試劑盒具體情況，建立了MPG-ELISA定性檢測弱陽性質控物的選擇方法及其室內質控在試劑不同批間連續進行的方法。

室內質控通過試劑盒檢測系列質控血清，通常的ELISA測定批間變異(CV%)需控制在15%左右，以往的研究[3-6]表明可選擇S/CO值減去在精密度測定中得到的3倍批間CV與該S/CO值的乘積(3SD)大于1.0的質控血清作為監測試驗重復性的質控物使用，同時選擇S/CO值處于1.5左右的質控血清用來判斷試劑盒每次測定時檢測下限的有效性。

同一質控物在不同批試劑的測定差異主要是由于測定下限及測定線性范圍的差異所致。根據試劑盒對一定范圍內低濃度樣本檢測結果呈線性相關的原理，研究表明[3-6]在更換試劑盒時，使用新舊試劑盒同時檢測上述系列質控血清，根據線性回歸得到直線方程，從而使新批號試劑盒檢測結果(S/CO)在其檢測線性范圍內與舊批號結果之間(S/CO)得到一特定換算因子，從而可以順利地將新批號試劑盒質控物測定值換算至原批號試劑測定值，即可繼續沿用原質控圖而不必重新開始，使批間質控延續的問題得到解決。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 MPG質控血清(含量分別為15，25，50，100，200IU/ml)，購于廣東亞輝龍生物技術有限公司，批號：201404-1。

1.1.2 MPG檢測ELISA試劑盒為廣東亞輝龍生物技術有限公司產品，試劑批號分別為201403-1和201405-2。

1.1.3 儀器美國BIO-RAD 680型酶標儀；BIORAD 1575型洗板機等。

1.2 方法

1.2.1 ELISA方法的精密度測定按MPG-ELISA試劑盒說明，按照NCCLS EP5文件[7]進行方法的精密度測定。

1.2.2 室內質控物濃度的確定首先用ELISA試劑盒測定上述系列MPG質控血清(4孔重復)，從測定S/CO值與濃度之間的關系可擬得一線性回歸直線方程y=ax+b。然后選擇計算得到的S/CO值減去前述精密度測定中得到的3倍批間CV與該S/ CO值的乘積(3SD)仍大于1的質控物作為判斷實驗室測定重復性的質控物用；同時選擇S/CO值在1.5左右的質控血清用以判斷每次測定時試劑盒的測定下限的有效性。

1.2.3 不同批次MPG試劑盒間檢測同一室內質控物在質控圖上做圖的延續：當更換新試劑盒時用新舊批號試劑盒同時測定上述系列質控血清及所選用室內質控血清，從系列質控血清的測定S/CO與其濃度之間的關系得到一新的線性回歸直線方程y2=a2x2+b2。當上述選定MPG質控帶入計算可得新試劑盒的y2與舊試劑盒試劑y1之間的換算關系。從而可將新批號試劑測定同一濃度質控血清所得的S/CO換算回舊試劑所測的S/CO值，即可仍在原圖作圖。

2 結果

2.1 測定方法的精密度見表1。

表1 MPG ELISA測定方法的精密度

2.2 MPG-ELISA室內質控物濃度的選擇重復4孔測定上述系列(含量分別為0，15，25，50，100，200 IU/ml)質控血清所得結果及回歸直線方程見表2。

為盡可能適應方法學的測定線性范圍，以取前6個點所得回歸直線的相關系數最好，從而得到直線方程y=0.0376x-0.1008，如圖1。

表2 系列MPG質控血清測定結果(S/CO)及回歸直戲方程

圖1 質控物濃度與S/CO的直線回歸

分別以血清濃度15、25、50、100、200IU/ml代入方程，計算S/CO值為0.463、0.839、1.779、3.659、7.419。選擇其中S/CO大于1.0的三個控制物帶入計算，根據前面精密度評價中50IU/ml質控物批間CV為7.59%，可知該質控物得值1.779－3×1.779× 7.59%=1.374，大于1.0，因此可作為室內質控使用。而100IU/ml和200IU/ml的質控物雖然能滿足該方法測定線性范圍的要求可以作為室內質控評價測定重復性使用，但二者離Cut-Off值距離更遠一些。而50IU/ml質控物的S/CO值接近1.5，離Cut-Off值較近，兼具有判斷試驗重復性和檢測下限兩種功能，因而可以確定為較理想的定性質控濃度。2.3不同試劑盒間室內質控圖作圖的延續按照以上對系列質控血清精密度測定的評價數據可以擬合該批試劑的直線回歸方程。在更換新試劑盒后按前述方法測定系列質控血清再次得到類似的回歸直線方程，見表3。

兩試劑前4點，5點或前6點的相關性均較好，故可取前6分別得回歸直線方程y1=0.393x2-0.126(201403-1批)和y2=0.0376x1-0.1008 (201405-2批)。取質控物含量x＝50IU/ml，得到y1= 1.834和y2=1.779，那么y2/y1=0.970，即作為新的試劑盒對室內質控物測定值(S/CO)與前一批試劑盒的換算因子，用新批號（201405-2批）試劑測值乘以該換算因子所得結果，即可在原質控圖上延續作圖。

表3 不同批號MPG試劑間回歸直線方程的比較

3 討論

臨床實驗室使用的諸多定性ELISA試劑盒自帶的陰性、陽性對照物僅能監測其試驗的有效性，而無法監測試驗靈敏性和檢測下限的變化，所以需要使用外部弱陽性質控血清進行室內質控，科學地選擇質控物濃度以保證檢驗的準確性。通常要求ELISA測定的批間變異(CV)在15%左右，故可選擇S/CO值減去精密度測定中得到的3倍批間CV與該S/CO值的乘積仍大于1的質控血清作為判斷試驗重復性的室內質控用，同時選擇S/CO處于1.5左右的質控血清用以評價試劑盒測定下限的有效性。在本文的設計中我們通過計算得到了MPG質控物的批間變異和直線回歸方程及相關系數，確定了50IU/ml作為該定性實驗的質控物，同時兼具對檢測下限的監控作用。在日常的MPG測定中其測值波動表明臨界值附近的樣品有可能被誤判而出現假陽性、假陰性。因而必須通過以上規則合理的選擇質控物濃度才能夠更有效地監控試驗的重復性及靈敏性，從而保證實驗的準確性。

室內質量控制不僅用來監測實驗的重復性，而且可以反映實驗的準確度[3]，因此室內質控是質量控制的核心。通常定性ELISA測定以S/CO比值表示結果，與定量測定結果的絕對濃度不同，S/CO只是相對的比值，因而同一濃度質控物在使用不同測定下限的廠家試劑盒或同一廠家但批號不同的試劑檢測時其結果的差異可能發生較大變化[8]，導致實驗室使用的Levey-Jennings質控圖對定性ELISA測定的質控難以不間斷連續。為此諸多實驗室通常采取Crubbs氏“即刻法”進行質控[9]，但這種質控方法有其固有的缺陷，即受前3個測定值影響較大，導致出現原先在控的結果在經歷20次后反溯回去又變為失控的現象，此外該方法無法呈現直觀的質控圖[10]。我們在工作中參考相關研究結果，確認同一質控物經不同批次試劑測定的差異主要是由于測定下限及測定線性范圍的差異所致，以及根據試劑盒對一定范圍內低濃度樣本檢測結果呈線性相關的原理，在更換新批次MPGELISA試劑盒時使用新舊兩個批號試劑盒同時檢測系列質控血清，通過擬合線性回歸所得的直線方程，得到新、舊批號試劑盒檢測結果(S/CO)在其檢測線性范圍內的換算因子，從而可以準確地將新試劑盒測定值換算至原試劑測定值，保持原質控圖在批間延續。

[1]萬臘根，鞠北華，李俊明.ELISA法檢測HBsAg室內質控方法及結果分析[J].實驗與檢驗醫學，2009，27(4)：354-356.

[2]楊亮，杜勇.ELISA室內質控累積均值建立質控圖框架的應用探討[J].中國輸血雜志，2013，26(9)：821-822.

[3]李金明，王露楠，徐錫霞，等.室內質量控制對乙型肝炎表面抗原測定準確度的影響[J].中華檢驗醫學雜志，2001，24(3)：255.

[4]Gray JJ，Wreghitt TG，McKee TA，et al.Internal quality assurance in a clinical virology laboratoryⅡ.Internal quality control[J].J Clin Pathol，1995，48：198-202.

[5]Green GA，Carey RN，Westgard JO，et al.Quality control for qualitative assays：quantitative QC procedure designed to assure analytical quality required for an ELISA of hepatitis B surface antigen[J]. Clin chem，1997，43：1618-1621.

[6]李金明.臨床酶免疫測定技術[M].北京：人民軍醫出版社，2005：168.

[7]馮仁豐.臨床檢驗質量管理技術基礎[M].第2版.上海：上海科學技術文獻出版社，2007：92-93.

[8]熊麗紅，楊莉娜，郭新宇，等.第三代與第四代ELISA試劑檢測抗HCV結果的差異性分析[J].實驗與檢驗醫學，2015，33(6)：733-735.

[9]秦嘵光.如何正確理解和使用“即刻性”質控法[J].中華檢驗醫學雜志，2006，29(2)：190-192.

[10]王玲玲，汪全民，董玲鳳.探討“即刻法”在ELISA室內質控應用中的局限性[J].實驗與檢驗醫學，2008，26(6)：703-705.

R446.62，R375+.2

A

1674-1129(2017)01-0068-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.01.020

2016-08-24；

2016-11-08)