化學發光檢測乙肝表面抗原剩余試劑再利用評價

于淼琛，潘立陽，朱 鴻

(1、大連醫科大學附屬第一醫院檢驗科，遼寧大連116011；2、大連市疾病預防控制中心傳染病地方病防制所，遼寧大連116011)

化學發光檢測乙肝表面抗原剩余試劑再利用評價

于淼琛1，潘立陽2，朱 鴻1

(1、大連醫科大學附屬第一醫院檢驗科，遼寧大連116011；2、大連市疾病預防控制中心傳染病地方病防制所，遼寧大連116011)

目的對雅培i2000化學發光儀剩余試劑再利用進行評估。方法將HBsAg的混合剩余試劑，進行精密度、正確度、并與新試劑進行比對及相關性分析。結果批內精密度分別是4.77、5.48，批間精密度分別是8.86、5.78；正確度本室測定結果與室間質評回報結果均相符；相關系數r為0.9979；HBsAg兩試劑盒的陽性符合率（%）、陰性符合率（%）均為100%。結論雅培i2000化學發光儀剩余試劑可以混合使用，穩定性良好，能保證檢測質量。

雅培i2000；剩余試劑再利用；化學發光

雅培i2000全自動化學發光免疫分析儀應用臨床以來，重復性好，故障率低，結果可靠穩定[1-3]，逐步取代了傳統的ELISA方法。但是由于配套試劑均為進口試劑，價格相對較高，試劑剩余量大，為了節約成本，本實驗室將相同批號的剩余試劑混合，并對其性能進行驗證評價。

1 材料與方法

1.1 標本來源標本來源于大連醫科大學附屬第一醫院住院患者的無溶血、無乳糜血清。

1.2 儀器與試劑雅培i2000全自動化學發光免疫分析儀。將試劑瓶剩余試劑輕輕充分混勻，倒入另一臺儀器用完的試劑瓶內，輕輕混勻，注意不要產生氣泡，成為一盒新的“混合”試劑。配套校準品及質控品。

1.3 方法

1.3.1 精密度驗證依據EP15-A2[4]，選擇兩個水平的混合血清（弱陽性、陽性血清），連續檢測20次，計算批內精密度，批內精密度≤1/4允許總誤差（TEa）；使用2個水平的質控品（弱陽性、陽性），每天取出兩個水平的樣品各一支，在常規條件下各測定1次，連續測定20天，計算批間精密度，批間精密度≤1/3允許總誤差（TEa）。

1.3.2 正確度驗證用室間質評的質控物測定，判斷測定結果與室間質評回報結果符合性。

1.3.3 比對試驗

1.3.3.1 比對分析依據EP9-A2[5]，實驗周期不少于5天，至少做20份病人樣品（如每天至少做4份病人標本）。盡可能使50%的實驗樣品分析物的含量在參考區間外、可報告范圍內。比對實驗盡量在2個小時內檢測完成，將樣品按1、2、3、4的順序排列先測一遍，然后將順序倒過來做第二次測定。將新試劑盒的結果與混合試劑盒的結果作比較。計算回歸方程：Y=ax+b，a值在1±0.03范圍內，相關系數r≥0.975[6]。

1.3.3.2 符合率選擇10份陰性標本（其它標志物陽性的4份以上）、10份陽性標本（至少弱陽性5份、強陽性1份），使用混合試劑盒和新試劑盒分別檢測HBsAg，計算兩試劑盒的符合率，評價比對結果的可接受性。

1.3.4 相關性分析HBsAg新試劑盒測定值的平均值為X，混合試劑盒測定值平均值為Y[6]，用相關系數(r)對相關性作評估，若r≥0.975或r2≥0.95，則認為X范圍合適，兩試劑的相關性好，直線回歸統計的斜率和截距可靠。計算線性回歸方程：Y=aX+b。

2 結果

2.1 精密度驗證HBsAg檢測批內精密度和批間精密度結果均合格，見表1。

表1 HBsAg精密度驗證結果

2.2 正確度驗證測定結果與室間質評回報結果均一致，判斷結果符合，見表2。

2.3.1 相關性分析回歸方程Y=0.1.0069X-0.9967，相關系數r=0.9979[7]，見圖1。

2.3.2 定性項目HBsAg兩試劑盒的符合率，陽性符合率（%）、陰性符合率（%）均可接受，見表3。

表2 正確度驗證結果

圖1 HBsAg相關性

表3 HBsAg的符合率

3 討論

雅培i2000全自動化學發光免疫分析儀檢測試劑用完后，試劑瓶內雖有剩余試劑，但儀器不會再進行檢測，但剩余試劑量卻超過了50%[8]?；瘜W發光儀器試劑價格昂貴，如將剩余試劑棄之不用，將造成極大的浪費[9]。為了使剩余試劑在儀器上的分析結果具有可比性，必須要對檢測結果進行比對[10-12]?；旌鲜Ｓ嘣噭┑幕旌显噭┙洷緦嶒炇因炞C，重復性及準確性均可靠。HBsAg新試劑盒和剩余試劑混合試劑盒的比對結果，回歸方程良好，相關系數r=0.9979，說明兩試劑盒高度正相關，且相關性都良好[13]。

由于檢測標本量大，且2臺雅培i2000全自動化學發光免疫分析儀同時進行，在工作結束后，崗位人員負責將今日的剩余試劑混合且做好標注，放入另一臺儀器明日備用。第二天檢測質控合格后，才能進行正常標本檢測。如當日質控失控，應查找原因，重新復測質控品，質控合格方能進行正常標本檢測；如質控還是失控，不能用此混合試劑檢測標本，要棄去此混合試劑。剩余混合試劑放入另一臺儀器后，儀器掃描條碼后，默認為新盒試劑，儀器庫存為“500TEST”，根據經驗2瓶剩余混合試劑檢測標本量大概為80TEST。

對于HBsAg剩余混合試劑檢測陽性標本，用金標法復查，如結果相符，則可正常審發報告，若不相符，則應使用新盒試劑重新檢測；對于HBsAg剩余混合試劑檢測弱陽性標本，則應使用新盒試劑重新檢測，如結果相符，則可正常審發報告，若不相符，則應使用患者生化室檢測血液使用新盒試劑重新檢測，如有必要，直接檢測患者血樣HBV-DNA。

根據配套校準品說明書，同批號試劑可定標一次，穩定期為30d，所以剩余試劑可不需再定標[14]。經本實驗室驗證，在日常工作中，可將雅培i2000全自動化學發光免疫分析儀上使用的HBsAg試劑剩余混合用于檢測，其與原裝檢測試劑的檢測結果具有可比性，在嚴格按說明書保存及規定有效期內使用的前提下，既保證了檢驗質量，又能有效節約成本，值得推廣[15]。

[1]張保平，董莉，馮新平，等.雅培ARCHITECT i2000化學發光儀測定6種腫瘤標記物項目的方法學性能評價[J].國際檢驗醫學雜志，2011，32(4)：488-490.

[2]Gacouin A，Roussel M，Gros A，et al.Chronic alcohol exposure，infection，extended circulating white blood cells differentiated by flow cytometry and neutrophil CD64 expression：aprospective，descriptive study of critically ill medical patients[J].Ann Intensive Care，2012，2(1)：50.

[3]趙喬妹，張靜，劉英麗，等.不同化學發光分析系統檢測丙型肝炎病毒抗體的性能評價[J].標記免疫分析與臨床，2015，22(4)：345-351.

[4]Clinical and Laboratory Standards Institute.EP15-A2.Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods.[S]. Wayne，PA，USA：CLSI，2000.

[5]National Committee for Clinieal Laboratory Standards.EP9-A2 Method Comparison and BiasEstimation Using patient Samples[S]. Wayne，PA：NCCLS，2002.

[6]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures[S].CLSI EP6-A2.2003.

[7]NCCLS.EP6-P-2002 Evalution of the linearity of quantitative analytical methods[S].2002.

[8]劉振杰，鐘偉國，曹永堅，等.關于全自動電化學發光免疫分析儀HCV剩余試劑再利用的研究[J].職業與健康，2015，31(8)：1114-1119.

[9]朱波，沈偉，黃家勤，等.ARCHITECT I2000SR化學發光儀甲胎蛋白殘留試劑再利用性能評估[J].國際檢驗醫學雜志，2013，34(24)：3397-3399.

[10]張敏，徐敬然，壽爽，等.SYSMEX CS-5100和SYSMEX CA-7000血凝分析儀檢測結果的比對分析[J].檢驗醫學與臨床，2015，8(33)：444-446.

[11]盧志芳，楊先凱，李鳳俠，等.室間不同生化檢測系統結果可比性探討[J].實驗與檢驗醫學，2014，32(1)：34-36.

[12]陳海明，王前明，趙元勛，等.日立7600全自動生化分析儀的分析性能驗證[J].國際檢驗醫學雜志，2015，36(20)：2983-2986.

[13]于淼琛，李士軍，孫國華，等.生化部分常規項目干濕化學檢測結果一致性分析[J].大連醫科大學學報，2016，38(2)：172-176.

[14]張愛民，張桂芬.雅培i2000全自動電化學發光免疫分析儀剩余試劑檢測結果分析[J].醫療衛生裝備，2015，36(10)：100-102.

[15]彭德珍，林武洲.應用質控品對羅氏混合回收試劑穩定性的觀察[J].檢驗醫學與臨床，2010，7(4)：343-344.

R512.6+3，R446.62

A

1674-1129(2017)01-0071-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.01.021

2016-08-10；

2016-11-24)

朱鴻，女，主任技師，主要從事臨床免疫學方面的研究。