微柱法結合鹽水試管法檢測ABO血型弱抗體

焦芳艷，呂岳峰，尹鐵球，楊麗華

(湖南省第二人民醫(yī)院，1、臨床檢驗中心；2、檢驗科，湖南長沙410007)

微柱法結合鹽水試管法檢測ABO血型弱抗體

焦芳艷1，呂岳峰1，尹鐵球2，楊麗華1

(湖南省第二人民醫(yī)院，1、臨床檢驗中心；2、檢驗科，湖南長沙410007)

目的探討微柱法結合鹽水凝集試管法在鑒定ABO中血型弱抗體的有效性。方法按照《臨床實驗室室間質評要求》（GB/20032301－T－361）統計全省室間質評201405批號的結果；現場采用微柱凝膠免疫卡法、鹽水試管法及鹽水試管4℃冰箱15min的方法檢測201405批號的質評標本。結果2014年ABO血型質評標本201405號，全省質評統計結果為試管法檢出率41.2%、微柱凝膠法檢出率36.2%；現場檢測結果為微柱法檢出率36.8%、鹽水試管法檢出率60%和鹽水試管法4℃15min檢出率95%。結論檢測ABO血型弱抗體采用微柱凝膠法結合鹽水試管法尤其鹽水試管放入4°C冰箱15min的方法是一種簡單易行的方法。

ABO血型；弱抗體；試管法；微柱凝膠卡法

ABO血型正確鑒定是臨床安全輸血的關鍵，在臨床及血站鑒定血型過程中，弱抗原抗體是導致ABO血型鑒定結果出現正反定型不符或錯誤一個重要原因。據有關報道自身存在抗原抗體減弱情況約占臨床疑難血型35%以上[1]，臨床多資料[2－6]顯示抗體減弱多常見。目前，微柱凝膠免疫卡廣泛應用于臨床，而且據筆者了解到，普遍認為這種方法可以代替鹽水法。然而，據多資料[1，2，7－9]顯示檢測ABO弱抗原抗體微柱法有一定的局限性，用微柱凝膠法結合鹽水試管法結果更準確。筆者通過我省質評資料和現場檢測用這兩種方法對ABO血型弱抗體進行比較分析如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源201405標本由北京金豪制藥有限股份公司提供，B型血漿（＞30秒）抗A(2+)，抗B（－）。

1.2 現場檢測試劑微柱凝膠法均為長春博訊公司，試管法紅細胞懸液廠家為上海血液生物醫(yī)藥有限公司（除實驗室5外）。

1.3 方法數據統計按照《臨床實驗室室間質評要求》（GB/20032301－T－361）標準。現場檢測采用微柱凝膠免疫卡法、鹽水試管法及鹽水試管4℃冰箱15min的方法檢測201405號質評標本。

1.4 統計學方法采用SPSS 18.0軟件及科臨易檢統計軟件進行統計學分析，計數資料采用百分比表示，不同方法間檢出率的比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2014年全省實驗室對弱抗體標本血型鑒定準確率情況2014年第一次血型質評，其中201405批號標本采用了抗A弱凝集抗體（B型血漿），來初步了解全省對弱抗體血型鑒定的情況。通過統計，結果見表1。

表1 全省實驗室對弱抗體血型鑒定準確率統計

從表1看出，此批號標本全省實驗室的符合率36.7%，誤判成AB型占63%。

2.2 血型鑒定方法結果統計全省實驗室采用試管法和微柱法兩種方法的檢測數據見表2。

表2 全省實驗室血型鑒定不同的方法結果統計

結果顯示，微柱凝膠卡結果符合率36.2%、鹽水試管法結果符合率41.2%，后者稍高于前者。

2.3 20家醫(yī)院對同一標本現場檢測鑒于以上情況，本室采用質評標本201405號在20家醫(yī)院實驗室進行了現場檢測，現場檢測按全國操作規(guī)程[10]和產品說明書要求操作，檢測結果見表3。

表3 同一批次標本20家醫(yī)院現場檢測結果數據統計

結果顯示，微柱法結果檢出率：36.8%，鹽水試管法檢出率60%，鹽水試管法放入4°C冰箱檢出率95%.采用SPSS 18.0軟件進行統計學分析，結果表明鹽水試管法（反定型）4°C冰箱15min測定準確率顯著高于其它兩種方法(χ2=14.632，P=0.001)，差異具有統計學意義（P＜0.05）。

3 討論

從表2顯示微柱凝膠卡法（36.2%）稍低于鹽水試管法（41.2%）。從表3現場檢測結果來看：鹽水試管法放入4°C冰箱符合率高達95%，而且凝集明顯強于微柱凝膠卡法和鹽水試管法（常規(guī)實驗室溫度），證實用鹽水試管法尤其鹽水試管法放入4°C冰箱的方法比微柱卡法檢測弱抗體更有效。其與多個文獻資料[2，7－9]相一致。

本統計數據表明，微柱凝膠技術對弱ABO抗體反應凝集減弱或檢測不出來，而用鹽水法及鹽水法放入4°C 15min后結果檢出率高，其原因可能為，首先是全省各實驗室、儀器、試劑、操作人員及態(tài)度等差別，其次可能因為紅細胞抗原與相應抗體反應是一種可逆的過程，這種反應取決于抗原抗體的結合強度，當紅細胞抗原抗體結合強度弱，在微柱凝膠卡技術試驗過程中，離心產生的切應力超過親合力，抗體依賴的紅細胞凝集就被分開，從而出現假陰性結果[11，12]。然而鹽水試管法，紅細胞抗原抗體發(fā)生反應后，由于沒有受到微柱凝膠卡技術中切應力和紅細胞非正常負電荷間的排斥力的影響，紅細胞抗原抗體結合后，相對比較穩(wěn)定[8]。而且微柱凝膠血型卡，由于微柱凝膠孔體積小，加樣量小，反應時間短(立即離心)，當血型抗原或抗體水平減低時，也會造成不凝集的假陰性結果[5]。試管法可以在不同溫度放置在不同時間，反復離心，這樣能避免凝膠血型卡離心后無法再用的缺點[5]。

鹽水試管法放入4℃冰箱15min后凝聚會加強，其原因為ABO血型抗體為IgM類抗體，在4℃時反應較強[13]，正反定型試驗時，可以通過增加反應時間或在4℃下放置5～10min后再離心觀察結果[14]，可得到更為準確的血型結果。

在現場檢測鹽水試管法4℃冰箱15min中有一家實驗室得出AB型的錯誤結果，因實驗室自配試劑所取紅細胞懸液只隨機采取兩人健康成人血液，且配置時間已過七天，說明血型鑒定試劑的質量也是確保實驗正確的重要因素。

正確的ABO血型鑒定是臨床輸血安全的重要保障，在我們平常鑒定血型的工作中應該端正態(tài)度，養(yǎng)成認真仔細的工作習慣，碰到ABO疑難血型最好多種方法驗證。

[1]王里榮，許立，李育，等.微珠凝集法ABO血型正反定型不一致原因分析[J].浙江臨床醫(yī)學，2004，6（11）：1016－1017.

[2]劉明霞.微柱凝膠免疫檢測ABO血型的局限性及其與鹽水試管法判定血型的結合應用[J].中國誤診學雜志，2010，3(11)：1595－1596.

[3]胡曙光.微柱凝膠法檢測ABO血型正反定型不符23例原因分析[J].中國保健營養(yǎng)，2014，07(下)：4381－4382.

[4]徐新蓉，龔國富.微柱凝膠法檢測ABO血型正反定型不符的原因分析與處理[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2012，1.9（2）：226－228.

[5]陳玲.53例微柱凝膠卡氏法ABO正反定型不符原因的分析[J].臨床輸血與檢驗，2011，10.13（4）：359－360.

[6]李進才，吳樹.53例ABO血型正反定型不符抗體檢測情況分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2010，9（18）：2002－2003.

[7]郭黠，蒯迪文.微柱法結合鹽水凝集試管法鑒定ABO疑難血型[J].醫(yī)學臨床研究，2011，11.28（11）：2205－2207.

[8]劉景春，車嘉琳，鄒文濤，等.三種方法檢測弱抗體抗原反應效果分析[J].ISSN1007－8738細胞與分子免疫學雜志，2008，24(8)：836－837.

[9]鄭瓊珍，單桂秋，陳雨蔚，等.微柱凝膠法配血試驗的局限性[J].臨床輸血與檢驗，2012，4.14（2）：177－178.

[10]葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].第3版.南京：東南大學出版社，2006：246－265.

[11]Phillips P，Voak D，Knowles S，et al.An explanation and the clinical significance of the failure of microcllum tests to detectweak ABO and other antibodies[J].transfus Med，1997，7(1)：47－53.

[12]Cummins D，Downham B.Failure of DiaMed ID microcolum system to detect major ABO incompatibility[J].Lancet，1994，343 (8913)：1649－1650.

[13]劉景漢，蘭炯采.輸血免疫血液學實驗技術[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：62.

[14]丁敏，許飛.ABO血型正反定型不符的原因分析及處理方法[J].吉林醫(yī)學，2012，12 33(35)：7739－7740.

R193.3，R457.1+1

A

1674－1129(2017)01－0124－02

10.3969/j.issn.1674－1129.2017.01.043

2016－08－11；

2016－11－25)