試論聯用在線凝膠滲透色譜-氣相色譜-三重四極桿質譜測定毒鼠強的效果

勞 哲，江恩源

（梧州市疾病預防控制中心,廣西 梧州 543002）

試論聯用在線凝膠滲透色譜-氣相色譜-三重四極桿質譜測定毒鼠強的效果

勞 哲，江恩源

（梧州市疾病預防控制中心,廣西 梧州 543002）

目的：研究聯用在線凝膠滲透色譜-氣相色譜-三重四極桿質譜（GPC-GC-MS/MS）測定液、固體樣品中毒鼠強含量的效果。方法：將毒鼠強標準系列溶液中的6個特征離子（m/z 240、m/z 212、m/z 132、m/z121、m/z132、m/z149）作為母離子，使用3V～45V的電壓對其進行碰撞處理，經產物離子優化后得到離子豐度較高的 6個離子對（212→132； 212→92；240→212；240→149；132→105；212→200）。將離子對豐度最高的離子對（212→132）作為定量離子對，將其余5個離子對作為定性離子對設為多反應監測（MRM）參數。標準液與樣品同時進行提取、純化、濃縮、定容，然后進行測定。結果：標準曲線為: y=215232.7x+31 x+31，r=0.9996，回收率為：98.7%，RSD =4.5%，液體樣品的檢出限為0.00001mg/L，固體樣品的檢出限為0.00002mg/kg。結論：聯用在線凝膠滲透色譜-氣相色譜-三重四極桿質譜測定毒鼠強標準系列溶液具有高效、準確性好、檢出限低的特點。

毒鼠強；準系列溶液；在線凝膠滲透色譜-氣相色譜-三重四極桿質譜；多反應監測

目前，臨床上測定毒鼠強的方法主要有GC[1]、GCMS[2]和GC-MS/MS[3]。不過，用上述方法測定毒鼠強的效果均不理想。在本文中，筆者聯用在線凝膠滲透色譜-氣相色譜-三重四極桿質譜對毒鼠強的標準系列溶液進行測定，取得了很好的效果。研究發現[4]，用在線凝膠滲透色譜-氣相色譜-三重四極桿質譜對毒鼠強的標準系列溶液進行測定，可直接注入GPC，而且經過GPC在線分離脂肪和色素后，可直接將純化后的待測液經大體積進樣器（PTV）注入到GC-MS/MS中進行測定，從而大大縮短檢測的時間，降低MS受到污染的幾率。同時，本次實驗采用多反應監測模式（MRM）中的高選擇性準確定量法[5]對毒鼠強的標準系列溶液及樣品進行測定，并將檢測的過程與選擇性離子檢測模式（SIM）的定量方法[6]進行了比較和分析。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

在線凝膠滲透色譜-氣相色譜-三重四極桿質譜聯用儀GPC-GCMS-TQ8030（由日本島津公司生產）；GPC色譜柱：Shodex-EV-200（2.0mmID*150mm，5μm）；GC毛細管色譜柱；Rxi-5 Sil MS（30 m × 0.25 mm，0.25 μm）；N1氮吹儀（產自上海屹堯）；毒鼠強標準溶液，濃度為：1.0mg /ml（由中國預防醫學科學院中毒控制中心提供，批號為∶ 201605號）；乙酸乙酯（色譜純）；無水硫酸鈉（分析純）。

1.2 檢測的條件

1.2.1 GPC的條件 A泵流速為：0.10mL/min；B泵流速為：0.10mL/min；A、B泵的流動相為：丙酮為：環己烷=3∶7；氘燈波長為：210nm；檢測池的溫度為：40℃；氟胺氰菊酯的保留時間為：3.36min。

1.2.2 GC的條件 載氣為∶高純氦氣;柱流速為∶2.10ml /min;大體積進樣器（PTV）進樣口升溫的程序為：初始溫度為120℃（保持0 min），以100℃ /min 的速度升溫至180℃（保持4.40 min），以﹣49.8 ℃ /min的速度降溫至120 ℃（保持18.80 min）；柱溫箱升溫的程序為：初始溫度為82 ℃（保持5.00min），以8℃ /min的速度升溫至180 ℃（保持0 min），以50℃ /min 的速度升溫至300 ℃（保持5.35 min）；進樣量為∶10.0μl，不進行分流進樣[7]。

1.2.3 進行選擇性離子檢測（SIM）的條件 EI 源的溫度為∶200 ℃; MS連接口的溫度為：300℃；溶劑延遲的時間為∶ 9.70 min;檢測器的電壓為：0.1kV；間隔為∶0.30 amu；掃描的速度為∶ 2000 ms；閾值為∶1000。SCAN的質量范圍為∶m/z 86～m/z 600。SIM的離子設定為∶ 選取特征離子中相對離子對豐度最高的m/z 240作為定量離子， 將m/z 212、m/z 132、m/z121、m/z132、m/z149作為定性離子。

1.2.4 多反應監測模式（MRM）的條件 檢測器的電壓為：0.10kV；間隔為∶0.30 amu；閾值為∶1000。碰撞氣為：高純氬氣；經優化產物離子后得到離子豐度較高的 6個離子對與相應的最佳碰撞電壓為：212→132，CE9V；212→92，CE12V； 240→212，CE12V； 240→149，CE9V；132→105，CE6V；212→200，CE3V。將相對離子對豐度最高的離子對（212→132）作為定量離子對，將其余5個離子對（212→92；240→212；240→149；132→105；212→200）作為定性離子對。

1.3 檢測方法

1.3.1 毒鼠強標準系列溶液的配置 分別配制毒鼠強標準系列溶液，其濃度分別為∶ 0.000 1μg/ml、0.000 5μg/ml、0.001μg/ml、0.005μg/ml、0.01μg/ml、0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.50μg/ml、1.00μg/ml。

1.3.2 樣品的處理 取固體樣品5 g、液體樣品（包括血液樣品）10 ml置于50ml的塑料離心管中，然后加入乙酸乙酯10 ml，進行漩渦振蕩提取 3 min，進行5000 r/min的離心處理5 min，再取出上層的乙酸乙酯提取液。用加有無水硫酸鈉的濾紙將提取液過濾到另一支50ml的塑料離心管中，并再次對其進行提取（步驟同上）。完成提取后，用2 ml的乙酸乙酯沖洗濾紙，并將沖洗液與濾出液合并，放入氮吹儀中（設定水溫為45℃）濃縮至約5 ml。用注射器吸取濃縮液，將其推過抽濾頭（0.22μm濾膜），最后將此濾出液用氮吹儀（設定水溫45℃）濃縮至近干，用乙酸乙酯將其準確定容至1.00mL[8]。

2 結果

2.1 SIM的測定結果

將標準系列與樣品以相同的條件經過GPC裝置分別進樣10μL，得到數據圖譜后用定量離子的峰面積y和對應的濃度x（μg/L）繪制標準曲線，把樣品數據圖譜中定量離子的峰面積、稀釋體積、取樣量輸入工作站，經計算后得出樣品中的毒鼠強濃度。當毒鼠強標準溶液濃度的范圍為0.000 1μg/ml～1.00μg/ml時，其響應值與濃度呈正相關，色譜峰的保留時間為18.161 min，標準曲線為y=136594.2x+5926，r=0.998 2，回收率為92.5%。液體樣品的檢出限為0.0005mg/L，固體樣品的檢出限為0.001mg/kg。

2.2 MRM的測定結果

當毒鼠強標準溶液濃度的范圍為0.000 1μg/ml～1.00μg/ml時，其響應值與濃度呈正相關，色譜峰的保留時間為18.170 min，標準曲線為∶ y=215232.7x+3169，r=0.999 1，回收率為98.1%。液體樣品的檢出限為0.00001mg/L，固體樣品的檢出限為0.00002mg/kg。實驗結果證明MRM方法比SIM方法的檢出限低了50倍，檢測的靈敏度更高。

2.3 MRM測定的精密度和樣品加標回收率實驗的結果

取9份陽性洗胃水（每份10mL）。對其中6 份進行平行樣和精密度實驗，RSD =4.5%；將其中3份分別加入標準溶液25μl、50 μl、100 μl（標準溶液的濃度為1. 00μg /ml），然后進行漩渦振蕩 1 min。按照1.3.2中的方法對樣品進行處理，按照1.2.4中的方法對樣品進行測定。結果顯示，三份樣品的回收率分別為96.2%、103.1%、97.9%。

3 討論

在線凝膠滲透色譜（GPC）技術是測定高分子材料分子量及分布特點最快、最有效的方法[9]。該技術可根據不同分子的尺寸，用GPC色譜柱將脂肪和色素從毒鼠強中分離出來，同時用線流路切換閥將毒鼠強的分子捕集在捕集環路中，再注入GC-MS/MS進行測定。將在線凝膠滲透色譜-氣相色譜-三重四極桿質譜聯合使用檢測毒鼠強標準系列溶液，大大縮短了檢測的用時，省去了很多前期處理的復雜步驟，而且減少了對樣品和MS的污染，因此十分符合臨床上快速、準確檢測液、固體樣品中毒鼠強含量的要求。

總之，聯用在線凝膠滲透色譜-氣相色譜-三重四極桿質譜測定毒鼠強標準系列溶液具有快速、高效、靈敏度高、準確性好、檢出限低的特點。此方法值得推廣使用。

[1] 孫磊龍,楊志華. 氣相色譜法測定中毒樣品中的毒鼠強[J]. 海峽預防醫學雜志,2011,04（3）:47-48.

[2] 梁曉聰,王瑋,郭蓉,等.氣相色譜-質譜法同時測定食物中毒樣品中氟乙酰胺與毒鼠強[J]. 中國衛生檢驗雜志,2015,20（8）:3457-3459+3462.

[3] 符展明,鮑建國,金米聰,等. GC/MS/MS法測定中毒樣品中毒鼠強的研究[J]. 中國衛生檢驗雜志,2003,03（6）:285-286.

[4] 趙琳,張曉波,任紅波,等.在線GPC-氣相色譜-質譜聯用測定玉米中莠去津、乙草胺和2,4-滴丁酯殘留[J]. 農藥科學與管理,2013,05（5）:35-39.

[5] 陳小萍,趙道輝,林國斌,等. 微量毒鼠強GC/PFPD和GC/MS/MS分析條件研究[J]. 海峽預防醫學雜志,2003,06（12）:11-13.

[6] 張學,朱建民,朱福源,等. 固相萃取-氣相色譜-質譜法同時測定復雜基質中的氟乙酰胺和毒鼠強[J]. 中國衛生檢驗雜志,2015,11（4）:1743-1745+1753.

[7] 沈平,彭進,謝朝梅,等. GC-MS同時檢測食品中多種常見毒物的方法研究[J]. 中國衛生檢驗雜志,2011,04（9）:781-784+787.

[8] 陳蓓,劉華良,榮維廣,等. 氣相色譜-質譜法同時檢測食物中的氟乙酰胺與毒鼠強方法研究[J]. 中國食品衛生雜志,2012,06（6）:539-542.

[9] 何智慧,練文柳,蔣臘梅,等. GPC-氣相色譜質譜法測定卷煙主流煙氣中的苯并[a]芘[J]. 湖南文理學院學報(自然科學版),2009,01（4）:42-46.

Study on detection method for tetramine intoxication by on line GPC-GC-MS/MS

Lao Zhe，Jiang Enyuan
（Center for Disease Control and Prevention of Wu Zhou，Guangxi Wuzhou，543002）

∶ Objective To study the method for determination of tetramine intoxication by on line GPC-GC-MS/MS. Methods With the standard solution to tetramine 6 characteristic ions (m/z 240, m/z 212, m/z 132, m/z121, m/z132, m/z149) as parent ion , use 3V～45V voltage for collision, then got ion abundance high 6 ion pairs(212→132; 212→92; 240→212; 240→149; 132→105; 212→200). After produced ion were optimized, set the highest ion pair (212→132) as the quantitative ion pair, set remained 5 ion pairs as qualitative ion pairs, set MSM parameter. Then to do extraction, purity, concentration, constant volume for standard liquid and sample in the same time, after that ,and do determination.Results Standard curve∶ y=215232.7x 31 x 31, r=0.999 6, recovery rate of 98.7%, RSD =4.5%, The detection limit of the liquid sample was 0.00001 mg/L, and the detection limit of the solid sample was 0.000 02 mg/kg. Conclusion The method for determination of tetramine intoxication by on line GPC-GC-MS/MS effective and exact, had low detection limit.

∶ tetramine; gel permeation chromatography-Gas chromatography-triple quadrupole mass spectrometer (GPC-GC-MS/MS); multiple reaction monitoring(MRM);

R657.7

B

2095-7629-（2017）7-0020-02

勞哲，男，1977年出生，漢族，學歷為本科，副主任技師，研究方向為疾病預防與控制。E-mail:laozhe2000@163.com

梧州市公共突發事件處理專項經費項目資助