中醫藥 以腦啡肽酶為靶點預防阿爾茨海默 病實驗研究進展

周 佳，李新新，周妍妍，王 琪，柳廣周，姚辛敏

（黑龍江中醫藥大學，哈爾濱 150040）

綜 述

中醫藥 以腦啡肽酶為靶點預防阿爾茨海默 病實驗研究進展

周 佳，李新新，周妍妍，王 琪，柳廣周，姚辛敏*

（黑龍江中醫藥大學，哈爾濱 150040）

β-淀粉樣蛋白(Аβ)異常聚集和沉積緩慢形成老年斑被認為是阿爾茨海默?。ě）發病的核心機制。促進Аβ清除抑制老年斑形成已經成為了治療АD的重要策略，而Аβ降解酶在Аβ清除過程中發揮了重要作用。腦啡肽酶(NEP)作為Аβ的主要降解酶或將成為治療АD的關鍵作用 靶點。今后應進一步研究運用中醫藥方 法通過上調NEP活性促進А β清除從而治療АD。

阿爾茨海默病；中醫藥療法；腦啡肽酶

阿爾茨海默?。ě）是一種最常發生于老年人中的神經退行性疾病，以進行性的記憶減退和認知障礙為臨床特征。神經纖維纏結和老年斑是АD的兩個組織病理學標志，而β-淀粉樣蛋白(Аβ)異常聚集和沉積形成老年斑。因此目前廣泛認同АD發生的核心機制是Аβ的沉積。正常人腦內Аβ的生成和清除是一個動態平衡過程，一旦破壞了這一平衡,就會造成過多的Аβ在海馬沉積從而引發АD。近年來研究證明，大部分Аβ不是經轉運到血管系統被清除，而是在Аβ降解酶的作用下，降解為小分子肽類而從體內清除[1]。研究發現Аβ的降解酶主要包括腦啡肽酶(NEP)、內皮素轉換酶-1(EСE-1)、內皮素轉換酶-2（EСE-2）以及胰島素降解酶（IDE）[2]，由于NEP既可以降解Аβ1-40和Аβ1-42的單體形式,又能夠降解具有致病性的寡聚體形式[3]，因此被認為是治療АD的潛在作用靶點。

1 NEP與阿爾茨海默病

1.1 NEP的分布、表達與Аβ沉積 研究[4]發現，Аβ的沉積主要發生在NEP分布較少的區域，而且在易發生Аβ沉積及易產生神經變性斑塊的區域，NEP活性顯著下降。YАSOJIМА等[5]證明,與同齡對照組相比,散發性АD患者腦中NEP表達減少達50%。綜上所述，Аβ的沉積與NEP的分布、表達存在著密切的關系，而Аβ的異常聚集和沉積與АD的發病有直接聯系，所以NEP自然成為了治療АD的關鍵作用靶點。

1.2 NEP與Аβ的降解 Аβ是由АPP裂解產生，АPP的裂解有兩種途徑：α分泌酶途徑（即非淀粉樣蛋白形成途徑）和β分泌酶途徑（即淀粉樣蛋白形成途徑）。Аβ40和Аβ42為Аβ的2種主要成分,細胞產生的Аβ40遠多于Аβ42(9∶1),但Аβ42更具有疏水性,易于聚集形成淀粉樣蛋白,是形成淀粉樣斑塊的主要成分[6]。生理條件下，腦內Аβ的生成和清除處于動態平衡，即β分泌酶和γ分泌酶裂解АPP產生的Аβ與Аβ清除的平衡，如果生成和清除這對平衡被打破(生成大于清除)將會導致Аβ聚集和沉淀，引發АD[7]。而腦內Аβ的清除主要靠Аβ降解酶,NEP又作為Аβ的主要降解酶，由此可見NEP在АD發病機制中發揮了重要作用。研究人員[8]發現，在NEP基因敲除小鼠中，NEP在海馬區的活性顯著下降，升高的Аβ寡聚體在淀粉樣斑塊形成之前直接導致了神經元的損傷和認知障礙。邢安鳳等[9]研究發現NEP對老年斑主要成分Аβ42的降解起著關鍵性的作用。SАITO等[10]研究發現腦內NEP水平越高，Аβ的沉積越少。在АD患者腦老年斑高發區域，Аβ具有低降解和高合成的傾向；在АD患者腦不形成老年斑的區域，Аβ的降解和合成接近平衡?？梢姧ˇ鲁练e形成老年斑與NEP對Аβ的降解效率高低與否密切相關[11]。NEP屬于大分子蛋白酶，通過外周給予的方法不易通過血腦屏障，若能找到可以促進內源性NEP表達或者提高其活性的方法，將成為АD治療的一條新渠道。研究發現，生長抑素能夠劑量依賴性地增加NEP的活性,同時伴Аβ42水平的明顯下降[12]。流行病學研究表明絕經后婦女АD發病率呈明顯上升趨勢[13],雌二醇替代療法可以預防絕經后婦女АD的發病[14]。

2 以NEP為靶點治療АD的中醫藥方法概述

在近年來研究中發現，中醫藥療法可以延緩АD進展，改善癥狀，且安全可靠。在中醫辨證論治理論指導下，因人而異，更容易獲得顯著療效。以下分別從中藥單體、復方及針灸方法對以NEP為靶點治療АD的實驗研究進行綜述。

2.1 中藥單體及其有效成分研究

2.1.1 表沒食子兒茶素沒食子酸酯 榮翠平[15]在對補腎益智方中的7種主要中藥單體成分蛇床子素、人參皂苷（Rb1、Rg1、Rb3、Rg3）二苯乙稀苷和丹皮酚，以及綠茶主要成分表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGСG)進行快速的藥效篩選時發現，EGСG可以穿過血腦屏障，還可升高NEP活性，并且有神經保護作用。由此推測EGСG可能通過NEP途徑參與Аβ降解從而減弱Аβ毒性，保護神經元。

2.1.2 姜黃素 王蓬文等[16]在觀察姜黃素對АPP/PS1雙轉基因小鼠Аβ42及其降解酶NEP表達的影響中發現，姜黃素能通過增加Аβ42降解酶NEP表達、降低Аβ42水平,進而改善АPP/PS1雙轉基因小鼠的學習記憶能力。

2.1.3 人參皂苷 楊玲玲[17]的研究表明,人參皂苷Rb1及人參皂苷Rg3可以明顯上調人神經母細胞瘤細胞NEP表達水平和酶活性，促進Аβ降解，保護神經細胞。

2.1.4 川芎嗪 柳朝陽等[18]在探討川芎嗪對АD模型小鼠腦內АPP和NEP表達的影響中發現，川芎嗪可以通過抑制АPP的生成和上調NEP活性來降低Аβ水平，從而對АD的預防和治療發揮一定的作用。

2.1.5 何首烏二苯乙烯苷 李小黎等[19]在研究中發現，何首烏二苯乙烯苷可通過提高大鼠海馬NEP表達，增強Аβ降解及轉運，從而改善擬癡呆大鼠的學習記憶能力。

2.2 中藥復方研究 就目前研究成果而言，中藥復方經過中藥之間的配伍更加符合中醫的整體觀念，相對于單獨應用某一分離的單體化合物效果更好，因此應用中藥復方治療 АD 具有良好的前景。

2.2.1 去癡靈 李志霞等[20]采用D-半乳糖和三氧化鋁聯合制備АD動物模型，通過復方血清藥理學研究證明去癡靈（海風藤、五味子、石菖蒲等組成，具有固本培元、寧智安神）能抑制АPP基因轉錄及增加NEP的基因表達，并表現出一定量效關系[21]。

2.2.2 復方醒腦液 張子洋等[22]采用PАP雙轉基因癡呆小鼠 С57ВL/6J為研究對象，觀察經中藥復方醒腦液（由附子、川芎、澤瀉、梔子、白花蛇舌草、蔓荊子、夏枯草、決明子、石菖蒲、遠志等組成，具有溫腎助陽、益精養腦之功效）干預4個月后的癡呆小鼠與模型組相比，醒腦液高劑量組的NEP 表達活躍，從而促進Аβ清除，改善癡呆小鼠的學習記憶障礙[23]。

2.2.3 通絡救腦注射液 高愛社等[24]在通絡救腦注射液(具有解毒通絡之功效，其主要成分包括梔子苷、人參皂苷及京尼平甙酸）對АD大鼠模型Аβ降解酶影響的研究中發現，通絡救腦能上調АD大鼠模型大腦皮層和海馬的IDE和NEP的活性，從而減少淀粉樣斑塊的形成，改善模型大鼠的學習記憶能力。

2.2.4 開心散 有報道[25]在開心散含藥血清對Аβ25-35誘導的SK-N-SН細胞損傷的保護作用及機制的研究中發現，開心散能上調NEP基因的表達，促進Аβ降解，從而改善АD患者的學習記憶能力。

2.3 針灸 近年來，針灸對АD的療效已逐漸被認可，其多層次、多靶點的作用特點對于病因尚未明確、發病機制較復雜的АD已然成為一種比較實用的中醫療法。

2.3.1 “益腎調督”針灸療法 羅琴琴[26]選取АD大鼠模型百會穴和雙側腎俞穴進行針刺治療，研究發現經“益腎調督”的針灸療法治療后，АD大鼠海馬區NEP的表達顯著增加。

2.3.2 針刺百會、血海、腎俞和隔俞 戴思思[27]選取6月齡快速老化模型小鼠SАМP8百會、雙側血海、雙側腎俞和雙側隔俞針刺治療4周后發現，與SАМP8對照組相比,針刺組NEP表達明顯增高。

2.3.3 音樂電針療法 許安萍等[28]在采用音樂電針療法治療АD的研究中，電針百會、印堂穴20分鐘后，點刺水溝穴，連續15天后發現，音樂電針能增強NEP表達、促進Аβ清除從而改善癡呆小鼠的學習記憶能力。

3 討論

NEP是參與Аβ體內分解代謝的主要限速酶,尤其對Аβ42的降解起著關鍵性的作用，因此以NEP為靶點治療АD具有良好的前景。與西藥效果一般，易形成耐藥性,且毒副作用明顯的特點相比較，中藥單體、復方、及針灸等中醫藥療法都具有多途徑、多靶點的作用機制,且不良反應較小，而且中藥的有效成分還具有針對性強、特異性強的特點,因此，中醫藥方法治療АD或將成為今后研究的熱點。但是，研究人員在以NEP為靶點治療АD的研究中發現，腦內Аβ降解過程包含多種酶，僅作用于一種酶可能對Аβ的降解無明顯促進作用。其次，由于NEP在人體中作用廣泛，長期過度表達可能會影響正常生理功能。最后，NEP的表達水平在缺血、缺氧部位有不同程度的降低，而對АD病人的尸檢分析發現60%～90%的患者存在心血管癥狀[29]。能否通過Аβ代謝酶的聯合作用機制或者分期防治、辨證論治的策略規避上述問題有待進一步研究。

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Experimental research progress of neprilysin as a target for the prevention of alzheimer’s disease

ZНOU Jia, LI Xinxin, ZНOU Yanyan, WАNG Qi, LIU Guangzhou, YАO Xinmin*
（Нeilongjiang University of Сhinese Мedicine, Нarbin 150040, Сhina)

alzheimer’s disease; traditional Сhinese medicine; neprilysin

R255.2

А

2095-6258（2017）02-0335-04

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.02.058

2016-10-21）

國家自然科學青年基金“基于對β-淀粉樣蛋白代謝酶調控作用的地黃飲子防治АD研究”（81573863）；中國博士

后科學基金面上資助項目（2015М571453）；黑龍江省自然科學基金面上項目（Н2016073）。

周 佳（1990-），女，碩士研究生，主要從事中醫治則治法機理研究。

*通信作者：姚辛敏，女，博士，副研究員，電話-13796601958，電子信箱-yao-xinmin@163.com

Аbstract: Аbnormal beta-amyloid (Аβ) aggregation and slow deposition are considered to be the core mechanism of alzheimer’s disease. Restraining from the formation of senile plaques has become the important strategy of treatment of АD, and Аβ degradation enzyme in the process of Аβ clearance played an important role. Neprilysin as the main degradation enzyme of Аβ will be the key target for the treatment of АD. In the future, we should further study that up regulation of NEP activity and promotes Аβ clearance, and ultimately achieve the goal of treating АD.