TLR4在晚發型新生兒敗血癥患兒群體中的表達與監測價值

路芳，鄔進輝

(荊門市第二人民醫院兒科，湖北 荊門 448000)

TLR4在晚發型新生兒敗血癥患兒群體中的表達與監測價值

路芳，鄔進輝

(荊門市第二人民醫院兒科，湖北 荊門 448000)

目的 研究Toll樣受體4(TLR4)在晚發型新生兒敗血癥患兒群體中的表達作用與監測價值。方法回顧性分析2015年1月至2016年2月于我院收治的33例晚發型新生兒敗血癥患者(觀察組)的臨床資料，另取同期33例健康體檢兒作為對照組。觀察組患兒根據感染病原體不同分為革蘭氏陽性菌感染組(陽性組20例)，革蘭氏陰性菌感染組(陰性組13例)。分別對比三組受檢者的TLR4 mRNA含量以及C反應蛋白(CRP)水平，并用Spearman法作TLR4 mRNA與CRP的相關性分析。結果觀察組新生兒TLR4 mRNA表達為(1.83±0.25)，明顯高于對照組的(0.31±0.08)，差異有統計學意義(P＜0.05)；陽性組新生兒TLR4 mRNA表達為(1.74±0.25)，明顯低于陰性組的(1.95± 0.26)，差異有統計學意義(P＜0.05)；陽性組和陰性組CRP水平分別為(53.42±23.11)mg/L及(46.87±18.56)mg/L，均明顯高于對照組的(2.79±1.94)mg/L，差異均有統計學意義(P＜0.05)；TLR4 mRNA含量與CPR水平呈顯著正相關(r= 0.832，P=0.000)。結論臨床中通過監測TLR4有利于早期診斷晚發型新生兒敗血癥，特別是在診斷革蘭陰性菌感染所致的敗血癥中具有更高的臨床診斷價值。

Toll樣受體4；晚發型；新生兒敗血癥；表達；監測

臨床上，由于新生兒免疫功能相對不成熟，加上自身多種易感因素的存在，易發生細菌感染，而在細菌感染后因為治療相對困難，從而可能會導致敗血癥的發生[1-2]。新生兒敗血癥具有早期臨床表現不典型，病情發展快速的特點，是導致新生兒死亡的重要原因之一[3]。因此，尋找一種具有較高敏感性、特異性的治療對新生兒敗血癥進行早期有效診斷具有極其重要的臨床意義。鑒于此，本文通過研究TLR4在晚發型新生兒敗血癥患兒群體中的表達作用與監測價值并進行分析，旨在為臨床診斷及治療提供新型監測指標，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月至2016年2月我院收治的晚發型新生兒敗血癥33例作為觀察組，另取同期33例健康體檢兒作為對照組。觀察組中男性20例，女性13例；胎齡37～42周，平均(39.3±2.6)周；年齡8～28 d，平均(18.7±3.4)d。對觀察組患兒另根據感染病原體不同分為革蘭氏陽性菌感染組(陽性組，20例)，革蘭氏陰性菌感染組(陰性組，13例)。對照組中男性19例，女性14例；胎齡37～42周，平均(39.4±2.6)周；年齡9～28 d，平均(18.9±3.5)d。兩組新生兒在年齡、性別、胎齡等基本資料方面比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經我院醫院倫理委員會批準。

1.2 檢測方法[4]所有患兒均于清晨空腹收集2 mL靜脈血，隨后取0.5 mL進行C反應蛋白(CRP)水平檢測，選用邁瑞公司生產的BECKMAN生化儀以及免疫投射比濁法進行。剩余1.5 mL靜脈血加入Ficoll分離液(購自上海普飛生物技術有限公司)，應用密度梯度離心法，在3 500 r/min下進行離心20 min，成功分離出外周血單個核細胞，然后加入Trizol(MRI公司生產)提取總RNA，置于-70℃冰箱保存。采用RT-PCR技術檢測TLR4 mRNA含量，其中PT-PCR試劑盒購自TaKaRa公司，具體方法嚴格按照TaKaRa試劑盒說明書進行操作。

1.3 觀察指標 比較三組新生兒的TLR4 mRNA含量和CPR水平，并分析TLR4 mRNA與CRP相關性。

1.4 統計學方法 應用SPSS21.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差(±s)表示，組間兩兩比較采用t檢驗，多組間的計量數據比較采用單因素方差分析，應用Spearman法分析相關性，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 觀察組與對照組新生兒的TLR4 mRNA含量比較 觀察組新生兒的TLR4 mRNA表達水平為(1.83±0.25)，顯著高于對照組的(0.31±0.08)，差異有顯著統計學意義(t=33.265，P＜0.01)。

2.2 陽性組與陰性組新生兒的TLR4 mRNA含量比較 陽性組新生兒TLR4 mRNA表達水平為(1.74±0.25)，明顯低于對照組的(1.95±0.26)，差異有統計學意義(t=2.321，P＜0.05)。

2.3 陽性組、陰性組和對照組新生兒的CRP水平比較 陽性組和陰性組CRP水平均明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 陽性組、陰性組和對照組新生兒的CRP水平比較(mg/L，±s)

表1 陽性組、陰性組和對照組新生兒的CRP水平比較(mg/L，±s)

注：與對照組比較，aP＜0.05。

組別陽性組陰性組對照組CRP 53.42±23.11a46.87±18.56a2.79±1.94例數20 13 33 F值P值12.483 0.000

2.4 TLR4 mRNA與CRP相關性 TLR4 mRNA含量與CPR水平呈顯著正相關(r=0.832，P=0.000)。

3 討 論

新生兒敗血癥發病早期無典型臨床表現，患兒多表現為不哭、不動、嗜睡、反應力較低等，較易增加臨床及時診斷的難度。傳統的血培養是臨床上確診敗血癥的金標準，但此法的陽性率較低，且至少在2 d后才能得到結果，通常無法進行早期診斷[5-6]。因此，尋找一種準確而又快速的診斷新生兒敗血癥的實驗室指標成為了臨床醫師所關注的問題。CRP是目前臨床上應用較為廣泛的新生兒敗血癥經典指標之一，可在新生兒發生感染后6 h內迅速增加，48 h內達峰，且高峰值是正常值的100～1 000倍[7]。但其在腫瘤、其他免疫性疾病中亦會迅速升高，因此具有特異性偏低的缺點。此外，有研究報道表明，CPR的表達在革蘭氏陽性菌感染與革蘭氏陰性菌感染之間無明顯差異，這可能會導致我們在臨床區分病原菌感染以及抗生素的選擇中造成一定困難[8]。

本文通過研究后發現，觀察組新生兒TLR4 mRNA含量顯著高于對照組。這提示了TLR4在新生兒敗血癥中具有較高的表達，可能可作為臨床早期診斷新生兒敗血癥的指標之一。分析原因，TLR4屬于天然免疫與獲得性免疫連接的橋梁，可通過與病原識別模式分子結合，同時經由介導細胞信號轉導而使炎癥因子釋放，從而有效識別病原微生物，并啟動相應的炎癥應答[9-10]。此外，陽性組新生兒TLR4 mRNA含量顯著低于陰性組，且陽性組以及陰性組CRP水平均顯著高于對照組。這充分說明了TLR4可作為診斷新生兒敗血癥的指標[11-12]。究其原因，筆者認為其主要機制可能與TLR4具有識別脂多糖等革蘭氏陰性菌細胞壁成分有關，這一結果同時也提示了在對可疑新生兒敗血癥患兒進行早期檢測CRP的同時，測定TLR4水平可作為判斷敗血癥感染的指標，且對革蘭氏陰性菌感染的診斷價值更高[13-15]。此外，本文結果還顯示了TLR4 mRNA含量與CPR水平呈顯著正相關。這也再次證實了在敗血癥新生兒的檢測中，TLR4可作為CRP的補充指標[16]。

綜上所述，TLR4可作為臨床上早期診斷晚發型新生兒敗血癥的新指標，特別是對識別革蘭陰性菌感染具有更高的價值。臨床可通過研究TLR4信號傳導途徑，進一步探討是否可通過抑制其活化，從而達到有效控制炎癥瀑布反應的發生，最終為臨床治療新生兒敗血癥帶來新的思路以及理論依據。

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Expression and monitoring value of TLR4 in the group of children with late-onset neonatal sepsis.

LU Fang,WU Jin-hui.Department of Pediatrics,Jingmen Second People's Hospital,Jingmen 448000,Hubei,CHINA

ObjectiveTo study the expression of Toll like receptor 4(TLR4)in children with late-onset neonatal sepsis.MethodsA retrospective analysis was performed in 33 cases of late-onset neonatal septicemia(the observation group)and 33 cases of healthy children(the control group)from January 2015 to February 2016 in our hospital.The children of the observation group were further divided into leather of Gram-positive bacteria infection group(positive group,20 cases)and Gram-negative bacteria infection group(negative group,13 cases)according to different pathogens. The levels of TLR4 mRNA and C reactive protein(CRP)were compared among the three groups,and correlation between TLR4 mRNA and CRP was analyzed with Spearman's rank correlation.ResultsThe TLR4 mRNA levels in the observation group was(1.83±0.25),which was significantly higher than(0.31±0.08)in the control group,P＜0.05.The TLR4 mRNA levels in positive group was(1.74±0.25),significantly lower than(1.95±0.26)in the negative group,P＜0.05.CRP level was(53.42±23.11)mg/L in positive group and(46.87±18.56)mg/L in negative group,which were significantly higher than(2.79±1.94)mg/L in the control group,with statistically significant differences(P＜0.05).TLR4 mRNA and CPR level were positively correlated(r=0.832,P=0.000).ConclusionClinical monitoring of TLR4 is beneficial to the diagnosis of late-onset neonatal sepsis,especially in the diagnosis of sepsis with Gram-negative bacteria infection.

Toll like receptor 4;Late-onset;Neonatal sepsis;Expression;Monitoring

R722.13+1

A

1003—6350（2017）03—0421—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.03.025

2016-08-24)

湖北省荊門市科技局科技引導計劃項目（編號：2009YDS35）

路芳。E-mail：15908660622@139.com