RUVBL2基因knock—down對Rad51和γ—H2AXfoci的影響

韓瀠儀

摘 要：用脂質體轉染的方法將特定的RUVBL2 siRNA序列轉染到真核細胞，并鑒定其在人肺纖維細胞（MRC5 SV）中的表達，以確保RUVBL2基因的knock-down效果。用Rad51和γ-H2AX的特異性抗體進行免疫熒光染色，應用熒光顯微鏡觀察計數Rad51和γ-H2AX foci的數量。Western blot法證實了siRNA以及轉染的效率，確定了RUVBL2基因的存在有利于誘導DNA雙鏈斷裂（DSB）條件下Rad51和γ-H2AX被招募到DNA損傷位點。

關鍵詞：RUVBL2 siRNA RAD51 γ-H2AX foci

中圖分類號：R113 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2017）01（b）-0200-03

在細胞生命活動過程中，基因組DNA常會受到內源和外源因子的攻擊而發生不同類型的損傷。其中，對細胞最具傷害性的損傷是DNA雙鏈斷裂（double-strand break， DSB）。大分子蛋白復合體INO80就直接參與了DSB修復過程[1]。RUVBL蛋白是INO80復合體的一類重要亞基。RUVBL1（RuvB-like 1）和RUVBL2（RuvB-like 2）同屬于ATPases（AAA+ ATPase）家族成員，是細菌DNA 解旋酶RuvB蛋白在哺乳動物中的同源蛋白[2]。

同源重組是DSB修復的一種重要修復方式，RAD51是一種重要的重組蛋白，主要尋找同源DNA的模板并且幫助在損傷DNA與未損傷DNA修復模板之間產生聯系[3]。在酵母中，INO80復合體在染色體修飾和染色體重組過程中會將RAD51蛋白招募到DNA損傷位點[4]，而在哺乳動物細胞里INO80復合體也會在染色體修飾和染色體重組過程中將RAD51招募到了DNA損傷位點[5]。哺乳動物INO80復合體通過DNA末端切除的作用介導了DSB的修復[6]。RUVBL蛋白的缺失會影響RAD51被招募到DNA雙鏈斷裂位點，從而影響到后續進行的DNA末端切除修復[7]。小鼠和人體細胞內，在含有RUVBL蛋白的TIP60復合體缺失或者活性降低的情況下，RAD51被招募至DNA雙鏈斷裂損傷位點的進程也會被削弱[8]。也就是說RUVBL蛋白在DNA損傷修復過程，尤其是末端切除修復中有著不可替代的作用。……