乳腺癌患者外周血cfDNA及長片段DNA濃度的臨床價值研究

楊方凝，王利軍，劉 毅，代俊利，王 翔，宋 冀*

（1.承德醫學院，河北 承德 067000；2.北京起因科技有限公司，北京 100000；3.承德市中心醫院，河北 承德 067300）

外周血cfDNA是指游離在外周血中的脫氧核苷酸，健康人血液中的cfDNA主要來源于凋亡細胞，而腫瘤患者體內的來源于腫瘤細胞的cfDNA也會被釋放到血液中[1]。有實驗觀察，惡性腫瘤患者外周血cfDNA濃度水平高于正常人，其中長片段DNA濃度具有代表意義，且具有腫瘤細胞的特征，認為其濃度和長度的異常改變與腫瘤密切相關[2-4]。本研究針對女性乳腺癌患者術前與術后、同期乳腺良性腫瘤患者術前及健康人，分別檢測其外周血cfDNA及長片段DNA濃度，以研究其在乳腺癌診療中的臨床價值。

1 資料與方法

1 研究對象

2016年10月～2017年3月承德市中心醫院收治的女性原發性乳腺癌患者、乳腺良性腫瘤患者及非患腫瘤健康人的血液樣本各33例（經過醫學倫理委員會審批并獲得通過），實驗組術前1天、術后14～21天采血，對照1組術前1天采血，對照2組同期采血。

1.2 納入標準

實驗組（1）行手術治療的女性原發性乳腺癌患者；（2）病理診斷明確；（3）無外傷、急性炎癥、劇烈運動后、脫水、女性處于月經期等情況。對照1組（1）與實驗組同期行手術治療的女性乳腺良性腫瘤患者；（2）病理診斷明確；（3）無外傷、急性炎癥、劇烈運動后、脫水、女性處于月經期等情況；（4）與實驗組年齡、性別等基線資料具有可比性。對照2組（1）與實驗組同期做健康體檢的女性健康人；（2）體檢后至少3個月內未發現腫瘤疾患；（3）無外傷、急性炎癥、劇烈運動后、脫水、女性處于月經期等情況；（4）與實驗組年齡、性別等基線資料具有可比性。以上人員均自愿入組，簽署知情同意書。

1.3 排除標準

（1）妊娠期婦女；（2）患系統性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病的患者；（3）接受器官移植的患者（包括骨髓）；（4）腦卒中；（5）行新輔助化療及內分泌治療患者。

1.4 實驗室檢測與分析

用EDTA抗凝管收納采集的血液，1600 rpm/min的速度離心10分鐘進行血漿分離。以血漿直接作為擴增模板。QPCR反應程序：預變性，95℃，1分鐘；變性，95℃，8秒；退火/延伸 60℃，15秒；變性，退火/延伸，35個循環。

1.5 統計學方法

應用SPSS 19.0統計學軟件對數據進行分析處理，計數資料以百分數（%）表示，采用x2檢驗，計量資料以“±s”表示，采用t檢驗，以P＜0.05為有統計學意義。

2 結 果

表1 實驗組患者基本資料

表2 實驗組術前與對照1組及對照2組外周血cfDNA及長片段DNA片段濃度差異比較

表3 實驗組術前與術后外周血cfDNA及長片段DNA片段濃度差異的自身比較

表4 實驗組術后與對照1組、對照2組外周血cfDNA及長片段DNA濃度差異比較

3 結 論

據本研究的結果推斷，血漿cfDNA及長片段DNA的定量檢測在鑒別乳腺癌、乳腺良性腫瘤中有一定參考價值，且動態反映腫瘤的負荷，臨床上可能有助于輔助乳腺癌診斷、療效評估、療后復發及轉移的監測。

4 討 論

有研究發現，部分惡性腫瘤患者外周血中cfDNA水平增高與腫瘤相關[5]。目前認為惡性腫瘤細胞DNA進入外周血循環主要有兩種途徑：一是腫瘤組織中的腫瘤細胞脫落進入外周循環血液釋放出核酸；二是腫瘤細胞可能在異常增殖過程中自主釋放出DNA進入血液循環 。另有研究表明，腫瘤細胞內的DNA是通過胞外囊泡的形式到細胞外的[6]。本研究針對女性乳腺癌患者手術前后、乳腺良性腫瘤患者術前及健康女性，分別作外周血cfDNA及長片段DNA濃度的定量檢測，發現女性乳腺癌患者術前的外周血cfDNA水平，明顯高于女性乳腺良性腫物患者及健康人群，因此，檢測外周血cfDNA及長片段DNA濃度，可能有助于輔助乳腺癌診斷、療效評估、療后復發及轉移的監測。但目前尚存一些問題：一是此研究尚處于實驗階段，需加大樣本量進一步驗證；二是檢測方法及儀器的不同，外周血cfDNA及長片段DNA片段濃度的參考值不能統一；三是還需與現有的其他腫瘤標記物進行對照，進一步驗證其單獨或聯合應用的臨床價值。

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[2] Board RE 2008；Catarino R 2008; Jiang P 2015；Kolesnikova EV 2008; Liao W 2015;Sunami E 2008; Taback B 2004;van der Drift MA 2010;Xue X 2009; Yoon KA ,2009.

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[6] 殷 舟,陳屹一.血中游離DNA檢測在肺癌診斷中的應用醫學研究雜志,2013,9,41(9)∶27-29.