G蛋白偶聯受體30和磷酸化AKT蛋白在子宮內膜腺癌組織中的表達及意義

呂健勇+胡永斌

【摘要】 目的：對筆者所在醫院接受治療的子宮內膜腺癌患者的生物樣本進行實驗室研究，分析G蛋白偶聯受體30（GPR30）和磷酸化AKT蛋白（P-AKT）在腫瘤組織中表達的意義，并進行二者之間相關性分析。方法：選取2011年-2012年來筆者所在醫院接受治療的子宮內膜腺癌患者180例的活體組織樣本和50例正常子宮組織制成蠟塊切片，采用EnViSion免疫組化法和FISH法對每個標本中的GPR30和P-AKT進行其相關的基因陽性表達水平進行檢測，觀察免疫組化評分與FISH檢測G蛋白偶聯受體30和磷酸化AKT蛋白的高表達與基因擴增之間的重疊率，統計二者在不同的腫瘤組織中表達率，影響二者的表達因素及二者相關性探究。結果：GPR30和P-AKT的免疫組化結果顯示其陽性表達與FISH檢測結果重疊率分別為74.5%、56.6%，差異顯著（P<0.05）；GPR30和P-AKT在正常子宮內膜中陽性表達率均明顯低于子宮內膜腺癌內陽性表達率，差異均有統計學意義（P<0.05）；GPR30和P-AKT的表達與患者的年齡、組織分化程度、是否出現淋巴道轉移及基層浸潤深度有關（P<0.05）；GPR30和P-AKT之間存在明顯的相關性，且相關性較好（字2=14.08，P<0.05，Φ=0.2693）。結論：FISH法與EnViSion免疫組化法檢測GPR30和P-AKT重疊率較好，GPR30和P-AKT與子宮內膜腺癌之間可能存在因果聯系，且CPR30和P-AKT之間能夠相互影響，在臨床治療過程中可根據GPR30和P-AKT判斷組織分化程度和基層浸潤深度，在明確診斷上有一定的意義。

【關鍵詞】 G蛋白； 偶聯受體； AKT蛋白； 宮內膜腺癌； 表達及意義

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.7.022 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）07-0044-03

子宮內膜癌屬于發生于子宮內的上皮細胞的惡性轉化，使得子宮上皮細胞的凋亡機制被抑制，從而使得部分異常子宮內膜細胞無限增殖，進而由于壓迫和占位性病變而危及患者生命安全[1-2]。一般絕經期前后女性發生子宮內膜癌的概率較高，也是女性生殖系統的三大癌癥同程度的陰道排液、陣發性腹部疼痛及相關身體征象。目前臨床上的治療方法主要有外科手術、放化療、激素治療及中醫治療。G蛋白偶聯受體30屬雌激素受體，與雌激素結合后釋放AKT相關因子，使得AKT系統被激活。相關研究指出，AKT系統是促進癌細胞生長的主要系統[3-4]。目前臨床上關于AKT信號系統的研究處于白熱化階段，而對與AKT與P-AKT之間的關系描述較少，而且對于GPR30與P-AKT之間關系的研究較少。因此，本文旨在通過對近1年來筆者所在醫院接受治療的子宮內膜腺癌患者的生物樣本進行實驗室研究分析GPR30和P-AKT在腫瘤組織中表達的意義，并進行二者之間相關性分析。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取自2011年10月25日-2012年10月25日來筆者所在醫院接受治療的子宮內膜腺癌患者180例的活體組織樣本和50例正常子宮組織制成蠟塊切片。子宮內膜腺癌患者活體組織樣本中增生期內膜40例，子宮內膜增殖癥34例，子宮內膜樣腺癌106例?；颊吣挲g31～68歲，平均（46.8±10.2）歲。所有患者均為初治患者，且有明確的生存信息和臨床分期，所有患者手術切除的新鮮腫瘤標本經中性福爾馬林固定后石蠟包埋，制成蠟塊保存。所有樣本均由兩名以上專業病理醫師確診，排除其他惡性腫瘤并發，排除繼發患者，排除其他重大疾病的患者。

1.2 方法

標本采集時應用FISH法檢測并記錄數據。應用EnViSion免疫組化二步法檢測患者腫瘤組織中GPR30、P-AKT，選用己知陽性的子宮內膜腺癌切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。染色方法如下：（1）脫蠟和水化，取每張4 mm厚的患者腫瘤芯片，將組織芯片置于65 ℃恒溫中5 h；再將其先后加入到二甲苯Ⅰ和Ⅱ溶液里浸泡15 min隨后將其放入C2H5OH Ⅰ和Ⅱ各沖洗5 min，在無水乙醇Ⅱ中再浸泡5 min；95%乙醇中浸泡5 min；85%乙醇中浸泡5 min；70%乙醇中浸泡5 min；蒸溜水中浸泡5 min。（2）抗原修復，取一定量的0.01 M梓檬酸鹽緩沖液（pH=6.0）進行加熱；將組織置于緩沖液中并置于加熱箱中繼續加熱10～15 min；隨后將其冷卻，并用蒸餾水和PBs緩沖液沖洗3次，5 min/次[4]。（3）免疫組織化學染色，用蒸餾水配置新鮮的3% HA，室溫封閉15 min以抑制內源性過氧化物酶，蒸餾水洗2次，5 min/次；再用PBS洗兩次，持續5 min；應用山羊血清對標本進行密封，室溫60 min；取出切片，繼續用PBS緩沖液進行3次沖洗，共15 min；滴加即用型快捷免疫組化Max Vision二抗試劑，濕盒中室溫靜置15 min；PBS洗

3次，5 min/次；將其置于DAB中維持2～8 min，實時在鏡下觀察。

1.3 統計學處理

采用SPSS 16.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 GPR30與P-AKT的高表達與基因擴增之間的重疊率

GPR30的免疫組化結果顯示其陽性表達率為58.8%（106/180），其中+28例，++69例，+++9例，而FISH檢測結果顯示GPR基因擴增率為51.1%（92/180），重疊率為74.5%（79/106）。P-AKT免疫組化結果顯示其陽性表達率為58.8%（106/180），其中+31例，++52例，++23例，而FISH檢測結果顯示P-AKT基因擴增率為36.7%（66/180），重疊率為56.6%（60/106）。二者各個免疫組化間的重疊率比較差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 二者在正常子宮內膜和子宮內膜樣腺癌組織中的表達情況

GPR30在正常子宮內膜中陽性表達率明顯低于子宮內膜腺癌內陽性表達率，差異有統計學意義（P<0.05）。說明子宮內膜腺癌患者的子宮內膜組織中GPR30和P-AKT表達升高，即GPR30和P-AKT與子宮內膜腺癌之間可能存在因果聯系，見表2。

2.3 GPR30、P-AKT與相關因素的相關性分析

GPR30和P-AKT的表達與患者的年齡、組織分化程度、是否出現淋巴道轉移以及基層浸潤深度有關（P<0.05）。因此，在臨床治療過程中可根據GPR30和P-AKT判斷組織分化程度和基層浸潤深度，在明確診斷上有一定的意義，見表3。

2.4 GPR30和P-AKT相關性研究

經過資料取證及統計學分析可知，GPR30和P-AKT之間存在明顯的相關性（字2=14.08，P<0.05，Φ=0.2693），說明CPR30和P-AKT之間能夠相互影響，見表4。

3 討論

子宮內膜癌是女性群體中最為第二大的生殖道腫瘤。有人以循證醫學的方式通過Mata分析對幾千例子宮內膜癌患者進行調查，發現患病者的病因與不良的生活方式以及惡性工作環境有關。研究發現，孕激素與雌激素平衡被破環后，孕激素失去拮抗作用，容易增加子宮內膜癌的風險，而究竟是孕激素還是雌激素是導致子宮內膜腺癌的主要因子且致病機制尚不明確[5-9]。目前公認的為“核轉錄效應”，即雌激素與其受體相結合后激發核內相關遺傳物質發生轉錄，合成相應蛋白，促進腺癌細胞增殖。近期研究表明，除此機制外，雌激素還可以激活AKT信號系統，是通過與GRP30受體相結合實現。GRP30廣泛的存在于人體，其與雌激素結合能夠迅速的激活并促使AKT發生磷酸化即P-AKT，而P-AKT能夠促進癌細胞生長。而關于GRP30與p-AKT之間的關系尚不清楚，因此，本文旨在通過對近一年來筆者所在醫院收治的子宮內膜腺癌患者的生物樣本進行實驗室研究，分析GPR30和P-AKT在腫瘤組織中表達的意義，并進行二者之間相關性分析。

GPR30的免疫組化結果顯示其陽性表達率為58.8%（106/180），而FISH檢測結果顯示GPR基因擴增率為51.1%（92/180），重疊率為74.5%（79/106）。P-AKT免疫組化結果顯示其陽性表達率為58.8%（106/180），而FISH檢測結果顯示P-AKT基因擴增率為36.7%（66/180），重疊率為56.6%（60/106）。二者的各個免疫組化間的重疊率差異顯著，如要進行多組間的兩兩比較需要進行SNK-q檢驗，說明FISH法與EnViSion免疫組化法檢測GPR30和P-AKT重疊率較好；經過資料取證及統計學分析可知，GPR30在正常子宮內膜中陽性表達率明顯低于子宮內膜腺癌內陽性表達率，差異有統計學意義（P<0.05）；P-AKT在正常子宮內膜中陽性表達率明顯低于子宮內膜腺癌內陽性表達率，差異有統計學意義（P<0.05）；GPR30和P-AKT的表達與患者的年齡、組織分化程度、是否出現淋巴道轉移及基層浸潤深度有關；經過資料取證及統計學分析可知，GPR30和P-AKT之間存在明顯的相關（字2=14.08，Φ=0.2693），說明GPR30和P-AKT與子宮內膜腺癌之間可能存在因果聯系，且CPR30和P-AKT之間能夠相互影響，在臨床治療過程中可根據 GPR30和P-AKT判斷組織分化程度和基層浸潤深度，在明確診斷上有一定的意義。

綜上所述，雌激素能夠與GRP30結合并迅速激活P-AKT通路，釋放因子促進癌細胞增殖。在子宮內膜腺癌組織內二者表達水平均高于正常子弄內膜組織，且二者之間可能存在一定的因果聯系，能夠應用于臨床上對子宮內膜腺癌進行進一步診斷。

參考文獻

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（收稿日期：2016-11-18）