血漿sCD40L、sICAM-1及血管內(nèi)皮損傷相關(guān)細(xì)胞與子癇前期嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析

薛 峰,顏 源,何 攀

(四川省婦幼保健院 檢驗(yàn)科，四川 成都610041)

血漿sCD40L、sICAM-1及血管內(nèi)皮損傷相關(guān)細(xì)胞與子癇前期嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析

薛 峰,顏 源,何 攀

(四川省婦幼保健院 檢驗(yàn)科，四川 成都610041)

目的 探討血漿白細(xì)胞分化抗原可溶性CD40配體(sCD40L)、可溶性細(xì)胞間粘附因子-1(sICAM-1)及血管內(nèi)皮損傷相關(guān)細(xì)胞與子癇前期嚴(yán)重程度的相關(guān)性。方法 選擇年齡、BMI、檢測(cè)孕周等臨床一般資料相匹配的重度子癇前期、輕度子癇前期患者以及健康孕婦(對(duì)照組)各45例作為研究對(duì)象，采用ELISA法檢測(cè)血漿sCD40L、sICAM-1水平，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC)、血管生成性T細(xì)胞(Tang)含量，比較并分析其相關(guān)性。結(jié)果 子癇前期組的血漿sICAM-1 、sCD40L水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.05) ，同時(shí)重度子癇前期組上述指標(biāo)明顯高于輕度子癇前期組(P<0.05) ；重度子癇前期組及輕度子癇前期組EPC、Tang含量均明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，重度子癇前期組和輕度子癇前期組上述指標(biāo)相比較均無(wú)明顯差異(P>0.05) ；健康對(duì)照組孕婦血漿EPC細(xì)胞含量與Tang細(xì)胞含量、血漿sICAM-1水平與sCD40L水平均無(wú)明顯相關(guān)性；重度子癇前期組、輕度子癇前期組孕婦血漿EPC細(xì)胞含量和Tang細(xì)胞含量呈正相關(guān)(r=0.654，P<0.05)，且兩組孕婦血漿sICAM-1水平與sCD40L水平也呈正相關(guān)(r=0.624;P<0.05)。結(jié)論 子癇前期孕婦外周血EPC和Tang細(xì)胞含量明顯降低，而血漿sICAM-1 、sCD40L水平顯著升高，二者可能通過(guò)誘發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞損傷進(jìn)而影響機(jī)體免疫和炎癥反應(yīng)參與子癇前期的發(fā)病過(guò)程。血漿sCD40L、sICAM-1及血管內(nèi)皮損傷相關(guān)細(xì)胞水平變化與子癇前期嚴(yán)重程度密切相關(guān)。

可溶性細(xì)胞間粘附因子-1；可溶性CD40配體；T淋巴細(xì)胞亞群；內(nèi)皮祖細(xì)胞；子癇

(ChinJLabDiagn,2017,21:0464)

子癇前期為妊娠期特發(fā)疾病，發(fā)病率約占全部妊娠的3.9%，可影響機(jī)體各器官系統(tǒng)[1]。本病是導(dǎo)致不良母嬰結(jié)局的重要因素之一，目前關(guān)于子癇前期的發(fā)病機(jī)制尚無(wú)確切定論，但已有臨床研究證明血管內(nèi)皮損傷為子癇前期發(fā)病的中心環(huán)節(jié)[2]。近年來(lái)，陸續(xù)有報(bào)道顯示，機(jī)體的免疫功能異常、炎癥反應(yīng)主要參與了子癇前期病情的發(fā)生、發(fā)展病理過(guò)程[3]。可溶性細(xì)胞間粘附因子-1(sICAM-1) 及白細(xì)胞分化抗原可溶性CD40 配體(sCD40L) 為重要的免疫炎癥介質(zhì)，sICAM-1、sCD40L的異常表達(dá)能夠激活機(jī)體炎癥反應(yīng)，引起機(jī)體免疫功能紊亂、氧化應(yīng)激，損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞功能[4]。血管生成性T淋巴細(xì)胞(Tang)及內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC)為血管內(nèi)皮損傷相關(guān)細(xì)胞，具有促進(jìn)組織血管新生、修復(fù)血管內(nèi)皮損傷的功能[5]。本研究對(duì)本院收治的子癇前期患者為研究對(duì)象，并對(duì)患者血漿sICAM-1、sCD40L水平及血管內(nèi)皮損傷細(xì)胞含量進(jìn)行了檢測(cè)并予以統(tǒng)計(jì)分析，旨在探討血漿sCD40L、sICAM-1和血管內(nèi)皮損傷相關(guān)細(xì)胞與子癇前期嚴(yán)重程度的相關(guān)性以及上述指標(biāo)在子癇前期臨床診斷和預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值。現(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

選擇2013年5月至2015年10月間我院收治的90例子癇前期患者為研究對(duì)象，所有患者均符合《婦產(chǎn)科學(xué)》中子癇前期的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，其中重度子癇前期45例記為重度子癇前期組，輕度子癇前期45例記為輕度子癇前期組，同時(shí)選取本院45例門診體檢或入院待產(chǎn)晚期健康孕婦作為健康對(duì)照組，所有孕婦檢測(cè)孕周均超過(guò)28周。所有研究對(duì)象或家屬均簽署知情同意書(shū)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者經(jīng)臨床確診均符合子癇前期的診斷標(biāo)準(zhǔn)；所有患者均為單胎自然受孕且均為初產(chǎn)；所有孕婦均未臨產(chǎn)并經(jīng)產(chǎn)檢確認(rèn)無(wú)胎兒畸形病例；所有研究對(duì)象均無(wú)抽煙、酗酒等不良嗜好；同意本研究方案患者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：排除合并嚴(yán)重肝腎功能障礙患者；排除合并有自身免疫性疾病患者；排除慢性高血壓疾病以及全身感染性疾病患者；排除合并糖尿病患者。

1.2 方法

入院后收集患者的年齡、BMI、孕周收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓等臨床一般資料，空腹12小時(shí)靜脈取血(靜置2小時(shí)，高速離心分離血漿(離心5 min,3 000 r/min)，將分離后血漿保存于4℃冰箱內(nèi)待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)孕婦的血漿sICAM-1、sCD40L水平進(jìn)行測(cè)定。試劑盒均購(gòu)自上海哈靈生物科技有限公司，所有檢測(cè)操作均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。采用流式細(xì)胞儀對(duì)所有孕婦的孕婦外周血漿中Tang 細(xì)胞和EPC細(xì)胞占淋巴細(xì)胞數(shù)的百分含量進(jìn)行測(cè)定[7]。注意觀察記錄并分析比較。儀器:美國(guó)Becton Dickinson 公司Accuri C6流式細(xì)胞儀。分析比較各組孕婦的一般臨床資料、血漿sICAM-1、sCD40L水平、血漿中Tang 細(xì)胞和EPC細(xì)胞含量的差異，并對(duì)血漿sICAM-1與sCD40L水平以及血漿中Tang 細(xì)胞含量和EPC細(xì)胞含量之間的相互關(guān)系進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,計(jì)數(shù)資料以例數(shù)(百分?jǐn)?shù))的形式表示，采用χ2檢驗(yàn)對(duì)計(jì)數(shù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；計(jì)量資料采用(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)表示,統(tǒng)計(jì)分析采用t檢驗(yàn)，多組間比較行方差分析(F檢驗(yàn))；采用Pearson檢驗(yàn)對(duì)患者血漿sICAM-1、sCD40L水平間相互關(guān)系及血漿中Tang 細(xì)胞和EPC細(xì)胞含量的相互關(guān)系進(jìn)行相關(guān)性分析。以P值<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較

重度子癇前期組、輕度子癇前期及對(duì)照組患者年齡、BMI、檢測(cè)孕周等臨床一般資料比較，均無(wú)顯著性差異(P>0.05)；三組研究對(duì)象收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓及分娩孕周比較存在顯著差異(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 三組患者的一般資料比較

注：*P<0.05,表示與對(duì)照組相比；#P<0.05,表示與輕度子癇前期組相比。

2.2 三組患者的血漿sICAM-1、sCD40L水平及血管內(nèi)皮損傷相關(guān)細(xì)胞EPC、Tang含量比較

重度子癇前期組與輕度子癇前期組的血漿sICAM-1 、sCD40L水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.05) ，同時(shí)，重度子癇前期組上述指標(biāo)顯著高于輕度子癇前期組(P<0.05) 。重度子癇前期組及輕度子癇前期組EPC、Tang含量均明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，重度子癇前期組和輕度子癇前期組上述指標(biāo)相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05) 。見(jiàn)表2。

表2 三組患者的血漿sICAM-1、sCD40L水平及血管內(nèi)皮損傷相關(guān)細(xì)胞EPC、Tang含量比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與輕度子癇前期組比較，#P<0.05

2.3 相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，健康對(duì)照組孕婦血漿EPC細(xì)胞含量與Tang細(xì)胞含量及血漿sICAM-1水平與sCD40L水平均無(wú)明顯相關(guān)性；重度子癇前期組、輕度子癇前期組孕婦血漿EPC細(xì)胞含量和Tang細(xì)胞含量呈正相關(guān)(r=0.654，P<0.05)，且兩組孕婦血漿sICAM-1水平與sCD40L水平也呈正相關(guān)(r=0.624;P<0.05)。

3 討論

臨床研究表明，子癇前期病情的發(fā)生和發(fā)展與血管內(nèi)皮損傷、血管活性物質(zhì)失衡、免疫異常、凝血功能障礙、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等多種病理因素密切相關(guān)。血管內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷為其發(fā)病機(jī)制的重要環(huán)節(jié)。

CD40L 為機(jī)體重要炎癥介質(zhì)，炎癥反應(yīng)激活后通常以sCD40L形式存在，sCD40L參與體內(nèi)的體液免疫、炎癥、血管發(fā)生、動(dòng)脈粥樣硬化等多種病理生理過(guò)程。sICAM-1為介導(dǎo)黏附反應(yīng)重要的一個(gè)黏附分子，主要通過(guò)結(jié)合血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)應(yīng)抗體介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間或細(xì)胞與基質(zhì)間相互接觸和結(jié)合，從而參與血管生成、細(xì)胞組織生長(zhǎng)及分化、炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答及腫瘤轉(zhuǎn)移等生理病理過(guò)程，sICAM-1 在靜息的血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)水平較低[8]。研究發(fā)現(xiàn)，sCD40L與子癇前期患者血管內(nèi)皮功能損傷密切相關(guān)，子癇前期患者早期出現(xiàn)臨床癥狀前一周患者血漿sICAM-1會(huì)出現(xiàn)異常增高[9]。本研究對(duì)本院收治的子癇前期患者為研究對(duì)象，并對(duì)患者血漿sICAM-1、sCD40L水平及血管內(nèi)皮損傷細(xì)胞含量進(jìn)行了檢測(cè)并予以統(tǒng)計(jì)分析，旨在探討血漿sCD40L、sICAM-1和血管內(nèi)皮損傷相關(guān)細(xì)胞與子癇前期嚴(yán)重程度的相關(guān)性，研究結(jié)果顯示，重度子癇前期組、輕度子癇前期及對(duì)照組患者年齡、BMI、檢測(cè)孕周等臨床一般資料比較，均無(wú)顯著性差異(P>0.05)；三組患者收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓及分娩孕周比較存在顯著差異。子癇前期組的血漿sICAM-1、sCD40L水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，同時(shí)輕度子癇前期組上述指標(biāo)明顯高于對(duì)照組(P<0.05) 。提示隨著疾病嚴(yán)重程度增加，孕婦血漿sICAM-1、sCD40L水平顯著增高，反映子癇前期孕婦體內(nèi)存在炎癥反應(yīng)，sICAM-1 、sCD40L水平可能參與了子癇前期的發(fā)病，可作為子癇前期疾病嚴(yán)重程度、血管內(nèi)皮損傷程度的重要監(jiān)測(cè)指標(biāo)。分析發(fā)現(xiàn)sICAM-1、sCD40L的過(guò)度表達(dá)能通過(guò)促進(jìn)母體體內(nèi)白介素和腫瘤壞死因子等炎癥介質(zhì)的釋放，激活機(jī)體炎癥反應(yīng)，同時(shí)造成機(jī)體局部尤其是胎盤(pán)組織免疫失衡致使胎盤(pán)組織缺血缺氧形成血管灌注功能障礙，嚴(yán)重?fù)p傷血管內(nèi)皮功能，最終使得患者表現(xiàn)為血管小動(dòng)脈痙攣，誘發(fā)子癇前期。

EPC細(xì)胞為血管內(nèi)皮祖細(xì)胞，能夠分化成血管內(nèi)皮細(xì)胞，與機(jī)體血管損傷密切相關(guān)。研究表明，EPC細(xì)胞能夠促進(jìn)胚胎血管細(xì)胞繁殖增生，同時(shí)對(duì)于損傷的血管壁具有一定的修復(fù)功能[10]。臨床實(shí)踐中，對(duì)EPC細(xì)胞檢測(cè)能夠?yàn)楣谛牟　⑷毖匝懿　⒃l(fā)性高血壓等血管內(nèi)皮損傷疾病提供重要的診療依據(jù)，而子癇前期發(fā)病的中心環(huán)節(jié)為血管內(nèi)皮損傷，因此，子癇前期病情的發(fā)生和發(fā)展可能與EPC細(xì)胞的衰竭以及異常表達(dá)相關(guān)。Tang細(xì)胞遷移能力較強(qiáng)，通過(guò)釋放促血管生成因子促進(jìn)血管新生[11]。此外，相關(guān)報(bào)道表明，Tang細(xì)胞的表達(dá)與EPC細(xì)胞早期的分化密切相關(guān)，二者均與機(jī)體血管內(nèi)皮損傷密切相關(guān)[12]。本文研究結(jié)果顯示，重度子癇前期組及輕度子癇前期組EPC、Tang含量均明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，提示EPC、Tang含量與子癇前期疾病的發(fā)生和發(fā)展存在密切聯(lián)系，二者可作為子癇前期的重要臨床監(jiān)測(cè)指標(biāo)。分析認(rèn)為Tang及EPC細(xì)胞減少，血管生成因子表達(dá)降低，造成胎盤(pán)組織血管密度降低，進(jìn)而引起血流灌注降低胎盤(pán)缺血缺氧，最終致使血管內(nèi)皮損傷誘發(fā)子癇前期。相關(guān)報(bào)道表明，Tang及EPC細(xì)胞的異常表達(dá)還會(huì)激活母體炎癥反應(yīng)，引起母體免疫系統(tǒng)失衡，使T細(xì)胞向Th1型漂移，Th1、Th17含量也升高，從而誘發(fā)子癇前期[13]。但重度子癇前期組和輕度子癇前期組上述指標(biāo)相比較均無(wú)明顯差異(P>0.05) ，可能由于本文納入研究樣本數(shù)量過(guò)少所致。

綜上所述，子癇前期孕婦外周血EPC和Tang細(xì)胞含量明顯降低，而血漿sICAM-1、sCD40L水平明顯升高，二者可能通過(guò)誘發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞損傷進(jìn)而影響機(jī)體免疫和炎癥反應(yīng)參與子癇前期的發(fā)病過(guò)程。且血漿sCD40L、sICAM-1及血管內(nèi)皮損傷相關(guān)細(xì)胞水平變化與子癇前期嚴(yán)重程度密切相關(guān)。

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The analysis of correlation between sCD40L,sICAM-1,EPC and angiogenic T cells with the severity of preeclampsia

XUEFeng,YANYuan,HEPan.

(LaboratoryMedicineofMaternalandChildHealthHospitalofSichuaProvince，Chengdu610041,China)

Objective To explore the correlation between sCD40L,sICAM-1,EPC and angiogenic T cells with the severity of preeclampsia.Methods 45 patients diagnosed with severe preeclampsia( SPE group) ,45 patients diagnosed with mild preeclampsia (MPE group) and 45 healthy pregnant women(Control group) of similar age,BMI and gestational age were selected as the research object.The level of sICAM-1 and sCD40L in the three groups were determinated by ELISA,and the percentage of EPC and Tang were determinated by flow cytometry,then analysed the correlation between sCD40L,sICAM-1,EPC and angiogenic T cells.Results The level of sICAM-1 and sCD40L in preeclampsia group was significantly higher than control group,the above indexes in the SPE group was significantly higher than those in MPE group (P<0.05).The percentage of EPC and Tang cells in MPE group and SPE group were significantly lower than those in the control group (P<0.05),but no difference was found on the above indexes between MPE group and SPE group (P>.05).There was no correlation between the sICAM-1 level and sCD40L level,the percentage of EPC and Tang cells in the control group (P>.05).There was positive correlation between the percentage of EPC and Tang cells in the SPE group and MPE group (P<0.05).And the positive correlation between sICAM-1level and sCD40L level were proved respectively in the SPE group and MPE group (P<0.05).Conclusion The number of EPC and Tang had decreased significantly,while the level of sICAM-1 and sCD40L had increased,it might induce endothelial injury to affects the immune and inflammatory responses in the pathogenesis of preeclampsia.The level of sICAM-1 and sCD40L,the percentage of Tang and EPC had some correlation with the severity of preeclampsia.

sICAM-1；sCD40L；T-lymphocyte subsets；Endothelial progenitor cells；preeclampsia

1007-4287(2017)03-0464-04

R714.24+5

A

2016-04-14)